يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

حقن الخلايا الجذعية الوسيطة البشرية في التجويف الشوكي وتتبع هجرتها إلى دماغ الفئران

1.7K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/62120

⸱

فبراير 3, 2021

 ,  ,  ,  ,  , 

في هذه المقالة

ملخص

يمكن استخدام عدة طرق للإعطاء لتوصيل الخلايا الجذعية الوسيطة (MSCs) إلى الدماغ. في هذه الدراسة ، تم تسليم الخلايا الجذعية الجذعية في جميع أنحاء المحور العصبي والدماغ عن طريق الحقن داخل التجويف الشوكي. تم حقن الخلايا الجذعية الجذعية في تجاويف العمود الفقري للفئران ، وتم تتبع هجرة الخلايا الجذعية وقياسها كميا.

الملخص

تمت دراسة الخلايا الجذعية الوسيطة (MSCs) لعلاج الأمراض المختلفة. في الأمراض التنكسية العصبية التي تنطوي على عيوب في كل من الدماغ والحبل الشوكي ، يكون طريق الإعطاء مهما للغاية ، لأن الخلايا الجذعية الجذعية يجب أن تهاجر إلى كل من الدماغ والحبل الشوكي. تصف هذه الورقة طريقة لإعطاء الخلايا الجذعية الجذعية في القناة الشوكية (حقن التجويف الشوكي) التي يمكن أن تستهدف الدماغ والحبل الشوكي في نموذج الفئران. تم حقن مليون MSC في القنوات الشوكية للفئران على مستوى الفقرات القطنية 2-3. بعد الإعطاء ، تم القتل الرحيم للفئران في 0 و 6 و 12 ساعة بعد الحقن. تم استخدام التصوير البصري وتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الفعلي (qPCR) لتتبع الخلايا الجذعية الجذعية المحقونة. أظهرت نتائج الدراسة الحالية أن الخلايا الجذعية الجذعية التي يتم إعطاؤها عبر التجويف الشوكي يمكن اكتشافها لاحقا في كل من الدماغ والحبل الشوكي في 12 ساعة. يتميز الحقن داخل التجويف الشوكي بعدم الحاجة إلى تخدير عام وله آثار جانبية قليلة. ومع ذلك ، يجب التغلب على عيب معدل الهجرة المنخفض للخلايا الجذعية الجذعية إلى الدماغ.

المقدمة

الخلايا الجذعية الوسيطة
في ظل الظروف المرضية ، تفرز الخلايا الجذعية الجذعية مواد علاجية خاصة بالمرض عن طريق إجراءات الباراكرين1 التي تم الإبلاغ عنها لتنظيم الاستجابات المناعية واستعادة الأنسجة التالفة وإزالة المواد السامة2. لذلك ، يعتبر علاج MSC أكثر فعالية من العلاج أحادي الهدف في علاج الأمراض متعددة العوامل مثل مرض الزهايمر والساركوبينيا3،4،5،6. بالإضافة إلى ذلك ، على عكس المستحضرات الصيدلانية ، فإن الخلايا الجذعية الجذعية لها تأثير موجه ،....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

ملاحظة: تمت الموافقة على هذه الدراسة من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدامه (رقم الموافقة: 20170125001 ، التاريخ: 25 يناير 2017) لمعهد سامسونج للأبحاث الطبية الحيوية (SBRI) في مركز سامسونج الطبي. بصفتها مرفقا معتمدا من الرابطة الدولية لتقييم واعتماد رعاية المختبر ، تعمل الهيئة الفرعية للتنفيذ وفقا للمبادئ التوجيهية التي وضعها معهد الموارد الحيوانية المختبرية.

1. تحضير الخلايا الجذعية الجذعية المشتقة من الهلام من وارتون البشري

  1. زراعة الخلايا الجذعية الوسيطة المشتقة من الهلام البشري في وارتون (WJ-MSCs)
    1. قم بإذابة قارورة WJ-MSCs البشرية بسرعة في حمام مائي 37 درجة مئوية. انقل WJ-MSCs إلى أن....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

لتقييم فعالية حقن الخلايا الجذعية الجذعية داخل النخاع ، تم استخدام الخلايا الجذعية الجذعية المسماة DiD في هذه الدراسة. قبل حقن الخلايا الجذعية الجذعية في التجويف الشوكي ، تم تقييم فعالية وضع العلامات في المختبر باستخدام التصوير البصري والفحص المجهري الفلوري (الشكل 1). بعد تلطيخ الخلايا الجذعية الجذعية بكاشف وضع العلامات DiD باستخدام الإجراء الموضح في قسم البروتوكول 3.1 ، تم التقاط صور بصرية لألواح الاستزراع التي تم زرع الخلايا الجذعية الجذعية المسمى عليها DiD (الشكل 1 أ<.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

يجب اختيار الطريقة المثلى للإعطاء للعلاج باستخدام الخلايا الجذعية الجذعية اعتمادا على المرض المستهدف وحالة المريض ونوع الدواء المراد تسليمه. في العلاجات الخلوية ، بما في ذلك علاج MSC ، يجب مراعاة الحقن المباشر للخلايا الجذعية في الدماغ أو داخل القراب عبر السائل الدماغي النخاعي لأن الخلايا لا يمكن أن تمر عبر BBB19. الحقن داخل التجويف الشوكي غير جراحي نسبيا ولا يسبب تلفا في الخلايا العصبية في الدماغ ، على عكس الحقن داخل المخ البطيني ، ويرتبط بانخفاض خطر الآثار الجان.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

تم دعم هذه الدراسة بمنح من برنامج البحوث الأساسية من خلال المؤسسة الوطنية للبحوث في كوريا الجنوبية (NRF) ، بتمويل من وزارة التعليم (NRF-2017R1D1A1B03035940) ، ومنحة من مشروع البحث والتطوير في مجال التكنولوجيا الصحية الكوري من خلال المعهد الكوري لتطوير الصناعة الصحية (KHIDI) ، بتمويل من وزارة الصحة والرعاية الاجتماعية ، جمهورية كوريا (أرقام المنح: HI14C3484 و HI18C0560). نود أن نشكر Editage (www.editage.co.kr) على التحرير باللغة الإنجليزية.

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
0.25٪ تريبسين-EDTAجيبكو إنفيتروجين25200114زراعة الخلايا
مصل الأبقار الجنينيbiowestS1520مكمل متوسط
الثقافة gentamicinGibco-invitrogen15710-072مكمل متوسط ثقافة
مجموعة الأنسجة جينترا بيورجينكياجين158689عزل gDNA
MEM ، بدون جلوتامين ، بدون فينول أحمرGibco51200038WJ-MSC fomulation للحقن
Miminum Essential Medium alphaGibco-invitrogen12571063WJ-MSC ثقافة
متوسطة الطاقة SYBR Green PCR Master Mixالأنظمة الحيوية التطبيقية4368577الكمي في الوقت الحقيقي كاشف PCR
QuantStudio 6 Flex في الوقت الحقيقي نظام PCRThermo fisher4485694الكمي في الوقت الحقيقي
PCR trypan الأزرقGibco15250061Injection
Vybrant DiD Cell-Labeling SolutioninvitrogenV22887حل وضع العلامات على الخلايا الجذعية
Xenogen IVIS نظام الطيفPerkin Elmer124262التصوير البصري
جهاز

المراجع

  1. Gnecchi, M., Danieli, P., Malpasso, G., Ciuffreda, M. C. Paracrine mechanisms of mesenchymal stem cells in tissue repair. Methods in Molecular Biology. 1416, 123-146 (2016).
  2. Liang, X., Ding, Y., Zhang, Y., Tse, H. F., Lian, Q. Paracrine....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

هجرة الخلايا الجذعيةالنخاع الشوكيالأمراض التنكسية العصبيةالتصوير البصريتفاعل البلمرة المتسلسل الكميتتبع الخلايا الجذعيةالحقن في القناة الشوكية

تم نشر هذه المقالة

الفيديو قريباً