هنا، نقدم طريقة بسيطة لفصل الخلايا الجريبية والبويضات في بصيلات المبيض حمار وحشي، والتي سوف تسهل التحقيقات في تطور المبيض في حمار وحشي.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
فصل الخلايا الجريبية والبويضات في بصيلات المبيض من حمار وحشي
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
أصبح حمار وحشي نموذجا مثاليا لدراسة تطور المبيض من الفقاريات. الجريبات هي الوحدة الأساسية للمبيض ، والتي تتكون من البويضات والخلايا الجريبية المحيطة بها. من الضروري فصل كل من الخلايا الجريبية والبويضات لأغراض بحثية مختلفة مثل الثقافة الأولية للخلايا الجريبية ، وتحليل التعبير الجيني ، ونضوج البويضات والإخصاب في المختبر ، إلخ. تستخدم الطريقة التقليدية ملقط لفصل كلا المقصورتين ، وهو أمر شاق ويستغرق وقتا طويلا ويلحق ضررا كبيرا بالبويضات. هنا، أنشأنا طريقة بسيطة لفصل كلا المقصورتين باستخدام الشعيرات الدموية الزجاجية سحبت. تحت منظار مجسم ، يمكن فصل البويضات والخلايا الجريبية بسهولة عن طريق الأنابيب في الشعيرات الدموية الزجاجية الدقيقة التي يتم سحبها (يعتمد القطر على قطر الجريب). بالمقارنة مع الطريقة التقليدية، هذه الطريقة الجديدة لديها كفاءة عالية في فصل كل من البويضات والخلايا الجريبية ولها ضرر منخفض للبويضات. والأهم من ذلك، يمكن تطبيق هذه الطريقة على بصيلات المرحلة المبكرة بما في ذلك في مرحلة ما قبل تكوين الفيتيلوجينيسيس. وهكذا، يمكن استخدام هذه الطريقة البسيطة لفصل الخلايا الجريبية والبويضات من حمار وحشي.
المقدمة
حمار وحشي هو كائن نموذجي رئيسي لدراسة تطوير الفقاريات وعلم وظائف الأعضاء. الحمار الوحشي يمكن أن تكون بمثابة نموذج جيد لدراسة الآليات الجزيئية لتطوير المبيض1،2،3. يتم الحفاظ على العديد من ملامح تطور المبيض كثيرا خلال التطور من الأسماك إلى الثدييات1،2. على غرار الفقاريات الأخرى ، فإن البالغين حمار وحشي لديهم مبايض غير متزامنة ، تحتوي على بصيلات المبيض لجميع مراحل النمو4. الجريب هو العنصر التناسلي الأساسي للمبيض. تتكون الجريبات من البويضات التي تحيط بها طبقة أو عدة طبقات من الخلايا الجسدية تسمى ال....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
جميع الإجراءات التي أجريت في تجارب الأسماك تتفق مع لوائح لجنة أخلاقيات التجارب على الحيوانات في جامعة نورث ويست العادية.
1. الاستعدادات
- الحيوانات
- استخدام حمار وحشي أنثى بالغة مع طول الجسم من 4-6 سم.
ملاحظة: استخدمنا حمار وحشي من السوق المحلية. - الحفاظ على حمار وحشي في نظام المياه المتداولة مع ضوء 14 ساعة ودورة مظلمة 10 ساعة في حوالي 28 درجة مئوية.
- إطعام الأسماك مرتين يوميا مع الروبيان محلول ملحي فقست حديثا.
- استخدام حمار وحشي أنثى بالغة مع طول الجسم من 4-6 سم.
- سحب الشعيرات الدموية الزجاجية
- استخدام شعيرات زجاجية 15 سم ووضع رأسه في موقد الكحول لتسخينه. عقد نهاية واحدة من الشعيرات الدموية الزجاجية باليد وعقد الطرف الآخر مع م....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يمكن استخدام هذه الطريقة لفصل الخلايا الجريبية والبويضات في مراحل مختلفة من تطور بصيلات المبيض في سمك الحمار الوحشي. الشكل 1 يظهر فصل البويضات حمار وحشي والخلايا الجريبية من بصيلات المبيض باستخدام أنبوب زجاجي شعري(الشكل 1). وللتحقيق فيما إذا كانت الخلايا الجريبية قد فصلت عن الجريبات السليمة، كانت الجريبات السليمة والبويضات المنفصلة عن مراحل مختلفة من الجريبات من مرحلة الكهروضوئية إلى مرحلة FG ملطخة ب DAPI (50 ميكروغرام/مل) عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. يمكن أ.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
نحن نصف هنا طريقة جديدة للفصل البسيط والسريع للخلايا الجريبية والبويضات من بصيلات المبيض حمار وحشي. هذا الأسلوب له العديد من المزايا على الطريقة التقليدية. ومن بين هذه العوامل الرئيسية زيادة سهولة الفصل بدرجة كبيرة مع كفاءة وفعالية عالية، حيث لا يلزم سوى معالجة واحدة وخارجية. هذه النقطة تزيد من إمكانية التطبيق على الباحثين الذين ليسوا جيدين في التشريح المجهري. وفقا لخبرتنا، يمكن للمرء أن يفصل بنجاح الخلايا الجريبية والبويضات من بصيلات المرحلة نمت بالكامل في غضون 5-10 ق باستخدام الشعيرات الدموية الزجاجية. ومع ذلك، هناك حا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.
شكر وتقدير
تم دعم هذا العمل البحثي من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين [32060170 و 31601205 و 31560334] ، وهو مشروع باحث زائر يدعمه مجلس المنح الدراسية الصيني وصندوق مختبر الدولة الرئيسي لإيكولوجيا المياه العذبة والتكنولوجيا الحيوية [2020FB05].
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 17 & alpha ؛ 20 & -DHP | كايمان | 16146-5 (5 مجم) | |
| 24 بئر صفيحة | كورنينج | 3524 | |
| قاطع أمبولة | AS ONE | 5-124-22 1 كيس (100 قطعة) لا | |
| مائي Na 2< / sub >HPO4< / sub> | Kaixin Chemical | 500 جرام | |
| روبيان محلول ملحي | Hongjie | 250 جم | |
| CaCl2< / sub> | Beichen Fangzheng | 500 جم | |
| طبق ثقافة | Biosharp | BS-90-D (10 قطعة / PK) DAPI | |
| Solarbio | S2110 (25 مل) | ||
| مجهر تشريح | ZEISS | Stemi 305 | |
| ملقط التشريح | VETUS | HRC30 | |
| مقص | تشريح كيفو | 160 مم | |
| المجهر المجسم الفلوري | Leica | M205C | |
| زجاج شعري | IWAKI | IK-PAS-5P (200 قطعة / عبوة) | |
| Hoechst 33342 | Solarbio | C0031 (1 مجم) KCl | |
| Beichen Fangzheng | 500 جم | ||
| KH2< / sub>PO4< / sub> | Kaixin Chemical | 500 g | |
| Leibovitz' s L-15 متوسط | Gibco | 41300-039 (10 & مرات ؛ 1L) | |
| MgSO4< / sub>& bull; 7H2< / sub>O | Beichen Fangzheng | 500 g | |
| أطراف ماصة دقيقة | Axygen | MCT-150-C | |
| NaCl | Beichen Fangzheng | 500 g | |
| NaHCO3< / sub> | Beichen Fangzheng | 500 g | |
| Penicilia-Streptomycia | Gibco | # 15140122 (100 مل) | |
| مجهر مجسم | ZEISS | اكتشف.v20 |
المراجع
- Clelland, E., Peng, C. Endocrine/paracrine control of zebrafish development. Molecular and Cellular Endocrinology. 312, 42-52 (2009).
- Ge, W. Intrafollicular paracr....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
