يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

وضع متطلبات التلقيح في البرقوق الياباني من خلال الرصد الفينولوجي والتلقيح اليدوي والمجهر الفلوري وال جينوتيبينج الجزيئية

2.8K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/61897

⸱

نوفمبر 9, 2020

 ,  , 
1Unidad de Hortofruticultura, Centro de Investigación y Tecnología Agroalimentaria de Aragón (CITA), 2(CITA-Universidad de Zaragoza), Instituto Agroalimentario de Aragón - IA2, 3Departamento de Hortofruticultura, Centro de Investigaciones Científicas y Tecnológicas de Extremadura (CICYTEX), Instituto de Investigaciones Agrarias Finca La Orden

في هذه المقالة

ملخص

ويرد وصف منهجية لتحديد متطلبات التلقيح في الهجينة اليابانية من نوع البرقوق، والتي تجمع بين التلقيح الميداني والمختبري وملاحظات أنابيب حبوب اللقاح تحت المجهر الفلوري مع تحديد الأنماط الجينية Sبواسطة PCR ورصد المزهرة لاختيار الملقحات.

الملخص

أصناف البرقوق اليابانية التي تزرع عادة هي هجينة بين الأنواع المشتقة من الصلبان بين برينس ساليسينا الأصلي مع أنواع Prunus الأخرى. معظم الهجينة معرض gametophytic الذاتي عدم التوافق، والتي تسيطر عليها واحد ومتعدد الأشكال للغاية S-الموضعالذي يحتوي على أليلات متعددة. معظم الهجينة المزروعة هي ذاتية غير متوافقة وتحتاج حبوب اللقاح من متبرع متوافق لتسميد الزهور الخاصة بهم. أصبح وضع متطلبات التلقيح في البرقوق الياباني مهما بشكل متزايد بسبب العدد الكبير من أصناف جديدة مع متطلبات تلقيح غير معروفة. في هذا العمل، يتم وصف منهجية لتحديد متطلبات التلقيح في الهجينة اليابانية من نوع البرقوق. يتم تحديد التوافق الذاتي (في) عن طريق التلقيح اليدوي في كل من الحقل وفي المختبر ، يليه رصد استطالة أنبوب حبوب اللقاح مع المجهر الفلوري ، وكذلك مراقبة نضوج الفاكهة في هذا المجال. يتم تقييم اختيار أصناف التلقيح من خلال الجمع بين تحديد الأنماطالجينية S عن طريق تحليل PCR مع رصد الوقت المزهر في الميدان. معرفة متطلبات التلقيح من أصناف يسهل اختيار أصناف لتصميم بساتين جديدة ويسمح للكشف المبكر عن مشاكل الإنتاجية المتعلقة بنقص التلقيح في البساتين المنشأة.

المقدمة

البرقوق الياباني(برونوس ساليسينا ليندل.) هو مواطن في الصين1. في القرن التاسععشر ، تم إدخال هذا المحصول من اليابان إلى الولايات المتحدة ، حيث تم تقاطعه مع الخوخ ثنائي الدبلويد الأمريكي الشمالي الآخر2. فيالقرن العشرين، انتشرت بعض هذه الهجينة إلى المناطق المعتدلة في جميع أنحاء العالم. في الوقت الحاضر، يشير مصطلح "البرقوق الياباني" إلى مجموعة واسعة من الهجينة بين الأنواع المشتقة من الصلبان بين P. salicina الأصلي مع ما يصل إلى 15 ديبلويد برونوس SPP.3،4،5.

البرقوق الياباني، مثل الأنواع الأخرى من عائلة الوردية، والمعارض Gametophytic الذاتي عدم التوافق (GSI)، والتي تسيطر عليها واحد ومتعدد الأشكال S-الموضعالذي يحتوي على أليلات متعددة6. يحتوي S-locus على جينين يرمزان إلى ريبونوكليز(S-RNase)المعبر عنه في الحوت ، وبروتين F-box (SFB) المعبر عنه في حبوب اللقاح7. في رد فعل عدم التوافق الذاتي، عندما S-أليل أعرب في حبوب اللقاح (haploid) هو نفس واحد من اثنين أعرب في pistil (diploid)، يتم القبض على نمو أنبوب حبوب اللقاح عبر النمط بسبب تدهور الحمض النووي الريبي أنبوب حبوب اللقاح من خلال عمل S-RNase8. وبما أن هذه العملية تمنع تخصيب الغاموتوفيت الأنثوي في البويضة، فإن مؤشر GSI يعزز التقاطع بين الأصناف.

على الرغم من أن بعض أصناف البرقوق اليابانية متوافقة مع نفسها ، إلا أن معظم أصناف الأصناف التي تزرع حاليا غير متوافقة مع نفسها ، وتحتاج إلى حبوب اللقاح من المتبرعين المتوافقين مع بعضها البعض لتسميد أزهارها3. في أنواع الفاكهة الحجرية من جنس Prunus مثل اللوز9، المشمش10،11،12 والكرز الحلو13، يمكن إنشاء متطلبات التلقيح من أصناف من قبل نهج مختلفة. يمكن تحديد التوافق الذاتي (في) عن طريق التلقيح الذاتي للزهور في الميدان والرصد اللاحق لمجموعة الفاكهة ، أو عن طريق التلقيح الذاتي شبه في الجسم الحي في ظروف خاضعة للرقابة في المختبر ومراقبة أنابيب حبوب اللقاح تحت المجهر14،15،16،17،18 . يمكن تحديد علاقات عدم التوافق بين أصناف عن طريق التلقيح عبر في الميدان أو المختبر باستخدام حبوب اللقاح من أصناف التلقيح المحتملة، ومن خلال تحديد S-alleles من كل أصناف من قبل تحليل PCR14،15،16،19،20،21،22 . في أنواع مثل الكرز الحلو أو اللوز، يمكن أيضا تقييم التوافق الذاتي (في) من خلال تحديد أليليس S معينة المرتبطة التوافق الذاتي، كما S4' في الكرز الحلو13 أو Sو في اللوز23.

العديد من برامج تربية البرقوق من البلدان المنتجة الرئيسية هي الافراج عن عدد من أصناف جديدة2،14، وكثير منهم مع متطلبات التلقيح غير معروف. في هذا العمل، يتم وصف منهجية لتحديد متطلبات التلقيح في الهجينة اليابانية من نوع البرقوق. يتم تحديد التوافق الذاتي (في) عن طريق التلقيح الذاتي في كل من الحقل والمختبر ، تليها ملاحظات لأنابيب حبوب اللقاح تحت المجهر الفلوري. اختيار أصناف التلقيح يجمع بين تحديد S-genotypes بواسطة تحليل PCR مع رصد الوقت المزهرة في هذا المجال.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. التلقيح اليدوي في الميدان

  1. استخراج حبوب اللقاح
    1. للحصول على حبوب اللقاح، وجمع براعم الزهور في المرحلة D24، وفقا للمرحلة 57 على مقياس BBCH25،26.
      ملاحظة: براعم الزهور أكثر ضرورية في البرقوق الياباني مما كانت عليه في أنواع Prunus الأخرى لأن anthers تنتج حبوب اللقاح أقل.
    2. إزالة anthers باستخدام شبكة بلاستيكية (2 مم × 2 مم حجم المسام) ووضعها على الورق في درجة حرارة الغرفة لمدة 24 ساعة حتى dehiscence anther.
    3. غربال حبوب اللقاح من خلال شبكة ناعمة (0.26 مم × 0.26 مم حجم المسام)، والحفاظ عليها في أنبوب زجاجي 10 مل مع غطاء في 4 درجة مئوية حتى الاستخدام.
  2. تلقيح الزهور المهتحة
    1. عندما تكون نسبة تتراوح بين 10٪ إلى 20٪ من الزهور مفتوحة، حدد عدة فروع وحددها. إزالة الزهور المفتوحة والبراعم الشباب، وترك براعم الزهور فقط في المرحلة D24، وفقا للمرحلة 57 على مقياس BBCH25،26.
    2. إزالة بتلات، sepals، وstamens من بين 800 و 1000 براعم الزهور لكل علاج إما مع الأظافر أو ملاقط.
    3. تلقيح اليد ال pistils بمساعدة فرشاة طلاء غرامة 24 ساعة بعد الوهن. بعض الفروع التي تحتوي على نصف pistils مع حبوب اللقاح من نفس الصنف، والنصف الآخر مع حبوب اللقاح متوافقة من أصناف أخرى كعنصر تحكم. يجب الحرص على عدم تلويث الإصبع أو فرشاة الطلاء مع حبوب اللقاح من أصناف أخرى.
    4. سجل عدد أسبوعي من الزهور والفواكه النامية لتوصيف نمط قطرة الفاكهة وتحديد الفاكهة النهائية المنصوص عليها في كل علاج التلقيح.
  3. التلقيح التكميلي في الحقل
    1. قبل أيام قليلة من فتح الزهور الأولى ، أرفق أشجارا مختارة في قفص شبكي طوله 0.8 مم لتجنب وصول الحشرات الملقحة.
    2. عندما تكون الزهور مفتوحة بنسبة 10٪-20٪، حدد وسم عدة فروع لكل علاج تلقيح، وترك 1000-1500 زهرة لكل علاج.
    3. في اليوم التالي، عندما تكون الزهور مفتوحة، تلقيح كل زهرة بمساعدة فرشاة الطلاء مع حبوب اللقاح المقابلة (حبوب اللقاح من نفس الصنف للتلقيح الذاتي، ومن أصناف متوافقة أخرى مثل التحكم في التلقيح المتبادل).
    4. تلقيح كل يومين حتى تفتح جميع الزهور.
    5. سجل التهم الأسبوعية من الزهور وتطوير الفواكه من الإلحاد إلى الحصاد لتوصيف نمط قطرة الفاكهة وتحديد الفاكهة النهائية المنصوص عليها في كل علاج التلقيح.

2. التلقيح اليدوي في المختبر

  1. جمع 50-100 الزهور في المرحلة D24, وفقا للمرحلة 57 على مقياس بي بي سي25,26.
  2. في المختبر، يتم إزالة 30 زهرة لكل علاج (التلقيح الذاتي والمتصدي).
    ملاحظة: يجب أن يتم متابعة Emasculation بعناية لتجنب أي ضرر على pistils.
  3. جعل قطع جديدة على قاعدة كل pedicel زهرة تحت الماء قبل وضعه على قطعة من رغوة بائع الزهور الرطب (قطعة واحدة من الرغوة لكل علاج التلقيح).
  4. تلقيح اليد كل pistil 24 ساعة في وقت لاحق باستخدام فرشاة الطلاء غرامة مع حبوب اللقاح التي تم جمعها سابقا (انظر القسم 1.1). تلقيح مجموعة واحدة من pistils مع حبوب اللقاح من نفس الصنف، ومجموعة أخرى مع حبوب اللقاح من أصناف متوافقة كسيطرة.
  5. اترك ال pistils الملقح 72 ساعة بعد التلقيح في درجة حرارة الغرفة. يجب أن تكون رغوة الأزهار رطبة باستمرار بالماء.
  6. إصلاح pistils في حل التثبيت من الإيثانول / حمض الخليك (3:1) لمدة 24 ساعة على الأقل في 4 درجة مئوية. استبدال المثبت مع الإيثانول 75٪. يمكن حفظ العينات في هذا الحل عند 4 درجة مئوية حتى استخدام27.
    ملاحظة: تأكد من أن العينات مغمورة بالكامل في المحلول.

3. الملاحظات المجهرية

  1. تقييم إنبات حبوب اللقاح في المختبر
    1. لوضع حبوب اللقاح الإنبات المتوسطة، حل 25 غرام من السكروز على 250 مل من الماء المقطر، ثم إضافة 0.075 غرام من نترات الكالسيوم [Ca(NO3)2] و 0.075 غرام من حمض البوريك (H3BO3).
    2. إضافة 2 غرام من أجار إلى الحل وتخلط حتى يذوب تماما28.
    3. لتعقيم المتوسط، أوتوكلاف في 120 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. تبريد المتوسطة، وقبل أن يتماسك، وتوزيع 3 مل لكل طبق بيتري العقيمة (55 ملم × 12 ملم) في غطاء محرك السيارة تدفق صفح معقمة. بعد التصلب المتوسط، حافظ على أطباق بيتري ملفوفة في رقائق الألومنيوم عند 4 درجات مئوية حتى الاستخدام.
    4. نشر حبوب اللقاح من كل أصناف تستخدم سابقا كمتبرع حبوب اللقاح في التلقيحات الخاضعة للرقابة في اثنين من أطباق بيتري واحتضانها في 25 درجة مئوية لمدة 24 ساعة.
      ملاحظة: يمكن ملاحظة وسائط الثقافة الملقحة بالفحص المجهري مباشرة بعد أو تخزينها عند -20 درجة مئوية حتى الاستخدام. لهذا الغرض، يجب تغيير أطباق بيتري من الثلاجة إلى الثلاجة 24 ساعة قبل ملاحظات المجهر.
    5. لمراقبة حبوب اللقاح، وإعداد 1٪ (v/v) محلول أزرق أنيلين أن البقع الكالوز. أولا، إعداد 0.1 N فوسفات البوتاسيوم ثلاثي الفوسفات (K3PO4)حل عن طريق حل 7.97 غرام من K3PO4 في 1000 مل من الماء المقطر. لوضع 1٪ (v/v) الحل الأزرق الانيلين، حل 1 مل من الأزرق الانيلين في 100 مل من 0.1 N K3PO4.
    6. إضافة 2-3 قطرات من محلول الأزرق الانيلين لكل طبق بيتري لوحة ومراقبة بعد 5 دقائق تحت المجهر uv epifluorescence باستخدام مرشح مثير BP340-390 ومرشح حاجز LP425. عد حبوب اللقاح قابلة للحياة وغير قابلة للحياة في ثلاثة حقول لكل لوحة، كل حقل يحتوي على 100-200 حبوب اللقاح، في اثنين من أطباق بيتري لكل أصناف.
  2. نمو أنبوب حبوب اللقاح
    1. شطف pistils ثابتة مع الماء المقطر ثلاث مرات (1 ساعة لكل منهما، 3 ساعة في المجموع) ونقلها إلى 5٪ (ث / الخامس) كبريتيت الصوديوم (Na2SO3) في 4 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. لإعداد هذا المحلول، حل 5 غرام من كبريتات الصوديوم في 100 مل من الماء المقطر.
    2. الأوتوكلاف ال pistils في 120 درجة مئوية لمدة 8 دقائق في 5٪ (ث / v) كبريتات الصوديوم لتنعيم الأنسجة.
    3. الاسكواش خففت pistils في قطرة من 1٪ (v/v) محلول أزرق الانيلين تحت غطاء الزجاج على شريحة لتلطيخ الشنق.
    4. مراقبة نمو أنبوب حبوب اللقاح على طول النمط تحت المجهر مع uv epifluorescence باستخدام مرشح مثير BP340-390 ومرشح حاجز LP425.

4. تحديد علاقات عدم التوافق

  1. استخراج الحمض النووي من الأوراق
    1. لاستخراج الحمض النووي، وجمع 3-4 أوراق الشباب من كل أصناف في الميدان، ويفضل في الربيع.
      ملاحظة: يمكن أيضا استخراج الحمض النووي من أوراق ناضجة، ولكن الحمض النووي من أوراق الشباب لديه مركبات الفينولية أقل.
    2. عزل الحمض النووي باستخدام عدة تجارية واتبع مجموعة البروتوكولات المقدمة (انظر جدول المواد).
    3. قياس تركيز الحمض النووي وتقييم نوعية الحمض النووي لكل عينة في 260 نانومتر في مطياف الأشعة فوق البنفسجية فيس microvolume. ضبط تركيز الحمض النووي إلى 10 نانوغرام / ميكرولتر.
  2. شروط PCR لتضخيم الشظايا
    1. تسمية 0.2 مل أنابيب PCR والقبعات.
    2. إعداد الكواشف PCR وفقا للجدول 1 والسماح لهم ذوبان الجليد.
    3. إعداد حجم مزيج رئيسي من كل زوج من التمهيديات في 1.5 مل ميكروتوب وفقا لعدد من ردود الفعل بالإضافة إلى 10٪ من الزائدة، والنظر في حجم 16 ميكرولتر لكل رد فعل. إضافة الكواشف التالية الترتيب في الجدول 1 وتخلط جيدا.
    4. Aliquot 16 ميكرولتر من المزيج الرئيسي في كل أنبوب PCR 0.2 مل تحتوي على 4 ميكرولتر من قالب الحمض النووي أو 4 ميكرولتر من الماء المقطر المعقم كتحكم سلبي (C-). استخدام الحمض النووي من أصناف مع النمط الجيني المعروفة والضوابط الإيجابية. اخلط بلطف، أغلق أنابيب التفاعل مع القبعات، و سنتريفوتوغيت عند 2000 × ز لمدة 30 s لجمع الحجم بأكمله في الجزء السفلي من أنبوب التفاعل.
    5. ضع أنابيب التفاعل في المدور الحراري و أعد برنامج PCR باستخدام ملف درجة الحرارة التالي: خطوة أولية من 3 دقائق عند 94 درجة مئوية، و 35 دورة من 1 دقيقة عند 94 درجة مئوية، و 1 دقيقة عند 56 درجة مئوية و 3 دقائق عند 72 درجة مئوية، وخطوة أخيرة من 7 دقائق عند 72 درجة مئوية20.
  3. الإلكتروفوريس وتقدير حجم الشظايا
    1. لإعداد هلام صغير 1.7٪ (ث / v) agarose، حل 0.68 غرام من الآغروز و 40 مل من العازلة TBE 1x في قارورة إرلينماير 100 مل. تذوب الحل عن طريق التدفئة في الميكروويف في 600 واط على فترات 30 ثانية لتجنب الغليان.
    2. دع الحل يبقى على مقاعد البدلاء ليبرد، ثم أضف 3.5 ميكرولتر من محلول تلطيخ الحمض النووي.
    3. وضع علبة هلام في موقف الصب ووضع المشط المحدد في قالب هلام. تأكد من أن لديها ما يكفي من الآبار لكل منتج PCR وسلم الحمض النووي.
    4. صب محلول الآغاروز في قالب هلام والسماح لها تبرد حتى البلمرة. إزالة مشط هلام البوليمر. ضع الجل في نظام الكهروفورسيس الأفقي الذي يحتوي على ما يكفي من العازلة TBE 1x لتغطية سطح الجل.
    5. تحميل الآبار الأولى والأخيرة مع 2 ميكرولتر من سلم الوزن الجزيئي الحمض النووي (1 كيلو بايت سلم الحمض النووي). تحميل 3 ميكرولتر من كل منتج من PCR في الآبار الأخرى. أغلق الغرفة، قم بتشغيل الطاقة، وتشغيل الجل في 100 V لمدة 30 دقيقة.
    6. مراقبة هلام تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية باستخدام نظام وثائق هلام. استخدم سلم الوزن الجزيئي للحمض النووي لتحديد حجم الجزء المضخم ومقارنته بالضوابط الإيجابية من أجل تحديد الأليل المقابل.

5. رصد تواريخ الزهور

  1. رصد phenology من الأشجار المختلفة من كل أصناف في المزهرة على مدى سنوات مختلفة. تحديد طول الفترة المزهرة من الأولى (حوالي 5٪) إلى الزهور المفتوحة الأخيرة (حوالي 95٪). ويعتبر ازهر كامل عندما لا يقل عن 50٪ من الزهور في المرحلة F24، وفقا للمرحلة 65 على مقياس BBCH25،26.
  2. لمقارنة التواريخ المزهرة من أصناف متوافقة وتحديد تلك التي تتزامن في وقت المزهرة كل عام، ووضع جدول زمني من الأوقات المزهرة مع بيانات من عدة سنوات.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

كل برعم زهرة البرقوق اليابانية يحتوي على الإضاءة مع 1-3 الزهور. كما هو الحال في أنواع الفاكهة الحجرية الأخرى ، تتكون كل زهرة من أربعة عاهرات: الكاربل ، والركودات ، وبتلات ، والسيبال ، والتي تنصهر في تشكيل كوب في قاعدة الزهرة. هياكل الزهور هي أصغر من الفواكه الحجرية الأخرى، مع pistil قصيرة وهشة محاطة stamens التي تحتوي على كمية صغيرة من حبوب اللقاح. في إزهار كامل، تظهر الزهور من كل inflorescence فصل على سيقان قصيرة، والتي تبين بتلات بيضاء تشكيل بالون محاطة sepals الخضراء (المرحلة D، 57 BBCH) (الشكل 1A...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

المنهجية الموصوفة هنا لمتطلبات التلقيح من أصناف البرقوق اليابانية يتطلب تحديد الذاتي (في) التوافق بين كل أصناف عن طريق التلقيح الخاضعة للرقابة في الميدان أو المختبر، والمراقبة اللاحقة لنمو أنبوب حبوب اللقاح مع المجهر الفلوري. يتم تأسيس علاقات عدم التوافق من خلال توصيف S-alleles عن طريق الجينوتيبينج الجزيئي. وأخيرا، يتم اختيار اللقيحات من قبل علم الفينولوجيا الرصد للكشف عن تلك الأصناف التي تتزامن في المزهرة كل عام.

وضع متطلبات التلقيح في أصناف جديدة من نوع البرقوق اليابانية أصبحت ذات أ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.

شكر وتقدير

تم تمويل هذا البحث من قبل المعهد الوطني للاستثمار في علم المواصلات 2017-00003-0000؛ Gobierno de Aragón - الصندوق الاجتماعي الأوروبي، الاتحاد الأوروبي (Grupo Consolidado A12-17R)، والمجلس العسكري دي إكستريمادورا - فوندو أوروبا دي ديسارولو الإقليمية (FEDER)، خطة إقليمية دي Investigación (IB16181)، جروبو دي Investigación (AGA001، GR18196). 10- وتحظى B.I. Guerrero بدعم من زمالة المجلس الوطني للكنسية من المكسيك (كوناسيت، 471839).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
حمض الخليك الجليديPanreac131008.1611
AgariNtRON التكنولوجيا الحيوية25999
الأنيلين الأزرقDifco8504-88
حمض البوريك (H3< / sub>BO4< / sub>)Panreac131015.1210
نترات الكالسيوم 4-هيدرات (Ca (NO3< / sub>) 2< / sub> · 4H 2 < / sub > )Panreac131231.1211
CoverglassDeltalabD10246024 مم × 60 مم
رقميةلتصوير الأنظمة المطورةUI-1490SE
مجموعة برامج الكاميرا الرقميةImaging DevelopmetSystems 4.93.0.
DNA OligosThermoFisher Scientific
dNTP Mix ، 10 ملي متر لكلمن ThermoSischer ScientificR0193
DreamTaq Green DNA polymeraseThermoFisher ScientificEP0713
Ethanol 96 & deg ؛VWR-Chemicals83804.360
سلم الحمض النووي 1Kb (براءة الاختراع الأمريكية رقم 4.403.036) (500pb-12Kb)Invitrogen15615-016الحجم: 250 & micro ؛ g; Conc: 1.0 & micro; ز /& مايكرو ؛ ل
نظام توثيق هلامBio-Rad1708195
عداد اليدTamacoTM-4
Image Lab SoftwareBio-Radنظام تحليل الصور لنظام توثيق الهلام
MetaPhor AgaroseLonza50180
Microcentrifuge 5415 REppendorfZ605212
المجهر مع الأشعة فوق البنفسجية فلتر المثيرLeicaDM2500BP340-390 ، مرشح الحاجز LP425
MicroslidesDeltalabD10000426 مم × 76 مم
الرحلان الكهربائي الصغيرFisherbrand14955170
جهاز طرد مركزي صغيرThermoFisher Scientific15334204
NanoDrop 1000 مقياس الطيفالضوئي ThermoFisher ScientificND1000
أطباق بتريدلتالاب20020155 مم × 14 مم
فوسفات البوتاسيوم ثلاثي القاعدة (K3< / sub>PO4< / sub>· ؛ 1.5H 2 < / sub >O)Panreac141513
التمهيدي إلى الأمام 'Pru C2'ThermoFisher Scientific
Primer إلى الأمام Pru T2'ThermoFisherScientific
Primer Reverse 'PCER'ThermoFisher Scientific
RedSafe محلول تلطيخ الحمض النوويiNtRON Biotechnology21141
SaccharosePanreac131621.1211
كبريتيت الصوديوم اللامائي (Na2< / sub>SO3< / sub>)Panreac131717.1211
طقم استخراج الحمض النووي لمصنع SpeedtoolsBiotools21272
TBE Buffer (10X)PanreacA0972،5000PE
Thermal Cycler T100Bio-Rad1861096
خلاط حراري مريحEppendorfT1317
الأوتوكلاف العمودي Presoclave IIJP Selecta4001725
VortexFisherbrand11746744
كاميرا نظام

المراجع

  1. Hendrick, U. P. The Plums of New York. , J. B. Lyon Co., State Printers. (1911).
  2. Okie, W. R., Hancock, J. F. Plums. Temperate Fruit Crop Breeding. Hancock, J. F. , Springer. Dordrecht. 337-357 (2008).
  3. Guerra, M. E., Rodrigo, J. Japanese plum pollination: a review. Scientia Horticulturae. 197, 674-686 (2015).
  4. Okie, W. R. Introgression of Prunus species in plum. New York Fruit Quarterly. 14 (1), 29-37 (2006).
  5. Okie, W. R., Weinberger, J. H. Fruit Breeding, vol. 1. Tree and tropical fruits. Janick, J., Moore, J. , John Wiley and Sons Inc. New York. 559-608 (1996).
  6. Mccubbin, A. G., Kao, T. Molecular recognition and response in pollen and pistil interactions. Annual Review of Cell and Developmental Biology. 16, 333-364 (2000).
  7. Hegedűs, A., Halász, J. Recent findings of the tree fruit self-incompatibility studies. International Journal of Horticultural Science. 13 (2), 7-15 (2007).
  8. de Nettancourt, D. Incompatibility and Incongruity in Wild and Cultivated Plants. , Springer-Verlag. Berlín. (2001).
  9. Tao, R., et al. Identification of stylar RNases associated with gametophytic self-incompatibility in almond (Prunus dulcis). Plant and Cell Physiology. 38 (3), 304-311 (1997).
  10. Halász, J., Pedryc, A., Ercisli, S., Yilmaz, K., Hegedűs, A. S-genotyping supports the genetic relationships between Turkish and Hungarian apricot germplasm. Journal of the American Society for Horticultural Science. 135 (5), 410-417 (2010).
  11. Lora, J., Hormaza, J. I., Herrero, M., Rodrigo, J. Self-incompatibility and S-allele identification in new apricot cultivars. Acta Horticulturae. (1231), 171-176 (2019).
  12. Herrera, S., Lora, J., Hormaza, J. I., Rodrigo, J. Determination of self- and inter-(in)compatibility relationships in apricot combining hand-pollination, microscopy and genetic analyses. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (160), (2020).
  13. Cachi, A. M., Wunsch, A. Characterization of self-compatibility in sweet cherry varieties by crossing experiments and molecular genetic analysis. Tree Genetics & Genomes. 10, 1205-1212 (2014).
  14. Guerra, M. E., Guerrero, B. I., Casadomet, C., Rodrigo, J. Self-compatibility, S-RNase allele identification, and selection of pollinizers in new Japanese plum-type cultivars. Scientia Horticulturae. 261, 109022(2020).
  15. Herrera, S., Lora, J., Hormaza, J. I., Herrero, M., Rodrigo, J. Optimizing production in the new generation of apricot cultivars: self-incompatibility, S-RNase allele identification, and incompatibility group assignment. Frontiers in Plant Science. 9, 1-12 (2018).
  16. Herrera, S., Rodrigo, J., Hormaza, J. I., Lora, J. Identification of self-incompatibility alleles by specific PCR analysis and S-RNase sequencing in apricot. International Journal of Molecular Sciences. 19 (11), 3612(2018).
  17. Sociasi Company, R., Kodad, O., Fernández i Martí, J. M., Alonso, J. M. Mutations conferring self-compatibility in Prunus species: from deletions and insertions to epigenetic alterations. Scientia Horticulturae. 192, 125-131 (2015).
  18. Rodrigo, J., Herrero, M. Evaluation of pollination as the cause of erratic fruit set in apricot 'Moniqui. Journal of Horticultural Science and Biotechnology. 71 (5), 801-805 (1996).
  19. Beppu, K., et al. Se-haplotype confers self-compatibility in Japanese plum (Prunus salicina Lindl). Journal of Horticultural Science and Biotechnology. 80 (6), 760-764 (2005).
  20. Guerra, M. E., Rodrigo, J., López-Corrales, M., Wünsch, A. S-RNase genotyping and incompatibility group assignment by PCR and pollination experiments in Japanese plum. Plant Breeding. 128 (3), 304-311 (2009).
  21. Guerra, M. E., Wunsch, A., López-Corrales, M., Rodrigo, J. Flower emasculation as the cause for lack of fruit set in Japanese plum crosses. Journal of the American Society for Horticultural Science. 135 (6), 556-562 (2010).
  22. Guerra, M. E., Wünsch, A., López-Corrales, M., Rodrigo, J. Lack of fruit set caused by ovule degeneration in Japanese plum. Journal of the American Society for Horticultural Science. 136 (6), 375-381 (2011).
  23. Fernández i Martí, A., Gradziel, T. M., Socias i Company, R. Methylation of the Sf locus in almond is associated with S-RNase loss of function. Plant Molecular Biology. 86, 681-689 (2014).
  24. Baggiolini, M. Les stades repérés des arbres fruitiers à noyau. Revue romande d'Agriculture et d'Arboriculture. 8, 3-4 (1952).
  25. Meier, U. Growth stages of mono-and dicotyledonous plants: BBCH Monograph. Federal Biological Research Centre for Agriculture and Forestry. , (2001).
  26. Fadón, E., Herrero, M., Rodrigo, J. Flower development in sweet cherry framed in the BBCH scale. Scientia Horticulturae. 192, 141-147 (2015).
  27. Fadon, E., Rodrigo, J. Combining histochemical staining and image analysis to quantify starch in the ovary primordia of sweet cherry during winter dormancy. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (145), (2019).
  28. Hormaza, J. I., Pinney, K., Polito, V. S. Correlation in the tolerance to ozone between sporophytes and male gametophytes of several fruit and nut tree species (Rosaceae). Sexual Plant Reproduction. 9, 44-48 (1996).
  29. Burgos, L., et al. The self-compatibility trait of the main apricot cultivars and new selections from breeding programmes. Journal of Horticultural Science and Biotechnology. 72 (1), 147-154 (1997).
  30. Dicenta, F., Ortega, E., Cánovas, J. A., Egea, J. Self-pollination vs. cross-pollination in almond: pollen tube growth, fruit set and fruit characteristics. Plant Breeding. 121, 163-167 (2002).
  31. Alonso, J. M., Socias i Company, R. Differential pollen tube growth in inbred self-compatible almond genotypes. Euphytica. 144, 207-213 (2005).
  32. Hedhly, A., Hormaza, J. I., Herrero, M. The effect of temperature on pollen germination, pollen tube growth, and stigmatic receptivity in peach. Plant Biology. 7, 476-483 (2005).
  33. Hedhly, A., Hormaza, J. I., Herrero, M. Warm temperatures at bloom reduce fruit set in sweet cherry. Journal of Applied Botany. 81, 158-164 (2007).
  34. Milatović, D., Nikolić, D. Analysis of self-(in)compatibility in apricot cultivars using fluorescence microscopy. Journal of Horticultural Science and Biotechnology. 82, 170-174 (2007).
  35. Jia, H. J., He, F. J., Xiong, C. Z., Zhu, F. R., Okamoto, G. Influences of cross pollination on pollen tube growth and fruit set in Zuili plums (Prunus salicina). Journal of Integrative Plant Biology. 50, 203-209 (2008).
  36. Herrero, M., Salvador, J. La polinización del ciruelo Red Beaut. Información Técnica Econónomica Agraria. 41, 3-7 (1980).
  37. Ramming, D. W. Plum. Register of new fruit and nut varieties: Brooks and Olmo, List 37. HortScience. 30 (6), 1142-1144 (1995).
  38. Hartmann, W., Neümuller, M. Plum breeding. Breeding plantation tree crops: Temperate species. , Springer. New York, NY. 161-231 (2009).
  39. Guerra, M. E., López-Corrales, M., Wünsch, A. Improved S-genotyping and new incompatibility groups in Japanese plum. Euphytica. 186 (2), 445-452 (2012).
  40. Tao, R., et al. Molecular typing of S-alleles through identification, characterization and cDNA cloning for S-RNases in sweet cherry. Journal of the American Society for Horticultural Science. 124 (3), 224-233 (1999).
  41. Yamane, H., Tao, R., Sugiura, A., Hauck, N. R., Lezzoni, A. F. Identification and characterization of S-RNases in tetraploid sour cherry (Prunus cerasus). Journal of the American Society for Horticultural Science. 126, 661-667 (2001).
  42. López, M., Jose, F., Vargas, F. J., Battle, I. Self-(in)compatibility almond genotypes: a review. Euphytica. 150, 1-16 (2006).
  43. Bošković, R., Tobutt, K. R. Correlation of stylar ribonuclease zymograms with incompatibility alleles in sweet cherry. Euphytica. 90, 245-250 (1996).
  44. Beppu, K., Syogase, K., Yamane, H., Tao, R., Kataoka, I. Inheritance of self-compatibility conferred by the Se-haplotype of Japanese plum and development of Se-RNase gene-specific PCR primers. Journal of Horticultural Science and Biotechnology. 85, 215-218 (2010).
  45. Beppu, K., Kumai, M., Yamane, H., Tao, R., Kataoka, I. Molecular and genetic analyses of the S-haplotype of the self-compatible Japanese plum (Prunus salicina Lindl.) "Methley". Journal of Horticultural Science and Biotechnology. 87 (5), 493-498 (2012).
  46. Beppu, K., Konishi, K., Kataoka, I. S-haplotypes and self-compatibility of the Japanese plum cultivar 'Karari'. Acta Horticulturae. 929, 261-266 (2012).
  47. Sapir, G., Stern, R. A., Shafir, S., Goldway, M. S-RNase based S-genotyping of Japanese plum (Prunus salicina Lindl.) and its implication on the assortment of cultivar-couples in the orchard. Scientia Horticulturae. 118, 8-13 (2008).
  48. Karp, D. Luther Burbank's plums. HortScience. 50 (2), 189-194 (2015).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

S PCR
وضع متطلبات التلقيح في البرقوق الياباني من خلال الرصد الفينولوجي والتلقيح اليدوي والمجهر الفلوري وال جينوتيبينج الجزيئية
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.