Method Article

أخذ عينات الأنف بالفرشاة ومعالجتها باستخدام المجهر الرقمي عالي السرعة بالفيديو الهدبي - التكيف مع جائحة COVID-19

DOI:

10.3791/61949

⸱

November 7th, 2020

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Pneumology laboratory, I3 Group, GIGA Research Center, University of Liège, 2Department of ENT, University Hospital of Liège, 3Department for Occupational Safety and Health, Biosafety and Biosecurity Unit, University of Liège, 4Division of Respirology, Department of Pediatrics, University of British Columbia and British Columbia Children's Hospital, 5Division of Cardiology, Department of Pediatrics, University Hospital of Liège, 6Department of Pneumology, University Hospital of Liège, 7Division of Respirology, Department of Pediatrics, University Hospital of Liège

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لضمان تحليل وظيفي هدبي ناجح وعالي الجودة لتشخيص PCD ، من الضروري اتباع طريقة دقيقة ودقيقة لأخذ عينات ظهارة الجهاز التنفسي ومعالجتها. لمواصلة تقديم خدمة تشخيص PCD أثناء جائحة COVID-19 ، تم تحديث بروتوكول الفحص المجهري الفيديوي الهدبي ليشمل تدابير مكافحة العدوى المناسبة.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

خلل الحركة الهدبية الأولي (PCD) هو اعتلال هدبي وراثي متحرك ، مما يؤدي إلى مرض رئوي رئوي كبير. غالبا ما يتم تفويت تشخيص PCD أو تأخيره بسبب التحديات مع طرق التشخيص المختلفة. يعتبر الفحص المجهري بالفيديو الهدبي ، باستخدام الفحص المجهري الرقمي عالي السرعة (DHSV) ، وهو أحد أدوات تشخيص PCD ، الطريقة المثلى لإجراء التحليل الوظيفي الهدبي (CFA) ، الذي يتألف من تردد النبض الهدبي (CBF) وتحليل نمط النبض (CBP). ومع ذلك ، تفتقر DHSV إلى إجراءات تشغيل موحدة ومنشورة لمعالجة العينات وتحليلها. كما يستخدم ظهارة الجهاز التنفسي الحية ، وهي مشكلة كبيرة في مكافحة العدوى أثناء جائحة COVID-19. ولمواصلة تقديم خدمة تشخيصية خلال هذه الأزمة الصحية، تم تكييف بروتوكول الفحص المجهري الهدبي بالفيديو ليشمل تدابير كافية لمكافحة العدوى.

نصف هنا بروتوكولا منقحا لأخذ العينات والمعالجة المختبرية لعينات الجهاز التنفسي المهدبة، مع تسليط الضوء على التعديلات التي تم إجراؤها للامتثال لتدابير مكافحة عدوى COVID-19. يتم وصف النتائج التمثيلية ل CFA من عينات تنظيف الأنف بالفرشاة التي تم الحصول عليها من 16 شخصا صحيا ، والتي تمت معالجتها وتحليلها وفقا لهذا البروتوكول. نوضح أيضا أهمية الحصول على شرائط هدبية ظهارية ذات جودة مثالية ومعالجتها ، حيث أن العينات التي لا تفي بمعايير اختيار الجودة تسمح الآن ب CFA ، مما قد يقلل من موثوقية التشخيص وكفاءة هذه التقنية.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

خلل الحركة الهدبية الأولي (PCD) هو اعتلال هدبي متحرك غير متجانس موروث ، تكون فيه الأهداب التنفسية ثابتة أو بطيئة أو خلل الحركة ، مما يؤدي إلى ضعف إزالة الغشاء المخاطي الهدبي ومرض الأذن والأذن والرئةالمزمن 1،2،3،4. المظاهر السريرية ل PCD هي السعال الرطب المزمن واحتقان الأنف المزمن الذي يبدأ في مرحلة الطفولة المبكرة ، والتهابات الجهاز التنفسي العلوي والسفلي المتكررة أو المزمنة التي تؤدي إلى توسع القصبات ، والتهاب الأذن الوسطى المتكرر أو المزمن والتهاب الجيوب الأنفية5،6،

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم الحصول على الموافقة من لجنة أخلاقيات مستشفى لييج وأعضاء هيئة التدريس وإدارة الجامعة للنظافة وحماية الصحة في العمل.

1. أخذ عينات من ظهارة الجهاز التنفسي مهدبة

  1. تأكد من خلو الأشخاص من العدوى لمدة 4-6 أسابيع على الأقل ، وخالية من الأدوية الأنفية والمستنشقة ، قبل أخذ العينات.
  2. تحضير مستحضر M199 التكميلي: مكمل وسط زراعة الخلايا 199 (M199) (500 مل) بمحلول مضاد حيوي (5 مل من الستربتومايسين / البنسلين (50 ميكروغرام / مل)) ومحلول مضاد للفطريات (5 مل من الأمفوتريسين B (2.5 ميكروغرام / مل)).
  3. تحضير 2 (واحد لكل منخر) 15 مل أنابيب مخروطية مع أغطية ، وملء كل واحد منهم مع 3 مل من M199 المكملة.
  4. تحضير فرشاة علم الخلاي....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لتوضيح كفاءة التقنية ، نقدم نتائج CFA في سلسلة من 16 متطوعا بالغا يتمتعون بصحة جيدة (5 ذكور ، الفئة العمرية 22-54 عاما).

قدمت عينات تنظيف الأنف بالفرشاة من 14 (4 ذكور ، الفئة العمرية 24-54 سنة) من إجمالي 16 متطوعا ما يكفي من الحواف الظهارية المناسبة التي استوفت معايير الاختيار اللازمة لأداء CFA. من بين عينات تنظيف الأنف ال 14 هذه ، تم تسجيل ما مجموعه 242 حافة مهدبة ، واستوفت 212 حافة معايير التضمين المحددة وتم تحليلها. تم تسجيل كل هذه الحواف في المظهر الجانبي (تم تسجيل الأهداب النابضة من أعلى .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تهدف هذه الورقة إلى توفير إجراء تشغيل قياسي ل CFA باستخدام عينات تنظيف الأنف بالفرشاة ، مع إجراء تعديلات لاعتبارات مكافحة العدوى المناسبة أثناء جائحة COVID-19. يعد تشخيص PCD أمرا صعبا ، ويتطلب حاليا مجموعة من الاختبارات التشخيصية المختلفة ، وفقا للتوصية الدولية ، بما في ذلك قياس أكسيد النيتريك الأنفي ، و CFA باستخدام DHSV ، والتحليل الهيكلي الهدبي باستخدام المجهر الإلكتروني النافذ (TEM) ، ووضع العلامات على البروتينات الهدبية باستخدام التألق المناعي ، والاختبار الجيني للجينات المسببة ل PCD 4,3.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هؤلاء المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نود أن نشكر جان فرانسوا بابون وبرونو لويس وإستل إسكودييه وجميع أعضاء فريق مركز تشخيص PCD في باريس الشرقية على تواجدهم وترحيبهم الحار خلال الزيارة إلى مركز تشخيص PCD الخاص بهم ، والتبادلات العديدة. كما نشكر روبرت هيرست وجميع أعضاء الفريق في مركز PCD في ليستر على ترحيبهم ووقتهم ونصائحهم وخبراتهم.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
15 مل أنابيب مخروطيةمن فيشر ساتفيك35209615 مل أنبوب مخروطي بولي بروبيلين عالي الوضوح مع غطاء
أمفوتريسين بLONZA17-836Eمحلول مضاد للفطريات
ملقط الأنف Blakesley-weilNOVO SURGICALE7739-12تستخدم لتثبيت الفرشاة لإجراء تنظيف الأنف
فرشاة علم الخلايا الهوائيةCONMED129المستخدمة للأنف تنظيف
مسحة القطنبالفرشاة NUOVA APTACA2150 / SGتستخدم لاختبار COVID-19
كاميرا الفحص المجهري الرقمية عاليةIDTeu الابتكار في الحركةCrashCam Mini 1510
شريحة زجاجيةشرائح مجهر 12372098 حراريعلمية تستخدم لإنشاء غرفة التصور
صندوق ساخنخلايا IBIDI في بؤرةالتركيز 10918تستخدم لتسخين عينة
مجهر الضوء المقلوبZeissAXIO Vert.A1
سخان العدسةTOKAI HITTPiE-LHتستخدم لتسخين عدسة الغمر بالزيت
Medium 199 (M199) ، HEPESTermoFisher Scientific12340030Cell Culture Medium
Motion Studio X64IDT Motionالإصدار 2.14.01زيت البرمجيات
FischerScientific ، كارل زايس11825153
زلة غطاء مستطيلةVWR631-0145تستخدم لتغطية غرفة التصور
فاصل (Ispacer) 0.25 ممSunjinlabIS203تستخدم لإنشاء غرفة التصور المغلقة محكمة
زلة الغطاء المربعVWR631-0122تستخدم لإنشاء غرفة التصور المفتوحة المصنوعة في المختبر
الستربتومايسين / البنسلينفيشر ساينتفيك ، جيبكو11548876محلول مضادات الأحياء الحيوية
السرعة الغلق

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chilvers, M. A., Rutman, A., O'Callaghan, C. Ciliary beat pattern is associated with specific ultrastructural defects in primary ciliary dyskinesia. Journal of Allergy Clinical Immunology. 112 (3), 518-524 (2003).
  2. Werner, C., Onnebrink, J. G., Omran, H.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Ciliary VideomicroscopyDigital High Speed VideomicroscopyNasal Brushing SamplingCiliary Functional AnalysisCiliary Beat FrequencyCiliary Beat PatternPrimary Ciliary DyskinesiaInfection Control MeasuresEpithelial Ciliated StripsVideo Analysis Software

Related Articles