استخدام جنين الدجاج كأداة قوية في تقييم السموم القلبية التنموية

Summary

تستخدم أجنة الدجاج، كنموذج نمو كلاسيكي، في مختبرنا لتقييم السموم القلبية التنموية بعد التعرض لمختلف الملوثات البيئية. ويرد في هذه المخطوطة وصف لأساليب التعرض وأساليب التقييم المورفولوجية/الوظيفية المقررة.

Abstract

أجنة الدجاج هي نموذج كلاسيكي في الدراسات التنموية. خلال تطور أجنة الدجاج ، يتم تحديد النافذة الزمنية لتطور القلب بشكل جيد ، ومن السهل نسبيا تحقيق التعرض الدقيق وفي الوقت المناسب عبر طرق متعددة. وعلاوة على ذلك، فإن عملية نمو القلب في أجنة الدجاج مماثلة للثدييات، مما يؤدي أيضا إلى قلب من أربع غرف، مما يجعله نموذجا بديلا قيما في تقييم السموم القلبية التنموية. في مختبرنا، يتم استخدام نموذج جنين الدجاج بشكل روتيني في تقييم السموم القلبية التنموية بعد التعرض لمختلف الملوثات البيئية، بما في ذلك المواد لكل وبوليفلوروالكيل (PFAS)، والجسيمات (PMs)، وعوادم الديزل (DE) ومواد النانو. يمكن اختيار وقت التعرض بحرية بناء على الحاجة ، من بداية التطور (اليوم الجنيني 0 ، ED0) على طول الطريق إلى اليوم السابق للفقس. وتشمل طرق التعرض الرئيسية حقن خلايا الهواء، والتحنيم الدقيق المباشر، واستنشاق خلايا الهواء (التي تم تطويرها في الأصل في مختبرنا)، وتشمل نقاط النهاية المتاحة حاليا وظيفة القلب (تخطيط القلب)، والمورفولوجيا (التقييمات النسيجية) والتقييمات البيولوجية الجزيئية (الكيمياء المناعية، qRT-PCR، النشاف الغربي، وما إلى ذلك). وبطبيعة الحال، فإن نموذج جنين الدجاج له حدوده الخاصة، مثل محدودية توافر الأجسام المضادة. ومع ذلك، مع المزيد من المختبرات التي بدأت في استخدام هذا النموذج، يمكن استخدامه لتقديم مساهمات كبيرة في دراسة السموم القلبية التنموية.

Introduction

جنين الدجاج هو نموذج النمو الكلاسيكي، والذي تم استخدامه لأكثر من مائتي سنة¹. نموذج جنين الدجاج له مزايا مختلفة بالمقارنة مع النماذج التقليدية. بادئ ذي بدء ، في وقت مبكر منذ أكثر من 70 عاما ، تم توضيح التطور الطبيعي لجنين الدجاج بوضوح شديد في دليل هامبورغر هاملتون^{التدريج 2}، حيث تم تعريف ما مجموعه 46 مرحلة خلال نمو جنين الدجاج مع الوقت الدقيق والخصائص المورفولوجية ، مما يسهل الكشف عن التطور غير الطبيعي. بالإضافة إلى ذلك ، فإن نموذج جنين الدجاج له ميزات أخرى مثل كونه منخفض التكلفة نسبيا وزائدا عن الحاجة من حيث الكمية ، وضوابط دقيقة نسبيا لجرعة التعرض ، ونظام مستقل مغلق داخل القشرة والتلاعب السهل بالجنين النامي ، وكلها تضمن ....

Protocol

وقد وافقت اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوان واستخدامه التابعة لجامعة تشينغداو على جميع الإجراءات الموصوفة. في مختبرنا، تم احتضان البيض في حاضنتين. تم وضع البيض منتصبا في الحاضنة ووضع بشكل عشوائي على الرفوف. وكانت ظروف حضانة البيض على النحو التالي: بدأت درجة حرارة الحضانة عند 37.9 درجة مئوية، وانخفضت تدريجيا إلى 37.1 درجة مئوية مع استمرار الحضانة؛ بدأت الرطوبة في 50٪ وزادت تدريجيا إلى 70٪.

1. طرق التعرض

ملاحظة: يمكن أن يتحقق التعرض للملوثات البيئية لأجنة الدجاج بعدة طرق. في هذا القسم، يتم وصف ثلاث طرق مستخدمة بشكل روتيني بالتفصيل.

1. حقن خلايا الهواء (الشكل 1)
   ملاحظة: هذه هي طر....

Results

نتائج التعرض
حقن خلايا الهواء
يمكن لحقن خلايا الهواء أن يعرض بشكل فعال الأجنة الدجاج النامية لمختلف العوامل، والتي يمكن الكشف عنها في وقت لاحق في العينات التي تم جمعها (المصل والأنسجة، وما إلى ذلك) من الأجنة / الدجاج الفقس. وفيما يلي مثال على ذلك، حيث تم حقن حمض البيرفلوروكتانويك (PFOA) بالخلايا الهوائية، ثم تم تحديد تركيزات PFOA المصلية باستخدام قياس الطيف الكروماتوغرافي الكتلي السائل فائق الأداء. وكانت تركيزات المصل تتوافق مع الجرعات المحقونة، مما يدل على فعالية هذا الإجراء(الشكل 6)........

Discussion

وقد تم جنين الدجاج نموذجا كلاسيكيا في الدراسات التنموية لمدة 200 سنة¹. وقد استخدمت أساليبنا المعروضة في هذه المخطوطة في تقييم العديد من الملوثات البيئية، بما في ذلك حمض البيرفلوروكتانويك، والجسيمات، وعوادم الديزل مع نجاح^{5و7و8و9و10و11و12}. مع هذه الأساليب، وأشار السمية .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
4٪ فوسفات مخزن فورمالديهايد	المثبت Biosharp ، Hefei ، الصين	المرجع: BL539A
75٪ إيثانول	Guoyao ، شنغهاي ، الصين	CAS: 64-17-5
شاشة الإشارات الحيوية BL-420E +	Taimeng ، تشنغدو ، الصين	BL-420E + < / sup>
مصباح Candling	Zhenwei ، Dezhou ، الصين	WZ-001
حقنة يمكن التخلص منها	Zhiyu ، Jiangsu ، الصين
حاضنة البيض	Keyu ، Dezhou ، الصين	KFX
التوازن الكهربائي	OHAUS ، شنغهاي ، الصين	AR 224CN
حاضنة كهربائية حرارية	Shenxian ، شنغهاي ، الصين	DHP-9022
الإيثانول المطلق	Guoyao ، شنغهاي ، الصين	CAS: 64-17-5
بيضة	دجاج خصبةJianuo ، Jining ، China
Hematoxylin و Eosin Staining Kit	Beyotime ، Bejing ، الصين	C0105
الأنسجة البارافين	علاء الدين ، شنغهاي ، الصين	P100928-500 جرام	نقطة الذوبان 52 ~ 54 درجة ؛ C
الأنسجة البارافين	علاء الدين ، شنغهاي ، الصين	P100936-500 جرام	نقطة الانصهار 62 ~ 64 درجة ؛
قسطرة C IV	KDL ، تشجيانغ ، الصين		يجب أن تكون القسطرة ناعمة وبلاستيكية.
Lentivirus	Genechem ، شنغهاي ، الصين		تم تصميم / تصنيع الفيروس العدسي بشكل فردي بواسطة Genechem.
طقم تلطيخ ثلاثي الألوان من Masson	Solarbio ، بكين ، الصين	G1340
مسبار معدني	Jinuotai ، بكين ، الصين
حاقن دقيق (5 uL)	Anting ، شنغهاي ، الصين
مجهر	CAIKON ، شنغهاي ، الصين	XSP-500
Microtome	Leica ، ألمانيا	HistoCore BIOCUT
Microtome بليد	لايكا ، ألمانيا	لايكا 819
Pentobarbitual الصوديوم	Yitai Technology Co.، Ltd.،   ووهان ، الصين	CAS: 57-33-0
ماصة (10ul)	Sartorius ، ألمانيا
Povidone يوديد	Longyuquan ، تايان ، الصين
مقص	Anqisheng ، سوتشو ، الصين
محلول ملحي	معقم كيلون ، تشنغدو ، الصين
زيت عباد الشمس	Mighty Jiage ، جيانغسو ، الصين		يجب أن يعمل أي زيت عباد الشمس التجاري للاستهلاك
البشري Tape	M & G ، شنغهاي ، الصين
Tedlar PVF Bag (5L)	Delin ، Dalian ، الصين
خلاط Vortex	SCILOGEX ، روكي هيل ، CT ، الولايات المتحدة	MX-F
Xylene	Guoyao ، شنغهاي ، الصين	CAS: 1330-20-7