مقالة منهجية

نموذج السموم الداخلية الموجه نحو وحدة العناية المركزة القابلة للتكرار في الفئران

DOI:

10.3791/62024

⸱

فبراير 20, 2021

 , 
1Institute of Physiology, University of Zurich, 2Institute of Anesthesiology, University Hospital of Zurich

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هنا ، نقدم نموذجا للسموم الداخلية الموجهة نحو وحدة العناية المركزة القابلة للتكرار في الفئران.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ولا يزال الإنتان والصدمة الإنتانية السبب الرئيسي للوفاة في وحدات العناية المركزة. على الرغم من التحسينات الكبيرة في إدارة الإنتان ، لا تزال الوفيات تتراوح بين 20 و 30٪. هناك حاجة ماسة إلى نهج علاجية جديدة من أجل الحد من فشل الأعضاء المتعددة المرتبطة بالإنتان والوفاة. تسمح النماذج الحيوانية القوية بنهج علاج واحد أو عدة طرق بالإضافة إلى اختبار تأثيرها على المعلمات الفسيولوجية والجزيئية. في هذه المقالة ، يتم تقديم نموذج حيواني بسيط.

أولا ، يتم تحفيز التخدير العام في الحيوانات إما باستخدام التخدير المتطاير أو عن طريق التخدير داخل الصفاق. بعد وضع قسطرة في الوريد (الوريد الذيل) ، وفغر القصبة الهوائية ، وإدخال قسطرة داخل الشرايين (شريان الذيل) ، تبدأ التهوية الميكانيكية. يتم تسجيل القيم الأساسية لمتوسط ضغط الدم الشرياني وتشبع الأكسجين في الدم الشرياني ومعدل ضربات القلب.

إن حقن عديدات السكاريد الشحمية (1 ملليغرام / كيلوغرام من وزن الجسم) المذاب في محلول ملحي مخزن بالفوسفات يحفز استجابة التهابية قوية وقابلة للتكرار عبر المستقبل الشبيه بالرسوم 4. يتم إجراء تصحيحات السوائل وكذلك تطبيق النورادرينالين على أساس بروتوكولات راسخة.

النموذج الحيواني المقدم في هذه المقالة سهل التعلم وموجه بقوة نحو علاج الإنتان السريري في وحدة العناية المركزة مع التخدير والتهوية الميكانيكية والمراقبة المستمرة لضغط الدم وأخذ عينات الدم المتكررة. أيضا ، النموذج موثوق به ، مما يسمح ببيانات قابلة للتكرار مع عدد محدود من الحيوانات وفقا لمبادئ 3R (تقليل ، استبدال ، صقل) للبحوث الحيوانية. في حين أن التجارب على الحيوانات في أبحاث الإنتان لا يمكن استبدالها بسهولة ، فإن القياسات المتكررة تسمح بتقليل الحيوانات والحفاظ على تخدير الحيوانات الإنتانية يقلل من المعاناة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الإنتان وشكله الأكثر حدة ، الصدمة الإنتانية ، هي متلازمات على أرض العدوى ، مما يؤدي إلى تفاعل التهابي مفرط مع إطلاق السيتوكينات ، مما يؤدي إلى تغيرات فسيولوجية وكيميائية حيوية مع دفاع مناعي مكبوت ونتائج قاتلة 1,2. هذا التفاعل الالتهابي غير المتوازن يؤدي إلى خلل وظيفي في الأعضاء وفشل الأعضاء في مختلف الأعضاء الحيوية مثل الرئة والكلى والكبد. مع 37٪ 3 ، يعد الإنتان أحد الأسباب الأكثر شيوعا لدخول المريض إلى وحدة العناية المركزة (ICU). يتراوح معدل وفيات الإنتان حاليا حوالي 20-30٪ 4. العلاج المبكر والفعال بالمضادات الحيوية له أهمية قصوى5. يجب تثبيت إنعاش السوائل وضاغط الأوعية في وقت مبكر ، بخلاف ذلك ، فإن العلاج داعم تماما6.

يعرف الإنتان بأنه عدوى مثبتة أو مشتبه بها بالبكتيريا أو الفطريات أو الفيروسات أو الطفيليات ، والتي يصاحبها خلل وظيفي في الأعضاء. يتم استيفاء معايير الصدمة الإنتانية عندما يكون هناك انهيار آخر للقلب والأوعية الدموية لا يستجيب لعلاج السوائل وحده ، ويكون مستوى اللاكتات أكثر من 2 ملليمول / لتر موجودا2. قد يحدث فشل الأعضاء المرتبط بالإنتان في أي عضو ، ولكنه شائع جدا في نظام القلب والأوعية الدموية والدماغ والكلى والكبد والرئة. يحتاج معظم المرضى الذين يعانون من الإنتان إلى التنبيب داخل القصبة الهوائية لتأمين مجرى الهواء للمريض ، والحماية من الطموح ، وتطبيق التهوية الزفيرية النهائية الإيجابية مع جزء كبير من الأكسجين الملهم لمنع نقص الأكسجة أو التغلب عليه. من أجل تحمل أنبوب القصبة الهوائية والتهوية الميكانيكية ، يحتاج المرضى عادة إلى التخدير.

السموم الداخلية ، مثل عديدات السكاريد الشحمية (LPS) كمكون من غشاء البكتيريا سالبة الجرام تحفز تفاعلا التهابيا قويا عبر المستقبل الشبيه بالحصيلة (TLR) 47. يضمن تنشيط مسار محدد تفاعلا التهابيا مستقرا. تعرف السيتوكينات مثل البروتين الجاذب الكيميائي المستحث بالسيتوكين 1 (CINC-1) ، والبروتين الجاذب الكيميائي أحادي الخلية 1 (MCP-1) ، والإنترلوكين 6 (IL-6) كعوامل تنبؤية للشدة والنتيجة في هذا النموذج8. تم استخدام تطبيق LPS عن طريق الوريد بنجاح لدراسة جوانب مختلفة من الإنتان في الفئران 8,9.

لا يزال علاج الإنتان يمثل تحديا، خاصة بسبب عدم وجود نماذج حيوانية تنبؤية. إذا كان تسمم الدم الداخلي مع تنشيط الالتهاب الجهازي هو نموذج مناسب لتطوير العلاجات الدوائية أمر قابل للنقاش. ومع ذلك ، مع مسار TLR 4 المعروف الناجم عن LPS ، يمكن اكتساب معرفة مهمة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت الموافقة على جميع التجارب المقدمة في هذا البروتوكول من قبل السلطات البيطرية في كانتون زيورخ ، سويسرا (أرقام الموافقة 134/2014 و ZH088/19). وعلاوة على ذلك، كانت جميع الخطوات التي أجريت في هذه التجربة وفقا للمبادئ التوجيهية بشأن التجارب على الحيوانات التي وضعتها الأكاديمية السويسرية للعلوم الطبية (SAMS) والمبادئ التوجيهية لاتحاد الجمعيات الأوروبية لعلوم المختبرات (FELASA).

1. تحريض التخدير ومراقبة الحيوان

  1. احتفظ بذكور فئران Wistar بوزن 250-300 جرام (جم) في أقفاص جيدة التهوية في ظل ظروف خالية من مسببات الأمراض. توفير دورة ضوئية / مظلمة لمدة 12-12 ساعة عند درجة حرارة محيطة تبلغ 22 ± 1 درجة مئوية ، وحرية الوصول إلى الطعام والماء.
  2. حث التخدير العام إما عن طريق الحث المتطاير مع الأيزوفلوران (تركيز 3-5 ٪) في مربع تحريض التخدير لمدة 30 ثانية (الشكل 1A) أو بدلا من ذلك ، حث التخدير مع حقن طلقة واحدة من الكيتامين / الزيلازين (10/1 ملليغرام (ملغ) لكل 100 غرام من وزن الجسم).
  3. انقل الحيوان إلى مكان عمل وضع الحيوان على حصيرة تسخين طوال التجربة بأكملها. حافظ على درجة حرارة الجسم بين 36.5 و 37 درجة مئوية.
  4. استخدم مخروط الأنف لتوفير الأكسجين (600 مل / دقيقة). أضف الأيسوفلوران 2-3٪ إذا تم اختيار التخدير المتطاير لصيانة التخدير. تأكد من أن الحيوان يتنفس تلقائيا.
  5. تأكد من مستوى التخدير من خلال عدم وجود منعكس قرصة إصبع القدم قبل تركيب فغر القصبة الهوائية والقسطرة الشريانية والوريدية.
  6. تحقق من وجود كمية كافية من الأوكسجين عن طريق مراقبة تشبع الأكسجين المحيطي (تشبع الأكسجين الطبيعي 98 - 100٪).
  7. استخدم مرهما (مرهم فيتامين أ) لحماية العينين.
  8. قم بإعداد أدوات جراحية معقمة وقسطرة على طاولة جانبية كما هو موضح في الشكل 1B.
  9. بالإضافة إلى ذلك ، قم بإعداد مراقبة تشبع الضغط والأكسجين كما هو موضح في الشكل 1C.

2. الوصول عن طريق الوريد

  1. ضع عاصبة في ذيل الفئران القريب لتسهيل الوصول الوريدي (الشكل 2A).
  2. تطهير الذيل 3 مرات مع الكحول.
  3. حث قسطرة G26 عن طريق الوريد في أحد عروق الذيل الجانبية.
    ملاحظة: من تجربتنا ، من الأسهل وضع الوصول عن طريق الوريد في الجزء البعيد من ذيل الفئران ، لأن الوريد هنا يقع بالقرب من الجلد. بالإضافة إلى ذلك ، في حالة فشل القنية ، هناك مساحة كافية للتحرك عن قرب.
  4. تجنب بدقة حقن الهواء.
  5. فك العاصبة بعد وضع القسطرة الوريدية.
  6. ثبت القسطرة الوريدية في مكانها بشريط لاصق (الشكل 2B).
  7. قم بتوصيل مضخات المحاقن بالوصول عن طريق الوريد للتطبيق المستمر للسوائل والأدوية.
  8. استخدم أجهزة التوقف ثلاثية الاتجاهات لسائل البلعة وتطبيق الأدوية وأخذ عينات الدم الوريدية.

3. فغر القصبة الهوائية

  1. حلق منطقة الرقبة الأمامية للحيوان.
  2. تطهير الجلد الحليق 3 مرات بمحلول اليود الفعال.
  3. قم بإجراء شق طولي يبلغ طوله حوالي 2 سم باستخدام مشرط (مع شفرة رقم 10).
  4. سحب الجلد مع 2-0 خيوط الحرير.
  5. قم بإعداد الحنجرة والقصبة الهوائية بصراحة باستخدام مقص جراحي (الشكل 3A).
  6. تأكد من فتح القصبة الهوائية بمقص جراحي دقيق في مشبك القصبةالهوائية 3-5.
  7. أدخل قنية قصبة هوائية معقمة في القصبة الهوائية. كن حذرا ، لا تدخل القنية بعمق شديد لتجنب التهوية من جانب واحد.
  8. إصلاح القنية في مكانها باستخدام خياطة الحرير 2-0.
  9. قم بتوصيل القنية بجهاز تهوية للضغط أو التهوية التي يتم التحكم في حجمها (الشكل 3B).

4. الوصول الشرياني

  1. تطهير ذيل الفئران 3 مرات بمحلول البوفيدون اليود.
  2. قطع الجلد باستخدام مشرط (مع شفرة رقم 10) حوالي 1 سم طوليا في الجانب البطني.
  3. توخي الحذر ، لا تقطع بعمق لتجنب إصابة شريان الذيل.
  4. استخدم المجهر الجراحي لكشف الشريان بعناية. قطع اللفافة المحيطة بالشريان باستخدام مقص جراحي مجهري.
  5. قم بربط الجزء البعيد من الشريان باستخدام خياطة حريرية 6-0.
  6. قم بإعداد خياطة حريرية قريبة 6-0 ولكن لا تشد الحرير (الشكل 4A).
  7. أدخل قسطرة G-26 في الشريان بين خياطة الحرير البعيدة والقريبة.
  8. بمجرد أن تكون القسطرة في الشريان ، قم بتشديد خياطة الحرير القريبة وثبت القسطرة في مكانها (الشكل 4B).
  9. قم بتوصيل القسطرة بمحول ضغط لتوفير قياس مستمر للضغط الشرياني (متوسط الضغط الشرياني الطبيعي: 60 - 100 مم زئبق) (الشكل 4C).
  10. بالإضافة إلى ذلك ، ضع سدادة ثلاثية الاتجاهات بين القسطرة المتصلة بمحول الضغط وقسطرة G-26 لأخذ عينات الدم الشرياني.

5. قياس خط الأساس ، تحريض الإنتان وقياسات المتابعة

  1. بعد أن وصل الحيوان إلى حالة ثابتة ، حقن LPS.
  2. جمع عينات الدم عند الوصول إلى حالة مستقرة (عادة بعد 15-30 دقيقة).
  3. استبدل فقدان السوائل من عينات الدم بمحلول رينجر بنسبة 1:4.
  4. للحث على الإنتان ، حقن LPS كبلعة أو كتطبيق LPS مستمر.
  5. لتطبيق البلعة ، حقن 1 ملغ من LPS / كيلوغرام من وزن الجسم (كجم) المذاب في محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) بتركيز 1 ملغ / مل.
  6. للتطبيق المستمر ، حقن 300 ميكروغرام من LPS / kg / hour طوال التجربة بأكملها باستخدام مضخة حقنة (محلول مخزون LPS: 1 mg / mL في PBS).
  7. تجنب حقن الهواء في جميع الأوقات من أجل منع انسداد الهواء.
  8. حدد بروتوكولات استبدال السوائل، وبروتوكولات تطبيق مضيق للأوعية، ومعايير الإجهاض (على سبيل المثال انخفاض ضغط الدم الذي يعرف بأنه متوسط ضغط الدم الشرياني أقل من 50 مم زئبق لأكثر من 30 دقيقة على الرغم من استبدال السوائل) قبل إعداد التجربة.
    ملاحظة: نقترح ضخ مستمر لمحلول رينجر بمعدل 10 مل / كجم / ساعة.
  9. اطرح أي إدارة مستمرة للسوائل (على سبيل المثال ، لتطبيق LPS المستمر) من الكمية التي تم غرسها بحيث تكون النتائج قابلة للمقارنة مع نتائج المجموعات الضابطة.
    ملاحظة: في نهاية التجربة ، وقبل حصاد أي أعضاء مثل الكبد أو الكلى أو الطحال لمزيد من التحليلات مثل الفحص النسيجي أو الكيميائي الحيوي ، يمكن قتل الحيوانات عن طريق شق في الوريد الأجوف السفلي. الطريقة الموصى بها للقتل الرحيم هي إحضار الحيوانات إلى مستوى جراحي للتخدير قبل شق الوريد الأجوف السفلي وحقن المياه المالحة الباردة في القلب الأيسر ، خاصة إذا كان سيتم تقييم علامات الالتهاب في الأعضاء. ضمان الامتثال للمتطلبات القانونية والمبادئ التوجيهية المحلية. للتحقق من فشل الأعضاء المرتبطة بالإنتان ، يمكن تحليل علامة مؤيدة لموت الخلايا المبرمج مثل caspase-3 بالإضافة إلى α1-microglobuline للتحقق من الضرر الأنبوبي في الكلى. قد يوفر التحليل الخاص بالعضو للعلامات مثل CINC-1 و MCP-1 و IL-6 أيضا معلومات حول الاستجابة الالتهابية الخاصة بالعضو.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يسمح النظام المقدم بتسمم الدم الداخلي مع الحيوانات المستقرة ديناميكيا كما ذكر سابقا9. في حين أن متوسط الضغط الشرياني لا يزال مستقرا في الحيوانات التي لديها ، وبدون تحفيز LPS ، فإن الحيوانات المعالجة LPS تطور خصائص الإنتان مثل فائض القاعدة السلبي والتفاعل الالتهابي القوي الذي يقاس بواسطة سيتوكينات البلازما (6 ساعات بعد التطبيق) مثل CINC-1 (867 نانوغرام / مل) ، MCP-1 (5027 نانوغرام / مل) ، و IL-6 (867 نانوغرام / مل) 8 ، الشكل 5.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يسمح البروتوكول الموصوف هنا بنموذج إنتان قابل للتكرار للغاية ، ولكنه بسيط لتعلم الإنتان ، والذي يمكن تكييفه وفقا لسؤال البحث. يمكن جمع البيانات الأساسية في الجسم الحي التي تشير إلى وظائف الأعضاء مثل معدل ضربات القلب وضغط الدم وتشبع الأكسجين الشرياني المحيطي بشكل مستمر ، ويمكن إجراء أخذ عينات الدم بشكل متكرر طوال التجربة. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن تثبيت التعديلات المتعلقة ببروتوكولات استبدال السوائل ودعم ضاغط الأوعية. بالنظر إلى استقرار الدورة الدموية للحيوانات ، يمكن إجراء التجارب على مدار عدة ساعات ، كما ذكر سابقا

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين تضارب في المصالح فيما يتعلق بالدراسة المقدمة. قدم مارتن شلابفر براءة اختراع للتخفيف من الآثار السلبية للجراحة و / أو التخدير للمرضى الذين يستخدمون الغازات الطبية ، وخاصة الأكسجين (O 2) وثاني أكسيد الكربون (CO2). وقد حصل على منح بحثية غير مقيدة من شركة سيدانا الطبية، السويد، ومن روش، سويسرا، لا علاقة لها بهذا العمل.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يود المؤلفان أن يشكرا بياتريس بيك شيمر (MD) وإريك شاده (MD) على فحصهما النقدي ومساهمتهما القيمة في هذه المخطوطة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
2-0 خيوط حريريةEthicon ، Sommerville ، NJK833قياسي جراحي
26 قسطرة وريديةBecton Dickinson ، Franklin Lakes ، NJ391349معدات التخدير القياسية
6-0 LOOK الحرير الأسود مضفرSurgical Specalities Corporation ، Wyomissing ، PASP114Alaris الجراحية القياسية
Bencton Dickinson
BetadineMundipharma ، بازل ، سويسرا7.68034E + 12رقم GTIN
ملقط دقيق منحني أطراف دقيقةدقيقة عالمية (WPI) ، ساراسوتا ، فلوريدا504513يسهل تحضير الأوعية
الدموية أطراف دقيقة ملقطدقيق الأدوات الدقيقة للأدوات الدقيقة (WPI) ، ساراسوتا ، فلوريدا501976يجب تلميع النصائح بانتظام
مراقبة التخدير Infinity Delta XLDraeger, Lü بيك ، ألمانيا
إيزوفلوران ، زجاجات 250 ملAttane ، Piramal ، مومباي ، الهندLDNI 22098قياسي بيطري المعدات
الكيتامين (Ketalar)Pfitzer ، نيويورك ، نيويورك
عديدات السكاريد الدهنية (LPS) من الإشريكية القولونية < / em> ، النمط المصلي 055: B5Sigma ، Buchs ، سويسرا
Q-tips الصغيرةCarl Roth GmbH ، كارلسروه ، ألمانياEH11.1الجراحية
القياسية RingerfundinBbraun ، Melsungen ، ألمانيا
Tec-3 IsofluoraneVaporizer Ohmeda ، GE-Healthcare ، Chicago ، ILلم يعد متوفرا بعد الآنالبيطرية القياسية
Xylazine (Xylazin Streuli)Streuli AG ، أوزناش ، سويسرا
مضخة حقنة أدوات المعدات

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Hotchkiss, R. S., Karl, I. E. The pathophysiology and treatment of sepsis. New England Journal of Medicine. 348 (2), 138-150 (2003).
  2. Singer, M., et al. The Third International Consensus Definitions for Sepsis and Septic Shock (Sepsis-3). Journal of the American Medical Association. 315 (8), 801-810 (2016).
  3. Vincent, J. L., et al. Assessment of the worldwide burden of critical illness: the intensive care over nations (ICON) audit. Lancet Respiratory Medicine. 2 (5), 380-386 (2014).
  4. Fleischmann, C., et al. Assessment of Global Incidence and Mortality of Hospital-treated Sepsis. Current Estimates and Limitations. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 193 (3), 259-272 (2016).
  5. Kumar, A., et al. Duration of hypotension before initiation of effective antimicrobial therapy is the critical determinant of survival in human septic shock. Critical Care Medicine. 34 (6), 1589-1596 (2006).
  6. Gotts, J. E., Matthay, M. A. Sepsis: pathophysiology and clinical management. British Medical Journal. 353, (2016).
  7. Akira, S., Takeda, K. Toll-like receptor signalling. Nature Reviews Immunology. 4 (7), 499-511 (2004).
  8. Urner, M., et al. Insight into the beneficial immunomodulatory mechanism of the sevoflurane metabolite hexafluoro-2-propanol in a rat model of endotoxaemia. Clinical and Experimental Immunology. 181 (3), 468-479 (2015).
  9. Beck-Schimmer, B., et al. Which Anesthesia Regimen Is Best to Reduce Morbidity and Mortality in Lung Surgery?: A Multicenter Randomized Controlled Trial. Anesthesiology. 125 (2), 313-321 (2016).
  10. Deitch, E. A. Animal models of sepsis and shock: a review and lessons learned. Shock. 9 (1), 1-11 (1998).
  11. Buras, J. A., Holzmann, B., Sitkovsky, M. Animal models of sepsis: setting the stage. Nature Reviews Drug Discovery. 4 (10), 854-865 (2005).
  12. Perretti, M., Duncan, G. S., Flower, R. J., Peers, S. H. Serum corticosterone, interleukin-1 and tumour necrosis factor in rat experimental endotoxaemia: comparison between Lewis and Wistar strains. British Journal of Pharmacology. 110 (2), 868-874 (1993).
  13. Marechal, X., et al. Endothelial glycocalyx damage during endotoxemia coincides with microcirculatory dysfunction and vascular oxidative stress. Shock. 29 (5), 572-576 (2008).
  14. Thiemermann, C., Ruetten, H., Wu, C. C., Vane, J. R. The multiple organ dysfunction syndrome caused by endotoxin in the rat: attenuation of liver dysfunction by inhibitors of nitric oxide synthase. British Journal of Pharmacology. 116 (7), 2845-2851 (1995).
  15. Osuchowski, M. F., et al. Minimum quality threshold in pre-clinical sepsis studies (MQTiPSS): an international expert consensus initiative for improvement of animal modeling in sepsis. Intensive Care Medicine Experimental. 6 (1), 26(2018).
  16. Fink, M. P., Heard, S. O. Laboratory models of sepsis and septic shock. Journal of Surgical Research. 49 (2), 186-196 (1990).
  17. Buras, J. A., Holzmann, B., Sitkovsky, M. Animal models of sepsis: Setting the stage. Nature Reviews Drug Discovery. 4 (10), 854-865 (2005).
  18. Balls, M. The principles of humane experimental technique: timeless insights and unheeded warnings. Altex-Alternatives to Animal Experimentation. 27 (2), 144-148 (2010).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة