يهدف هذا البروتوكول إلى تداعي قلب ورئتي الفئران. يمكن أن تكون سقالات المصفوفة خارج الخلية الناتجة (ECM) ملطخة بالمناعة ومصورة لرسم خريطة لموقع وتضاريم مكوناتها.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
إلغاء التفكيك لمجمع مورين لأمراض القلب والعقد
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
نقدم هنا بروتوكول التفكيك لقلب الفأر والرئتين. وتنتج سقالات ECM الهيكلية التي يمكن استخدامها لتحليل طوبولوجيا ECM وتكوينها. وهو يقوم على إجراء جراحي دقيق مصمم لقسطرة القصبة الهوائية والأورطة من فأر القتل الرحيم لتشويش القلب والرئتين مع عوامل التفكيك. يمكن أن يكون مجمع القلب الرئوي الديسيلي في وقت لاحق ملطخا بالمناعة للكشف عن موقع بروتينات ECM الهيكلية. يمكن الانتهاء من الإجراء بأكمله في 4 أيام.
سقالات ECM الناتجة عن هذا البروتوكول خالية من التشوهات الأبعاد. غياب الخلايا يتيح الفحص الهيكلي للهياكل ECM وصولا الى قرار submicron في 3D. يمكن تطبيق هذا البروتوكول على الأنسجة السليمة والمرضية من الفئران التي لا تتجاوز أعمارهم 4 أسابيع ، بما في ذلك نماذج الماوس من التليف والسرطان ، مما يفتح الطريق لتحديد إعادة عرض ECM المرتبطة بمرض القلب والكون.
المقدمة
و ECM هي شبكة ثلاثية الأبعاد مصنوعة من البروتينات والجلوكان التي تستوعب جميع الخلايا في كائن متعدد الخلايا، وإعطاء الأعضاء شكلها وتنظيم سلوك الخلية طوال الحياة1. من تخصيب البويضة فصاعدا، تقوم الخلايا ببناء وإعادة تشكيل ECM، وبالتالي يتم التحكم فيها بدقة من قبلها. الغرض من هذا البروتوكول هو فتح طريقة لتحليل خريطة الفأر ECM ، حيث أن الفئران هي الكائن الحي النموذجي الأكثر استخداما في الفيزيولوجيا المرضية للثدييات.
وكان الدافع وراء تطوير هذه الطريقة هو الحاجة إلى توصيف وعزل ECM2 الأصلي المرتبط بالنقائل. نظرا لأن الأورام تفتقر إلى الأوعية الدموية التشريحية المناسبة والفئران هي كائنات صغيرة نسبيا ، فقد تم تصميم الإجراءات الجراحية الدقيقة لقسطرة الشريان الأورطي إلى الوراء ، مع عزل دوران الأوعية الرئيسية المؤدية إلى الورم (على سبيل المثال ، الأوردة الرئوية) ، وبالتالي تركيز تدفق الكاشف والسماح بإزالة الورم. تنتج هذه الطريقة سقالات ECM مع هيكل محفوظ2 يمكن أن يكون ملطخا بالمناعة ومصورا ، مما يسمح برسم خرائط بنية ECM بتفاصيل submicron. لتنفيذ هذا البروتوكول، من الضروري اكتساب المهارات الجراحية والجراحية الدقيقة (تشريح، والتسوية الدقيقة والقسطرة) التي قد تمثل قيدا محتملا على استخدامه. على حد علمنا، تمثل هذه الطريقة أحدث ما في تحليل تصوير بنية ECM الأصلي2,3.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وقد تم استعراض جميع الإجراءات المدرجة هنا والموافقة عليها من قبل اللجنة الأخلاقية التي تنظم الطب التجريبي في جامعة كوبنهاغن وتتفق مع التشريعات الدنماركية والأوروبية. لإثبات هذا البروتوكول ، استخدمنا فئران BALB / cJ الأنثوية من عمر 8-12 أسبوعا وفأرة أنثى MMTV-PyMT تبلغ من العمر 11 أسبوعا.
ملاحظة: تجنب التلوث البكتيري سقالة ECM decellularized يعطي أفضل نتيجة التصوير ويسمح تخزين عينة على المدى الطويل. ولذلك فمن المهم للحفاظ على جميع الخطوات عقيمة. على هذا النحو، يجب أن تكون جميع الأدوات والمواد الجراحية، بما في ذلك خياطة، خياطة صغيرة، والحلول، والأنابيب، موصلات لوير والقسطرة، عقيمة. يجب تطهير الأسطح ، بما في ذلك صينية البوليسترين ، بالإيثانول بنسبة 70٪ ، ويفضل أن يتم التشوه تحت غطاء تدفق صفح. جميع الإجراءات تتم في درجة حرارة الغرفة ما لم ينص على خلاف ذلك.
1. الجراحة المجهرية بعد الوفاة
- قتل الفأر باستخدام غرفة ثاني أكسيد الكربون.
- ضع الماوس في غرفة 4 لتر، وابدأ في ملء مع CO2 100٪، بدءا من 0.2 لتر / دقيقة لمدة 2 دقيقة، وزيادة حتى تصل إلى تدفق 0.8 لتر / دقيقة بعد 3 دقائق. يجب أن يسقط الماوس فاقدا للوعي خلال أول دقيقتين ، ثم يجب أن يتوقف التنفس (عادة حوالي 5 دقائق ، ولكن يمكن الحفاظ على التدفق حسب الضرورة). تأكيد الوفاة قبل الانتقال إلى الخطوة التالية.
- حلق الصدر والبطن وظهر الماوس مع مقص الشعر وتطهير مع الإيثانول 70٪. الحلاقة يقلل كثيرا من عدد القطع الأثرية بسبب وجود الشعر إما على عينات للتصوير أو التحليل الكيميائي الحيوي.
- دبوس الماوس إلى صينية البوليسترين، وتمديد المصابيح الأمامية و hindlimbs، فضلا عن رأسه والذيل. ضعه تحت مجهر الجراحة المجهرية.
- باستخدام مقص نمط مستقيم مايو إنشاء الوصول الجراحي مع شق جلدي يمتد من المنطقة تحت الفك السفلي إلى أسفل البطن وتشريح تحت الجلد لفضح جدار الصدر والحمور.
- باستخدام مقص جراحي دقيق، وقطع العضلات الصدرية الرئيسية والصدرية طفيفة على طول الفضاء الوربي السادس على جانبي الجدار الصدري.
- باستخدام مقص نمط مستقيم، وقطع القص على طول الشقوق السابقة، ومن ثم إكمال استئصال القص عن طريق قطع القص على طول محورها الطويل، ثم رفع ودبوس كلا الجانبين من الجدار الصدري لفضح مجمع القلب والعظمة.
- باستخدام ملقط صغير مستدير الرؤوس (أو ملقط صغير من Dumont) ، اقتطع الغدة الصعترية والأنسجة الدهنية المحيطة بها عن طريق سحبها بدقة من ملحقاتها. هذا سيكشف عن السفن الرئيسية.
- باستخدام الكي، الكي الوريد كافا تنازلي و، وذلك باستخدام مقص نمط مستقيم، وقطع المريء.
- باستخدام ملقط صغير حاد ، افصل الأوردة البراتشيوسيفية والبراتشيوسيفال ، وترك الشرايين السباتية الشائعة واليسارية من الأنسجة الأساسية لتسهيل الربط والكي.
- باستخدام حامل الإبرة الدقيقة ، ملقط صغير حاد و 9-0 غرز خياطة مكان فوق ظهور brachiocephalic ، تركت الشرايين السباتية الشائعة واليسارية تحت الترقوة.
- كي الأوردة العضدية.
- فصل الغدد اللعابية تحت الفك السفلي على طول خط الوسط لفضح عضلات الرقبة والرغامى. فصل العضلات لفضح الرباط الكريكوثيرويد. باستخدام مقص صغير، افتح مدخلا عن طريق تقسيم الرباط.
- إدخال قسطرة 27 G في القصبة الهوائية ودفع بدقة حتى فروع القصبة الهوائية في القصبات الهوائية (أي، حتى يتم الوفاء بمقاومة القسطرة، ثم تراجع 3 ملم). كن حذرا من تعطيل الشعب الهوائية. باستخدام خياطة 6-0، ضع 3 غرز حول القصبة الهوائية لتأمين القسطرة.
- قسم الماوس في ذروة الفقرة الصدرية 12th. الشريان الأورطي التنازلي يمتد بشكل مسبق إلى العمود الفقري وينبغي تقسيمه هنا جنبا إلى جنب مع العمود الفقري. تعيين النصف السفلي بعيدا.
- القسطرة إلى الوراء الشريان الأورطي ودفع القسطرة حتى تصل إلى القوس الأبهري. باستخدام خياطة 9-0، ضع 4 غرز حول الشريان الأورطي، بداية من 5 مم تحت طرف القسطرة.
2. التفكيك
- قم بتوصيل الماوس بنظام مضخة باستخدام أنابيب السيليكون وموصلات Luer. Perfuse مع الماء deionized في 200 ميكرولتر / دقيقة لمدة 15 دقيقة. الاحتفاظ بمعدل التدفق هذا أثناء التفكيك.
- تغيير عامل التغلغل إلى 0.5٪ ديوكسيكولات الصوديوم (DOC) المخفف في الماء deionized وتغلغل بين عشية وضحاها.
- تغيير عامل التشوه إلى 0.1٪ من كبريتات دودسيل الصوديوم (SDS) المخفف في الماء التأين والتشويش لمدة 8 ساعات.
- Perfuse مع المياه deionized بين عشية وضحاها لغسل SDS وDOC لمدة 24 ساعة.
- إعادة استئصال القلب والرئتين decellularized عن طريق تقسيم ملحقاتها إلى الصدر باستخدام مقص منحني وتخزينها في أنبوب التبريد العقيم مع الماء deionized مع 1٪ (v/v) البنسلين-streptomycin و 0.3 ميكرومتر الصوديوم azide في 4 درجة مئوية يمكن تخزين سقالات ECM لمدة 12 أسبوعا على الأقل. إذا كان سيتم استخدام السقالة للتحليل الكيميائي الحيوي (على سبيل المثال، قياس الطيف الكتلي)، تجميد المفاجئة في النيتروجين السائل.
3. التثبيط المناعي
- تخطيط التصوير: تحديد الأجسام المضادة الأولية (أو الأجسام المضادة) والجمع بين الأجسام المضادة الثانوية المترافقة الفلورية لتتناسب مع بعضها البعض وتتناسب مع خطوط الليزر من المجهر الفلوري.
- منع العينة عن طريق غمرها في cryotube تحتوي على 6٪ (v/v) مصل حمار - 3٪ (ث / v) ألبوم مصل البقر (BSA) بين عشية وضحاها.
- احتضان مع الأجسام المضادة الأولية (أو الأجسام المضادة) في مصل الحمير 3٪ في برنامج تلفزيوني لمدة 24 ساعة.
- غسل 5 مرات لمدة 1 ساعة في كل مرة في 0.05٪ توين 20 في برنامج تلفزيوني (PBST).
- احتضان العينة مع الأجسام المضادة الثانوية المقترنة الفلورية (أو الأجسام المضادة) في مصل حمار 3٪ في برنامج تلفزيوني لمدة 24 ساعة.
- غسل 5 مرات لمدة ساعة واحدة في 0.05٪ (PBST). انتظر 1 ساعة بين كل غسل.
- أضف الماء المؤين واحفظه على بعد 4 درجات مئوية من الضوء المباشر. عند هذه النقطة ، سقالة على استعداد للصورة.
4. التصوير
- ضع العينة في طبق ذو قاع زجاجي وترطيبها بقطرات من محلول التخزين (PBS أو الماء المؤين).
- إعداد الهدف. نوصي باستخدام هدف غمر المياه.
- فحص العينة باستخدام ضوء مضان.
- التبديل إلى التحكم في الكمبيوتر. قم بتشغيل الليزر وضبط كثافة الليزر وفتحة الثقب والأطوال الموجية للكاشفات والكسب والدقة والتكبير. تعيين رقم وحجم الخطوة ل z-المكدس وبدء الاستحواذ. نوصي باستخدام الإثارة بالليزر متعددة الفوتون لزيادة اختراق الأنسجة وتقليل تشتت الضوء والتبييض وتلف الأنسجة.
5. تلطيخ هيماتوكسيلين إيوزين
- استئصال 1 فص الرئة من فأر القتل الرحيم.
- ضعه في 10 مم × 10 مم × 5 مم كريومولد وغطيه بما يقرب من 500 ميكرولتر من مركب OCT.
- تجميد على الجليد الجاف (-70 درجة مئوية) والحفاظ على العينة في تلك الدرجة حرارة.
- استئصال واحد فص الرئة decellularized من الماوس المعالجة وفقا للخطوة 2.5.
- ضعه في cryomold مع أكبر مساحة سطحية لأسفل وغطيه بمجمع OCT كما هو محدد في الخطوة 5.2.
- تجميد على الجليد الجاف (-70 درجة مئوية) والحفاظ على العينة في تلك الدرجة الحرارة حتى المطلوبة خلاف ذلك. يمكن تخزين العينة لمدة 12 أسبوعا على الأقل.
- كتل الأنسجة المجمدة القسم في -20 درجة مئوية في cryostat مع سمك 5 ميكرومتر ووضع أقسام على الشرائح الزجاجية اللاصقة وتخزينها في -80 درجة مئوية.
- خذ الشرائح إلى درجة حرارة الغرفة حتى يجف الهواء (حوالي 20 دقيقة).
- تزج قريبا في برنامج تلفزيوني وإصلاح عن طريق غمر الشرائح في 4٪ paraformaldehyde في برنامج تلفزيوني لمدة 15 دقيقة. يغسل مرة واحدة في برنامج تلفزيوني لمدة 5 دقائق، ثم مرتين في الماء المقطر لمدة 5 دقائق.
- تزج في محلول الهيماتوكسيلين ماير لمدة 10 دقيقة. هذه المرة يمكن تحسين وفقا لمصدر الأنسجة وإعداد وصمة عار.
- يغسل في جرة كوبلين تحت الماء المقطر الجاري لمدة 10 دقائق.
- تزج في حل إيوسين لمدة 7 دقائق. هذه المرة يمكن تحسين وفقا لمصدر الأنسجة وإعداد وصمة عار.
- تراجع في الإيثانول 50٪ لإزالة اليوسين الزائد والجفاف عن طريق الانخفاض قريبا في الإيثانول 70٪، وفي 96٪ و 100٪ الإيثانول لمدة 30 ثانية. تراجع في الزيلين عدة مرات.
- تطبيق بضع قطرات من DPX تصاعد المتوسطة ووضع غطاء الزجاج.
- اترك الشرائح لتجف بين عشية وضحاها تحت غطاء محرك السيارة الكيميائي.
- مسح الشرائح ضوئيا في ماسح ضوئي للشرائح.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
الديسيلولارات القلبية الرئوية
بعد الانتهاء بنجاح من البروتوكول، والقلب والرئتين، فضلا عن الأنسجة الملحقة مثل القوس الأبهري، وسوف تكون خالية من الخلايا. يمكن التحقق من صحة Decellularization عن طريق تلطيخ hematoxylin-eosin (الشكل 1) من سقالات ECM التي تظهر إزالة النواة مقارنة بالأنسجة الأصلية. تحتفظ هذه السقالات بأبعاد الأعضاء الطازجة وهيكل ECM غير القابل للذوبان سليم2. يظهر الشكل 2 تمثيل...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
تقنيات إزالة الخلايا على أساس هياج الأنسجة تغيير هيكل ECM، مما يجعلها غير مناسبة لتحليل هيكل ECM4. الارتهاق الارتخائي ، باستخدام مسار تشريحي مثل الشريان الأورطي للرغامى ، يسمح بالوصول إلى السرير الشعري ، أو الحويصلات الهوائية الطرفية ، ويسهل تسليم عوامل التفكيك في جميع أنحاء الجهاز. استخدام المنظفات zwitterionic، أنيوني وغير أيونية لdeellularize الأنسجة هو المبلغ عنها4،5،6، ومع ذلك، الصوديوم دودسيل كبريتا...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.
شكر وتقدير
نشكر البروفيسور إيفانا نوفاك والدكتورة نين مين كريستنسن (مركز التصوير الحيوي المتقدم (CAB)، جامعة كوبنهاغن) على توفير الوصول إلى المجهر. وقد دعم هذا العمل مجلس البحوث الأوروبي (ERC-2015-CoG-682881-MATRICAN؛ AEM-G، OW، RR و JTE)؛ منحة دكتوراه من مؤسسة لوندبيك (R286-2018-621؛ MR)؛ مجلس البحوث السويدي (2017-03389؛ آلية التنمية النظيفة)؛ الجمعية السويدية للسرطان، Cancerfonden (CAN 2016/783، 19 0632 Pj، 190007؛ آلية التنمية النظيفة)؛ المعونة الألمانية لمكافحة السرطان (دويتشه كريبشيلفي؛ RR)؛ وجمعية السرطان الدنماركية (R204-A12454; RR).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| خياطة <قوية > جراحة مجهرية < / قوية > | |||
| 6-0 ، إبرة مقطع مثلثة (فيكريل) | إيثيكون | 6301124 | |
| 9-0 خياطة دقيقة (سافيل) | بي براون | G1048611 | |
| ملقط أدسون | أدوات العلوم الدقيقة | 11006-12 | |
| ملقط أدسون بالأسنان | أدوات العلوم الدقيقة | 11027-12 | |
| حامل الإبرة الدقيقة Castroviejo | أدوات العلوم الدقيقة | رقم 12061-01 | |
| CO2 غرفة تهوية للقتل الرحيم للفأر | |||
| الماء منزوع الأيونات (Milli-Q IQ 7000 ، نظام مياه المختبر فائق النقاء) | علبة البوليسترين القابل للتصرف Merck | ZIQ7000T0 | |
| (~ 30 مرات ؛ 50 سم) | |||
| مجهر التشريح (Greenough ، مع ذراعين معقوفين) | Leica | S6 D | |
| ملعقة صغيرة مزدوجة النهايات | أدوات العلوم الدقيقة | 10091-12 | |
| ملقط دومون (اثنان) | أدوات العلوم الدقيقة | 11252-20 | |
| ملقط دومون الدقيق مع 45 درجة ؛ نصائح (اثنان) | أدوات العلوم الدقيقة | 11251-35 | |
| ماكينة قص الشعر | Oster | 76998-320-051 | |
| حامل إبرة Halsey (مع فكوك كربيد التنجستن) | أدوات العلوم الدقيقة | 12500-12 | |
| قسطرة قياس 24 في الوريد (Insyte) | BD | 381512 | |
| قسطرة قياس 26 في الوريد (Terumo) | Surflo-W | SR +DM2619WX | |
| مقص مايو (قطع قوي ، مستقيم) | أدوات العلوم الدقيقة | 14110-15 | |
| ملقط دقيق بأطراف حلقية (اثنان) | مقص زنبركي صغير Aesculap | FM571R | |
| (Vannas ، منحني) | أدوات العلوم الدقيقة | 15001-08 | |
| Minicutter | KLS Martin | 80-008-03-04 | |
| Molt Periostotome | Aesculap | D0543R | |
| الإبر (مقياس 27 ؛ Microlance) | د.ب | 21018 | |
| منشفة ورقية (معقمة) أو منديل جراحي | |||
| مقص مسنن (CeramaCut ، مستقيم) | أدوات العلوم الدقيقة | 14958-09 | |
| ملعقة (Freer-Yasargil) | Aesculap | OL166R | |
| (1 مل ؛ Plastipak) | BD | 3021001 | |
| المحاقن (10 مل ؛ Plastipak) | BD | 3021110 | |
| مقص الوتر (والتون) | أدوات العلوم الدقيقة | 14077-09 | |
| <قوي> IMMUNOSTAINING< / strong> | |||
| Alexa Fluor 488 حمار مضاد لخنزير غينيا IgG | Thermo Fisher Scientific | A-11055 | |
| Alexa Fluor 594 حمار مضاد للأرانب IgG | Life Technologies | A11037 | |
| BSA (جزء الألبومين البقري V ، الصف القياسي ، المجفف بالتجميد ) ؛ | Serva | 11930.03 | |
| الكولاجين IV الأجسام المضادة متعددة النسيلة (RRID: AB_2276457) | Millipore | AB756P | المضيف: أرنب |
| PBS (درجة الحموضة 7.4 ، 10 مرات ؛ Gibco) ؛ | Thermo Fisher Scientific | 70011044 | Host: الماعز |
| بيريوستين الجسم المضاد متعدد النسيلة (هدية لطيفة من مانويل كوخ. RRID: AB2801621) | المضيف: خنزير غينيا | ||
| مشرط يمكن التخلص منه بشفرة رقم 11 (قطعة. 10) | VWR | 233-5364) مصل | |
| (مصل حمار عادي) ؛ | Jackson ImmunoResearch | 017-000-121 | |
| Tween 20 | Sigma-Aldrich | P9416-50ML | |
| strong>IMAGING | |||
| أجهزة الكشف (كاشف هجين (Leica ، نموذج HyD S) وأنابيب المضاعف الضوئي (PMTs) | Leica | ||
| مصدر ضوء الفلورة | لايكا | EL6000 | |
| المجهر (المجهر متعدد الفوتون المقلوب) | Leica | SP5-X MP | |
| الهدف (لامدا الأزرق ، 20 مرة؛ ، 0.70 فتحة عددية (NA) IMM Uف) ؛ | Leica | HCX PL APO | |
| ثنائي الفوتون Ti & ndash ؛ ليزر الياقوت (فيزياء الأطياف ، نموذج ماي تاي ديب سي) | |||
| ليزر الضوء الأبيض (WLL) | Leica | ||
| <قوي>إزالة الخلايا < / قوي > | |||
| 70٪ إيثانول (الكحول المطلق 99.9٪) ؛ يجب تعديل الكحول المطلق إلى 70٪ (حجم / حجم) باستخدام الماء منزوع الأيونات ؛ | البرقوق | 1680766 | |
| منزوع الأيونات (Milli-Q IQ 7000 ، نظام مياه المختبر عالي النقاء) | تجهيزات الذكور | Merck ZIQ7000T0 | |
| Luer-to-tubing (1/8 بوصة) | World Precision Instruments | 13158-100 | |
| PBS (درجة الحموضة 7.4 ، 10 مرات ؛ Gibco) ؛ | Thermo Fisher Scientific | 70011044 | |
| البنسلين والستربتومايسين | جيبكو | 15140122 | |
| مضخة التمعج (مع 12 قناة) أنابيب | Ole Dich | 110AC (R) 20G75 | |
| (مع معرف 2 مم و 4 مم OD) | Ole Dich | 31399 | |
| Sodium Azide | Sigma-Aldrich | 08591-1ML-F | |
| deoxycholate الصوديوم (DOC) | Sigma-Aldrich | D6750-100G | |
| كبريتات دوديسيل الصوديوم | سيجما ألدريتش | L3771-500G | |
| H& E STAINING< / قوي > | |||
| 4٪ PFA | فيشر Scientific | 15434389 | |
| 96٪ إيثانول | برقوق | 201446-5L | |
| الإيثانول المطلق | البرقوق | 201152-1L | |
| أغطية (24 × 50 مم ؛ 1000 قطعة) | Hounisen | 422.245 | |
| Cryomolds متوسط (15 × 15 × 5 مم ؛ 100 قطعة) | Tissue-Tek | 4566 | |
| Cryostat | Leica | CM3050S | |
| DPX تصاعد متوسط | Hounisen | 1001.0025 | |
| محلول Eosin Y كحولي 0.5٪ | Sigma | 1024390500 | |
| شفرة ريشة ميكروتوم من الفولاذ المقاوم للصدأ ، C35 (50 قطعة) | Pfm الطبية | 207500003 | |
شرائح Fisherbrand Superfrost Plus (25 × 75 مم ؛ 144 قطعة) | Thermofisher | 6319483 | |
| مايرز هيماتوكسيلين | سيجما | MHS32-1L | |
| OCT مركب | VWR | 361603E | |
| ماسح ضوئي للشرائح (نانوزومر) | Hamamatsu Photonics | ||
| Xylene | Sigma | 534056-4L |
المراجع
- Hynes, R. O. Extracellular matrix: not just pretty fibrils. Science. 326, 1216-1219 (2009).
- Mayorca-Guiliani, A. E., et al. ISDoT: in situ decellularization of tissues for high-resolution imaging and proteomic analysis of native extracellular matrix. Nature Medicine. 23, 890-898 (2017).
- Mayorca-Guiliani, A. E., et al. Decellularization and antibody staining of mouse tissues to map native extracellular matrix structures in 3D. Nature Protocols. 14, 3395-3425 (2019).
- White, L. J., et al. The impact of detergents on the tissue decellularization process: A TOF-sims study. Acta Biomaterialia. 50, 207-219 (2017).
- Ott, H. C., et al. Perfusion-decellularized matrix: using nature's platform to engineer a bioartificial heart. Nature Medicine. 14, 213-221 (2008).
- Uygun, B. E., et al. Organ re-engineering through development of a transplantable recellularized liver graft using decellularized liver matrix. Nature Medicine. 16, 814-820 (2010).
- Susaki, E. A., et al. Advanced CUBIC protocols for whole-brain and whole-body clearing and imaging. Nature Protocols. 10, 1709-1727 (2015).
- Tomer, R., Ye, L., Hsueh, B., Deisseroth, K. Advanced CLARITY for rapid and high-resolution imaging of intact tissues. Nature Protocols. 9, 1682-1697 (2014).
- Erturk, A., et al. Three-dimensional imaging of solvent-cleared organs using 3DISCO. Nature Protocols. 7, 1983-1995 (2012).
- Wershof, E., et al. A FIJI Macro for quantifying pattern in extracellular matrix. BioRxiv. , (2019).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
