هنا نصف تحليل حلقة ضغط القلب الحجم تحت جرعات متزايدة من الايسوبروترينول غرست عن طريق الوريد لتحديد وظيفة القلب الجوهرية واحتياطيات β الأدرينالية في الفئران. نحن نستخدم نهج تعديل الصدر المفتوح لقياسات حلقة حجم الضغط ، والتي تشمل التهوية مع ضغط نهاية منتهية الصلاحية الإيجابية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
استجابة القلب لتحفيز β الأدرينالية التي يحددها تحليل حلقة حجم الضغط
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
تحديد وظيفة القلب هو تحليل نقطة النهاية قوية في النماذج الحيوانية لأمراض القلب والأوعية الدموية من أجل توصيف آثار علاجات محددة على القلب. نظرا لجدوى التلاعب الجيني أصبح الفأر النموذج الحيواني الثدييات الأكثر شيوعا لدراسة وظيفة القلب والبحث عن أهداف علاجية محتملة جديدة. هنا نحن نصف بروتوكول لتحديد وظيفة القلب في الجسم الحي باستخدام قياسات حلقة حجم الضغط والتحليل خلال الظروف القاعدية وتحت التحفيز β الأدرينالية عن طريق التسريب عن طريق الوريد من تركيزات متزايدة من الايسوبروترينول. نحن نقدم بروتوكول المكرر بما في ذلك دعم التهوية مع الأخذ في الاعتبار الضغط الإيجابي نهاية الزفير لتحسين الآثار السلبية خلال قياسات الصدر المفتوح، والتسكين قوية (Buprenorphine) لتجنب الإجهاد عضلة القلب لا يمكن السيطرة عليها التي أثارها الألم أثناء الإجراء. كل ذلك معا وصف مفصل للإجراء والمناقشة حول المزالق المحتملة تمكن عالية موحدة وقابلة للاستنساخ تحليل حلقة حجم الضغط، والحد من استبعاد الحيوانات من الفوج التجريبي عن طريق منع التحيز المنهجي ممكن.
المقدمة
أمراض القلب والأوعية الدموية تؤثر عادة على وظيفة القلب. تشير هذه المسألة إلى أهمية تقييم وظيفة القلب المفصلة في الجسم الحي في نماذج الأمراض الحيوانية. ويحيط التجارب على الحيوانات إطار من المبادئ التوجيهية ثلاثة روبية (3Rs) (خفض / صقل / استبدال). في حالة فهم الأمراض المعقدة التي تنطوي على استجابات نظامية (أي أمراض القلب والأوعية الدموية) على المستوى التنموي الحالي ، فإن الخيار الرئيسي هو تحسين الطرق المتاحة. كما سيؤدي التكرير إلى خفض أعداد الحيوانات المطلوبة بسبب التباين الأقل، مما يحسن من قوة التحليل والاستنتاجات. بالإضافة إلى ذلك ، فإن الجمع بين قياسات انقباض القلب مع النماذج الحيوانية لأمراض القلب بما في ذلك تلك الناجمة عن التحفيز العصبي أو الضغط الزائد مثل النطاقات....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت الموافقة على جميع التجارب على الحيوانات وتنفيذها وفقا للوائح المجلس الإقليمي كارلسروه وجامعة هايدلبرغ (AZ 35-9185.82/A-2/15، AZ 35-9185.82/A-18/15، AZ 35-9185.81/G131/15، AZ 35-9185.81/G121/17) تتوافق مع المبادئ التوجيهية الواردة في التوجيه 2010/63/EU للبرلمان الأوروبي بشأن حماية الحيوانات المستخدمة لأغراض علمية. البيانات المعروضة في هذا البروتوكول مشتقة من الفئران الذكور من النوع البري C57Bl6/N (17 ± 1.4 أسبوعا من العمر). تم الحفاظ على الفئران في ظل ظروف محددة خالية من مسببات الأمراض في منشأة الحيوان (IBF) التابعة لكلية هايدلبرغ الطبية. تم إيواء الفئران في دورة ضوء داكنة لمدة 12 ساعة ، مع رطوبة نسبية بين 56-60 ٪ ، وتغيير الهواء 15 مرة في الساعة ودرجة حرارة الغرفة....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
قياس حجم الضغط حلقة (PVL) هو أداة قوية لتحليل الديناميكا الدوائية القلبية للأدوية والتحقيق في النمط الظاهري القلبي لنماذج الماوس المعدلة وراثيا في ظل الظروف العادية والمرضية. يسمح البروتوكول بتقييم احتياطي β الأدرينالية القلبية في نموذج الماوس البالغ. هنا نصف طريقة مفتوحة الصدر تحت تخدير isoflurane جنبا إلى جنب مع البوبرينورفين (مسكن) وبانكورونيوم (ارتخاء العضلات)، والذي يركز على استجابة القلب لتحفيز β الأدرينالين عن طريق غرس تركيزات إيزوبروترينول من خلال قسطرة الوريد الفخذي. بعض البيانات التمثيلية المبينة في هذا البروتو.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هنا، ونحن نقدم بروتوكولا لتحليل وظيفة القلب في الجسم الحي في الفئران تحت التحفيز β الأدرينالين المتزايد. يمكن استخدام الإجراء لمعالجة كل من المعلمات الأساسية لوظيفة القلب واحتياطي الأدرينالين (على سبيل المثال ، inotropy و chronotropy) في الفئران المعدلة وراثيا أو عند التدخلات. الميزة الأبرز لقياسات حلقة حجم الضغط (PVL) بالمقارنة مع الوسائل الأخرى لتحديد وظيفة القلب هي تحليل وظيفة القلب الجوهرية والمستقلة عن الحمل. جميع الطرق الأخرى (مثل التصوير بالرنين المغناطيسي وتخطيط صدى القلب) يمكن تقييم المعلمات التي تعتمد على الحمل.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ولا يلزم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
ونحن ممتنون لمانويلا ريتزال، وهانز بيتر غينهايمر، وكريستين ريشتر، وفريق من جامعة هايدلبرغ للحصول على مساعدة تقنية من الخبراء.
وقد دعم هذا العمل المركز الألماني لأبحاث القلب والأوعية الدموية، وBMBF (وزارة التعليم والبحوث الألمانية)، ومؤسسة بادن فورتمبرغ الاتحادية للابتكار الحكومي، ومؤسسة دويتشه فورشونجسجيمينشافت (DFG، مؤسسة الأبحاث الألمانية) مشروع الهوية 239283807 - TRR 152، FOR 2289 ومركز البحوث التعاونية (SFB) 1118.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| قسطرة 1.4F SPR-839 | Millar Instruments ، الولايات المتحدة الأمريكية | 840-8111 | |
| 1 مل محاقن | بيكتون ديكنسون ، الولايات المتحدة الأمريكية | REF303172 | |
| مكبر للصوت الحيوي | ADInstruments ، الولايات المتحدة الأمريكية | FE231 | |
| مكبر للصوت الجسر | ADInstruments ، الولايات المتحدة الأمريكية | FE221 | |
| مصل البقر الألبومين | روث ، ألمانيا | 8076.2 | |
| بوبرينورفين هيدروكلوريد | باير ، ألمانيا | 4007221026402 | |
| معايرة كوفيت | ميلار ، الولايات المتحدة الأمريكية | 910-1049 | |
| محول الضغط التفاضلي MPX | Hugo Sachs Elektronik - جهاز هارفارد ، ألمانيا | النوع 39912 | |
| Dumont Fulcps # 5/45 | Fine Science Tools Inc. | 11251-35 | |
| شركة Dumont Fallps #7B | Fine Science Tools Inc. | 11270-20 | |
| Graefe Fallps | Fine Science Tools Inc. | 11051-10 | |
| برنامج GraphPad Prism | GraphPad | الإصدار 8.3.0 | |
| EcoLab-PE-Micotube | Smiths ، الولايات المتحدة الأمريكية | 004/310 / 168-1 | |
| Etomidate Lipuro | Braun ، ألمانيا | 2064006 | |
| Excel | Microsoft | ||
| Heparin | Ratiopharm ، ألمانيا | R26881 | |
| لوحة ساخنة ووحدة تحكم | Labotec ، ألمانيا | صفيحة ساخنة 062 | |
| Isofluran | Baxter ، ألمانيا | HDG9623 | |
| Isofluran Vaporizer | Abbot | Vapor 19.3 | |
| Isoprenalinhydrochloride | Sigma-Aldrich ، الولايات المتحدة الأمريكية | I5627 | |
| أنابيب البوليثين ذات التجويف الدقيق 0.61 مم OD ، 0.28 مم معرف | Smiths Medical International Ltd ، المملكة المتحدة | المرجع 800/100/100 | |
| MiniVent جهاز التنفس الصناعي للفئران | Hugo Sachs Elektronik - جهاز هارفارد ، ألمانيا | نوع 845 | |
| MPVS Ultra PVL System | Millar Instruments ، الولايات المتحدة الأمريكية | ||
| NaCl | AppliChem ، ألمانيا | A3597 | |
| كلوريد الصوديوم 0.9٪ متساوي التوتر | براون ، ألمانيا | 2350748 | |
| Pancuronium-bromide | Sigma-Aldrich ، الولايات المتحدة الأمريكية | BCBQ8230V | |
| Perfusor 11 بالإضافة إلى | Harvard Apparatus | Nr. 70-2209 | |
| Powerlab 4/35 وحدة التحكم | ADInstruments ، الولايات المتحدة الأمريكية | PL3504 | |
| مجموعة الكي القابلة لإعادة الشحن | Faromed ، ألمانيا | 09-605 | |
| Scissors | Fine Science Tools Inc. | 140094-11 | |
| Software LabChart 7 Pro | ADInstruments ، الولايات المتحدة الأمريكية | LabChart 7.3 Pro | |
| طعام الماوس | القياسي LASvendi GmbH ، ألمانيا | Rod18 | |
| مجهر ستيريو | زايس ، ألمانيا | Stemi 508 | |
| خياطة جراحية 8/0 | سوبراما ، ألمانيا | Ch.B.03120X | |
| Venipuncture-cannula Venflon Pro Safty 20-gauge | بيكتون ديكنسون ، الولايات المتحدة الأمريكية | 393224 | |
| ملقط السفينة | أدوات العلوم الدقيقة Inc. | 00574-11 | |
| حمام مائي | ثيرمو فيشر العلمي ، الولايات المتحدة الأمريكية | ||
| مرشح حقنة (Filtropur S 0.45) | Sarstedt ، ألمانيا | المرجع 83.1826 |
المراجع
- Bacmeister, L., et al. Inflammation and fibrosis in murine models of heart failure. Basic Research in Cardiology. 114 (3), 19(2019).
- Hartupee, J., Mann, D. L. Neurohormonal activation in heart failure with reduced ejection fraction. Nature ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
