نقدم بروتوكولا لتوليد حركة الأسنان التقويمية في الفئران وطرق التصور ثلاثي الأبعاد لألياف الكولاجين والأوعية الدموية للأربطة اللثة دون تقسيم.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
التصوير ثلاثي الأبعاد لألياف الكولاجين PDL أثناء حركة تقويم الأسنان في نموذج مورين الفك السفلي
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
حركة الأسنان التقويمية هي عملية بيولوجية معقدة لتغيير الأنسجة الرخوة والثابتة نتيجة للقوى الخارجية. من أجل فهم عمليات إعادة العرض المعقدة هذه ، من المهم دراسة أنسجة الأسنان واللثة ضمن سياقها ثلاثي الأبعاد وبالتالي تقليل أي قطع أثرية من الأقسام والأنسجة. وغالبا ما تستخدم نماذج الماوس في علم الأحياء التنموية والهيكلية، وكذلك في الميكانيكا الحيوية نظرا لصغر حجمها، وارتفاع معدل الأيض، وعلم الوراثة وسهولة التعامل معها. من حيث المبدأ هذا أيضا يجعلها نماذج ممتازة للدراسات المتعلقة بالأسنان. ومع ذلك ، فإن العائق الرئيسي هو صغر حجم الأسنان ، والأضراس على وجه الخصوص. تهدف هذه الورقة إلى توفير بروتوكول خطوة بخطوة لتوليد حركة الأسنان التقويمية وطرقتين للتصوير ثلاثي الأبعاد للمكون الليفي للأربطة اللثة من ضرس الفك السفلي للفأرة. تعتمد الطريقة الأولى المقدمة على إعداد التصوير المقطعي الدقيق الذي يتيح تصوير المرحلة لتعزيز أنسجة الكولاجين الطازجة. الطريقة الثانية هي طريقة تطهير العظام باستخدام إيثيل سينامات التي تمكن التصوير من خلال العظام دون تقسيم ويحافظ على الفلورية الذاتية. الجمع بين هذه الطريقة المقاصة مع الفئران مراسل مثل Flk1-كري; قدمت TdTomato فرصة أولى من نوعها لتصوير الأوعية ثلاثية الأبعاد في PDL وعظم الحويصلات.
المقدمة
العملية البيولوجية الأساسية الكامنة في حركة الأسنان التقويمية (OTM) هي إعادة عرض العظام. ويعزى الزناد لعملية إعادة عرض هذه التغييرات في هيكل الرباط اللثة (PDL) مثل الإجهاد خارج الخلية (ECM) ، نخر وكذلك تدمير الأوعية الدموية وتشكيل1،2،3. ترتبط المحفزات المحتملة الأخرى لإعادة عرض العظام الحويصلات الشمسية باستشعار القوة بواسطة الخلايا العظمية في العظام ، وكذلك التشوه الميكانيكي للعظم الحويصلات الدموية نفسه ؛ لكن دورهم في OTM لا يزال غير توضيح كامل4,5.
على الرغم من العديد من الدراسات التي تهدف ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
أجريت جميع التجارب على الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية للمعهد القومي للصحة لرعاية واستخدام المختبر والمبادئ التوجيهية الصادرة عن اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها في جامعة هارفارد (البروتوكول رقم 01840).
1. حركة الأسنان التقويمية
- لتوليد سرير فأر، استخدم منصة بلاستيكية مسطحة مع مسند رأس على شكل إسفين بزاوية 45 درجة. يمكن إنشاء مسند الرأس عن طريق قطع صندوق بلاستيكي.
- رفع نهاية الرأس من المنصة لتوليد زاوية 30 درجة تقريبا بين مسند الرأس والطائرة الجدول. إرفاق مشبك ورق سميك عازمة (0.036 "في القطر) إلى نهاية الجانب الرأس لعقد القواطع العلوية.
- على نهاية الذيل، وتوليد سطح مرتفعة التي يمكن إرفاق سلسلة طاقة تقوي....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تقدم هذه الورقة طريقة لإنتاج OTM بالإضافة إلى طريقتين للتصوير ثلاثي الأبعاد لألياف الكولاجين داخل PDL دون أي تقسيم. لأغراض البحث الحيواني ، عندما لا تكون محاذاة الأسنان ضرورية ، تعتبر حركة الأسنان تقويم الأسنان إذا كانت تولد إعادة عرض عظم السنفية على جميع مستويات الجذر. مطلوب مستوى القوة الثابتة المطبقة على الأسنان من أجل توليد OTM موثوق بها. هنا، يتم استخدام لفائف NiTi تنشيط شكل الذاكرة لتوليد قوة متسقة من 10 غرام طوال الوقت التجريبي من 7 أيام وما بعدها إذا كان ذلك مبررا. تفعيل لفائف وصفها هنا (الشك.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
توليد OTM في الفئران مرغوب فيه للغاية بسبب الحجم وعلم الوراثة ومزايا المناولة. استخدام الفك السفلي يوفر سهولة التعامل مع كل من حيث تشريح الأنسجة وكذلك إعداد العينة والتصوير. هنا قدمنا طريقة لتوليد OTM مع حركة تحويلية من الأسنان داخل العظام في غضون 7 أيام من OTM. باستخدام هذا البروتوكول ، يمكن تمديد المدة الإجمالية لحركة الأسنان ، لأن الملف المنشط يوفر مستوى قوة ثابت للحركة يصل إلى حوالي 1 مم. ومع ذلك ، يتم إصلاح الجانب المليطي من الملف إلى القاطع ، الذي يثور باستمرار. ونتيجة لذلك، فإن ناقلات القوة تتغير تدريجيا وتبدأ في .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.
شكر وتقدير
وقد دعمت هذه الدراسة من قبل المعاهد القومية للصحة (NIDCR R00- DE025053، PI:Naveh). نود أن نشكر مركز هارفارد للتصوير البيولوجي على البنية التحتية والدعم. يتم إنشاء جميع الأرقام مع biorender.com.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 1-مل BD Luer-Lok حقنة | BD | 309628 | |
| 1X فوسفات مخزن محلول ملحي | VWR علوم الحياة | 0780-10L | |
| 200 دليل على الإيثانول | VWR علوم الحياة | V1016 | |
| سبائك الألومنيوم 5019 سلك | Sigma-aldrich | GF15828813 | سلك قطره 0.08 مم ، طول 100 ، معتدل صعب. تستخدم كربط سلكي حول الضرس |
| Avizo 9.7 | Thermo Fisher Scientific | N / A | تستخدم لتحليل عمليات المسح المقطعي المحوسب الدقيقة |
| Castroviejo حاملات الإبر الدقيقة | أدوات العلوم | الدقيقة 12060-01 | |
| Clr Plan-Apochromat 20x / 1.0 ، CorrVIS-IR M27 85mm | Zeiss | N / A | تستخدم للتصوير التوافقي الثاني |
| مقبض المقبس المخروطي ، طرف واحد ، يدوي | G.Hartzell وابنه | 126-CSH3 | مقبض مرآة التفتيش |
| EC Plan-Neofluar 5x / 0.16 | Zeiss | 440321-9902 | تستخدم لتصوير الألواح الخفيفة |
| Elipar DeepCure-S LED ضوء | المعالجة 3M ESPE | 76985 | |
| أنابيب القفل الآمن Eppendorf ، 1.5 مل | Eppendorf | 22363204 | |
| إيثيل سينامات ، > = 98٪ | Sigma-aldrich | W243000-1KG-K | |
| إبرة تحت الجلد ، 27 جم × 1/2 بوصة | BD | 305109 | |
| Ketathesia 100mg / ml | Henry Schein Animal Health | NDC: 11695-0702-1 | |
| KIMWIPES ماسحات المهام الحساسة | Kimberly-Clark | 21905-026 (رقم كتالوج VWR) | تم شراؤها من |
| VWR LightSheet Z.1 نظام مجهر الإضاءة المزدوج | Zeiss | LightSheet Z.1 / LightSheet 7 | تستخدم لتصوير الألواح الخفيفة |
| LSM 880 NLO متعدد الفوتون المجهر | Zeiss | LSM 880 NLO | يستخدم للتصوير ثنائي الفوتون |
| MEGAmicro ، طائرة ، قطر 5 مم ، SS-Thread | Hahnenkratt | 6220 | MicroCT مرآة تspectrio للسطح |
| الأمامي ، MicroXCT-200 | Xradia | MICRO XCT-200 | |
| Mini-Colibri | Fine Science | Tools 17000-01 | |
| PermaFlo مركب قابل للتدفق | Ultradent | 948 | |
| منصة الإجراء | N / A | N / A | مصنوعة حسب الطلب من مواد المختبر |
| ميكروسكوب ستيريو روتيني M80 | Leica Micosystems | M80 | |
| Sentalloy NiTi لفائف مفتوحة زنبرك | TOMY Inc. | يوفر ملف NiTi المغلق بقطر 0.15 مم بقطر ملف داخلي يبلغ 0.9 مم قوة 10 جرام. يمكن شراء منتجات مماثلة من Dentsply Sirona. | |
| سلك ربط من الفولاذ المقاوم للصدأ T-304 ، قطر 0.009 بوصة | تقويم | SBLW109 | 0.009 بوصة (.23 مم) ، مزاج ناعم |
| X-Ject E (زيلازين) 100 مجم / مل | هنري شاين لصحة | NDC: 11695-7085-1 | |
| Z100 تصالحي ، ظل A2 | 3M ESPE | 5904A2 |
المراجع
- Li, Y., et al. Orthodontic tooth movement: The biology and clinical implications. The Kaohsiung Journal of Medical Sciences. 34 (4), 207-214 (2018).
- Meikle, M. C. The tissue, cel....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
