يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

تنقية وتوسيع الخلايا T القاتل الطبيعي الثابت الماوس في المختبر وفي دراسات في الجسم الحي

4.2K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/62214

⸱

فبراير 15, 2021

 ,  ,  , 
1Experimental Immunology Unit, Division of Immunology, Transplantation and Infectious Diseases, IRCCS San Raffaele Scientific Institute, 2Vita-Salute San Raffaele University

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

نحن نصف بروتوكول سريع وقوي لإثراء الخلايا القاتل الطبيعي الثابت T (iNKT) من طحال الماوس وتوسيعها في المختبر إلى أرقام مناسبة للدراسات المختبرية وفي الجسم الحي.

الملخص

الخلايا T القاتل الطبيعي الثابت (iNKT) هي خلايا ليمفاوية T تشبه الفطرية تعبر عن مستقبلات خلايا T شبه ثابتة (TCR) محفوظة محددة لمستضدات الدهون الذاتية أو الميكروبية التي يقدمها جزيء MHC غير متعدد الأشكال من الفئة I-RELATED CD1d. تدعم الدراسات قبل السريرية والسريرية دورا لخلايا iNKT في السرطان والمناعة الذاتية والأمراض المعدية. يتم الحفاظ على خلايا iNKT جدا في جميع أنحاء الأنواع وقد تم تسهيل تحقيقها من خلال نماذج الماوس ، بما في ذلك الفئران التي تعاني من نقص CD1d أو iNKT - deficient ، وإمكانية اكتشافها بشكل لا لبس فيه في الفئران والرجال الذين يعانون من رباعيات CD1d أو mAbs محددة لTCR شبه ثابتة. ومع ذلك، فإن خلايا iNKT نادرة وتحتاج إلى توسيعها للوصول إلى أرقام يمكن التحكم فيها لأي دراسة. لأن جيل خط الخلية iNKT الماوس الأساسي في المختبر قد ثبت صعوبة, وضعنا بروتوكول قوي لتنقية وتوسيع خلايا iNKT splenic من الفئران المعدلة وراثيا iVα14-Jα18 (iVα14Tg), التي خلايا iNKT هي 30 مرات أكثر تواترا. نظهر هنا أن خلايا iVα14Tg iNKTg الأولية يمكن تخصيبها من خلال عملية فصل مغناطيسية مناعية ، مما ينتج عنه حوالي 95-98٪ من خلايا iNKT النقية. يتم تحفيز خلايا iNKT المنقى بواسطة حبات مضادة للCD3/CD28 بالإضافة إلى IL-2 و IL-7 ، مما يؤدي إلى توسع 30 ضعفا بحلول اليوم +14 للثقافة مع نقاء 85-99٪. يمكن التلاعب بسهولة خلايا iNKT الموسعة وراثيا ، مما يوفر أداة لا تقدر بثمن لتشريح آليات التنشيط والوظيفة في المختبر ، والأهم من ذلك ، أيضا عند النقل بالتبني في الجسم الحي.

المقدمة

الخلايا التائية القاتلة الطبيعية الثابتة (خلايا iNKT) هي خلايا ليمفاوية T تشبه الفطرية تعبر عن مستقبلات خلايا T شبه ثابتة (TCR) ، تشكلت في الفئران بواسطة سلسلة Vα14-Jα18 ثابتة مقترنة بمجموعة محدودة من سلاسل Vβ المتنوعة1، وهي محددة للمستضدات الدهنية التي يقدمها جزيء MHC I-RELATED CD1d2. تخضع خلايا iNKT لبرنامج اختيار ناهض مما يؤدي إلى اكتساب النمط الظاهري المنشط / الفطري الموجود بالفعل في الغدة الصعترية ، والذي يحدث من خلال عدة مراحلنضوج 3و4، وإنتاج CD4+ و CD4- فرعية. من خلال هذا البرنامج، تكتسب خلايا iNKT مساعد T متميز (TH)الأنماط الظاهرية المؤثرة، وهي TH1 (iNKT1) و TH2 (iNKT2) و TH17 (iNKT17)، التي يمكن التعرف عليها من خلال التعبير عن عوامل النسخ T-bet و GATA3 و PLZF و RORаt، على التوالي5. تتعرف خلايا iNKT على مجموعة من الدهون الميكروبية ولكنها أيضا ذاتية التفاعل ضد الدهون الذاتية التي يتم تنظيمها في سياق الحالات المرضية لإجهاد الخلايا وتلف الأنسجة ، مثل السرطان والمناعة الذاتية2. عند التنشيط، تعدل خلايا iNKT وظائف الخلايا المناعية الفطرية والتكيفية الأخرى عن طريق الاتصال المباشر وإنتاج السيتوكين2.

وقد تم تسهيل التحقيقات في خلايا iNKT من خلال نماذج الماوس ، بما في ذلك الفئران التي تعاني من نقص CD1d أو Jα18 ، وإنتاج رباعيات CD1d المحملة بالمستضد بالإضافة إلى توليد أجسام مضادة أحادية النسيلة (mAbs) محددة ل TCR البشري شبه المتغير. ومع ذلك، فقد ثبت أن إنشاء خط الخلية iNKT الماوس الأساسي صعبة. لتوصيف أفضل لوظائف antitumor من خلايا iNKT والاستفادة منها للعلاج بالخلايا بالتبني، وضعنا بروتوكول لتنقية وتوسيع خلايا iNKT splenic من الفئران المعدلة وراثيا iVα14-Jα18 (iVα14Tg)6،والتي خلايا iNKT هي 30 مرة أكثر تواترا مما كانت عليه في الفئران نوع البرية.

يمكن استغلال خلايا iNKT الموسعة لإجراء فحوصات في المختبر ، وفي الجسم الحي عند نقلها مرة أخرى إلى الفئران. في هذا الإعداد، على سبيل المثال، لقد أظهرنا آثارها المضادة للورم قوية7. وعلاوة على ذلك، في المختبر توسيع خلايا iNKT قابلة للتعديل الوظيفي عن طريق نقل الجينات أو التحرير قبل حقنها في الجسم الحي8،مما يسمح التحليل الوظيفي الثاقبة للمسارات الجزيئية، فضلا عن تمهيد الطريق لعلاجات الخلايا المتقدمة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تم استعراض الإجراءات الموصوفة هنا والموافقة عليها من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوان واستخدامه (IACUC) (رقم 1048) في معهد سان رافائيل العلمي.

ملاحظة: يجب أن يتم تنفيذ جميع الإجراءات في ظل ظروف معقمة. يتم سرد كافة الكواشف المستخدمة في جدول المواد.

1. معالجة الطحال

  1. قتل رحيم iVα14-Jα18 الفئران عن طريق استنشاقثاني أكسيد الكربون وفقا للسياسة المؤسسية.
    ملاحظة: يجب أن يكون عمر فئران iVα14-Jα18 8 أسابيع أو أكثر. لتجنب رفض الخلايا من نقل الخلايا في الجسم الحي ، اعتبر أن الخلايا المعزولة عن الفئران الأنثوية يمكن نقلها بالتبني في كل من المتلقين الذكور والإناث ، في حين يمكن نقل الخلايا المعزولة عن الفئران الذكور فقط في المتلقين الذكور. وفيما يتحتم النظر في أي تحيز جنساني في التجارب المختبرية. يمكن تجميع المزيد من الفئران من أجل الحصول على المزيد من الخلايا.
  2. تشريح طحال الماوس وتحطيمه من خلال مصفاة خلية 70 نانومتر للحصول على تعليق خلية واحدة في 10 مل من المالحة العازلة الفوسفات (PBS) مع 2٪ مصل البقر الجنيني (FBS).
  3. جهاز طرد مركزي عند 300 × ز لمدة 5 دقائق.
  4. إزالة supernatant عن طريق عكس وعملية مع العازلة تحلل كريات الدم الحمراء. Resuspend بيليه الخلية مع 1 مل من ACK العقيمة (الأمونيوم كلوريد البوتاسيوم) Lysing العازلة، واحتضان لمدة 3 دقائق في درجة حرارة الغرفة، وكتلة مع 5 مل من برنامج تلفزيوني مع 2٪ FBS. جهاز طرد مركزي عند 300 × ز لمدة 5 دقائق.
    ملاحظة: ACK متوفر تجاريا; وهو يتألف من حل 0.15 M NH4Cl, 10 mM KHCO3, و 0.1 mM Na2EDTA (حمض الإيثيلينديامينتتراستيك) المذاب في بيديستيليد H2O, pH 7.2-7.4. إذا كانت محلية الصنع، قم بتعقيمها عن طريق الترشيح باستخدام فلتر 0.22 ميكرومتر.
  5. إزالة supernatant عن طريق الانعكاس. Resuspend بيليه الخلية في 3 مل من برنامج تلفزيوني مع 2٪ FBS وإزالة بقايا الدهون عن طريق pipetting. إذا لزم الأمر، تجمع الخلايا القادمة من فئران مختلفة.
  6. عد الخلايا والحفاظ على 50 ميكرولتر لتحليل FACS.

2. تي إثراء الخلية

ملاحظة: لخطوات التخصيب، اعمل بسرعة، حافظ على برودة الخلايا واستخدم الحلول المبردة مسبقا عند 4 درجات مئوية بين عشية وضحاها ثم احتفظ بها على الجليد

  1. جهاز طرد مركزي عند 300 × ز لمدة 5 دقائق.
  2. إعادة تشغيل جميع الخلايا في المبلغ المناسب من برنامج تلفزيوني مع 2٪ FBS (500 ميكرولتر ل107 خلايا) وحاصر Fc (2.5 ميكرولتر × 107 خلايا)؛ احتضان لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة (RT).
  3. اغسله بكمية 1-2 مل من حاجز فصل MACS لكل 10خلايا إجمالية وأجهزة طرد مركزي بمعدل 300 × ز لمدة 10 دقائق.
    ملاحظة: المخزن المؤقت MACS متوفر تجاريا. وهو يتألف من PH PBS 7.2، 0.5٪ ألبوم مصل البقر (BSA)، و 2 MM EDTA. إذا كانت محلية الصنع، قم بتعقيمها عن طريق الترشيح باستخدام فلتر 0.22 ميكرومتر.
  4. إزالة supernatant عن طريق عكس وصمة عار الخلايا مع CD19-FITC وH2 (IA ب)-FITC (استخدام 5 ميكرولتر × 107 خلايا في 100 ميكرولتر من ميغابايت). تخلط جيدا واحتضان لمدة 15 دقيقة في الظلام في 4-8 درجة مئوية.
  5. اغسل الخلايا بإضافة 1−2 مل من ميغا بايت لكل 107 خلايا وأجهزة طرد مركزي عند 300 × غرام لمدة 10 دقائق.
  6. ماصة قبالة supernatant تماما وإعادة إنفاق بيليه الخلية في 90 ميكرولتر من ميغابايت لكل 107 مجموع الخلايا. إضافة 10 ميكرولتر من مكافحة FITC MicroBeads لكل 107 مجموع الخلايا. تخلط جيدا واحتضان لمدة 15 دقيقة في الظلام في 4-8 درجة مئوية.
  7. اغسل الخلايا بإضافة 1−2 مل من ميغا بايت لكل 107 خلايا وأجهزة طرد مركزي بمعدل 300 × ز لمدة 10 دقائق.
  8. ماصة قبالة supernatant تماما وإعادة الإنفاق تصل إلى 1.25 × 108 خلية في 500 ميكرولتر من MB.
  9. ضع عمود LD في المجال المغناطيسي لمفصل MACS للشروع في الاستنفاد. لتجنب انسداد، وتطبيق مرشح ما قبل الفصل على العمود LD وشطف مع 2 مل من ميغابايت.
  10. عندما يكون خزان العمود فارغا، قم بتطبيق تعليق الخلية على الفلتر. جمع الخلايا غير التسمية التي تمر عبر العمود.
  11. اغسل 3 مرات مع 1 مل من ميغابايت، فقط عندما يكون خزان العمود فارغا. جمع مجموع النفايات السائلة، والتي سيتم إثراء في الخلايا التائية، والعد الخلايا. احتفظ دائما ب 50 ميكرولتر لتحليل FACS.

3. إثراء الخلية iNKT

  1. الطرد المركزي في 300 × ز لمدة 5 دقائق وإزالة supernatant عن طريق الانعكاس.
  2. وصمة عار الخلايا مع CD1d-tetramer-PE (الماوس PBS57-CD1d-tetramer)، وفقا ل المعايرة الأجسام المضادة في 50 ميكرولتر من ميغابايت لكل 106 خلايا. تخلط جيدا واحتضان لمدة 30 دقيقة في الظلام على الجليد.
    ملاحظة: يمكن أيضا إجراء الإجراء باستخدام رباعيات MCD1d التي تحمل علامة APC والخرز المضاد ل APC؛ ضبط الفلوروشروم المستخدمة في تلطيخ التالية وفقا لذلك. في هذا البروتوكول استخدمنا الماوس PBS-57-CD1d-tetramers المقدمة من المعاهد القومية للصحة. αgalactosylceramide (αGal-Cer) هو مستضد نموذجي معترف به من قبل خلايا iNKT. برنامج تلفزيوني-57 هو التماثلية من αGal-Cer مع تحسين الذوبان9; يوفر مرفق تترامر NIH PBS-57 ligand معقدة إلى رباعيات CD1d. ومع ذلك، فإن أجهزة التعتيم CD1d/tetramers/dextramers الأخرى متوفرة تجاريا ويمكن تحميلها بمستضد دهون مثل αGal-Cer. ونحن نتصور إمكانية تعديل البروتوكول لاستخدامه.
  3. اغسل الخلايا بإضافة 1−2 مل من ميغا بايت لكل 107 خلايا وأجهزة طرد مركزي بمعدل 300 × ز لمدة 10 دقائق.
  4. ماصة قبالة supernatant تماما وإعادة إنفاق بيليه الخلية في 80 ميكرولتر من ميغابايت لكل 107 مجموع الخلايا. إضافة 20 ميكرولتر من مكافحة PE MicroBeads لكل 107 مجموع الخلايا. تخلط جيدا واحتضان لمدة 15 دقيقة في الظلام في 4-8 درجة مئوية.
  5. اغسل الخلايا بإضافة 1−2 مل من ميغا بايت لكل 107 خلايا وأجهزة طرد مركزي عند 300 × غرام لمدة 10 دقائق.
  6. ماصة قبالة supernatant تماما وإعادة إنفاق ما يصل إلى 108 خلايا في 500 ميكرولتر من MB. وإلا إذا تجاوزت الخلايا 108،قم بضبط مستوى الصوت وفقا لذلك.
  7. وفقا لعدد الخلايا، ضع LS (حتى 108)أو MS (حتى 107)عمود في المجال المغناطيسي لفاصل MACS. شطف العمود مع MB (3 مل ل LS، 500 ميكرولتر للتصل بالتصلب المتعدد).
  8. تطبيق تعليق الخلية على العمود.
  9. جمع الخلايا غير البطاقة التي تمر من خلال. اغسل العمود 3 مرات بإضافة الكمية المناسبة من MB (3 × 3 مل لعمود LS و3 × 500 ميكرولتر لعمود MS) فقط عندما يكون خزان العمود فارغا. إجمالي النفايات السائلة هو الكسر السالب.
  10. قم بإزالة العمود من المجال المغناطيسي ووضعه على أنبوب تجميع جديد.
  11. ماصة ميغابايت على العمود (5 مل لعمود LS أو 1 مل لعمود MS)؛ دفع المكبس المقدمة في العمود وطرد الكسر الموجب (المخصب في خلايا iNKT).
  12. لزيادة استعادة الخلية iNKT، طرد المركزي الكسر السلبي في 300 x g لمدة 10 دقائق وكرر الخطوات 3.6-3.7 مع LS أو MS العمود الجديد. تجمع الكسور الموجبة وتحدد عدد الخلايا. احتفظ ب 50 ميكرولتر من الكسور الإيجابية والسلبية لتحليل FACS.
  13. تحقق من خطوات تنقية بواسطة تحليل FACS. وتشمل العينات: الطحال السابق فيفو، تي الخلية المخصب كسر، iNKT كسر إيجابي و iNKT كسر سلبي. وصمة عار الخلايا مع: CD19-FITC، IAb-FITC، CD1d-tetramer-PE، TCRа-APC وDAPI.
    ملاحظة: الاسترداد المتوقع من فأر iVα14-Jα18 واحد هو 2x106 خلايا iNKT .

4. iNKT تنشيط الخلية والتوسع

  1. تنشيط خلايا iNKT المنقى مع الماوس T المنشط مكافحة CD3/CD28 الخرز المغناطيسي في نسبة 1:1.
    1. الطرد المركزي الخلية iNKT كسر إيجابي في 300 × ز لمدة 5 دقائق.
    2. وفي الوقت نفسه نقل الحجم المناسب من الخرز المغناطيسي المضادة CD3/CD28 إلى أنبوب وإضافة حجم متساو من برنامج تلفزيوني، دوامة لمدة 5 ثوان. ضع الأنبوب على مغناطيس لمدة دقيقة واحدة وتخلص من الناتورنت.
    3. إزالة أنبوب من المغناطيس وإعادة إنفاق الخرز المغناطيسي غسلها في الحجم المناسب من RPMI كاملة (RPMI 1640 المتوسطة، 10٪ FCS الحرارة المعطل، 1 mm الصوديوم بيروفات، 1٪ الأحماض الأمينية غير الأساسية، 10 U/ml البنسلين والستريبتوميسين، 50 ميكرومتر β ميركابتوثانول) أن يكون 5 × 105 خلايا iNKT في 1 مل. استخدم هذا التعليق لإعادة إنفاق الكسر الإيجابي iNKT الطرد المركزي.
  2. لوحة 1 مل من تعليق الخلية (5 × 105 خلايا iNKT) والخرز المغناطيسي المضادة CD3/CD28 في لوحة بئر 48 مع 20 U/mL IL-2 واحتضان في 37 درجة مئوية.
  3. بعد 5 أيام، أضف 10 نانوغرام/مل IL-7.
  4. تقسيم الخلايا 1:2 عندما تصل إلى التقاء 80-90٪، إضافة دائما 20U/mL IL-2 و 10 نانوغرام / مل IL-7. في هذه الظروف، يمكن توسيع خلايا iNKT لمدة تصل إلى 15 يوما.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

البروتوكول الموصوف في هذه المخطوطة يمكن من إثراء خلايا iNKT من طحال الفئران المعدلة وراثيا iVa14-Ja18 من خلال عملية فصل مغناطيسية مناعية ملخصة في الشكل 1A. يتم اختيار إجمالي خلايا الطحال T أولا بشكل سلبي عن طريق استنفاد الخلايا B والخلايا الأحادية ، تليها الفرز المناعي الإيجابي للخلايا iNKT مع مستضد الدهون PBS-57 المحملة رباعيات CD1d ، والتي تمكن من وصمة عار على وجه التحديد فقط خلايا iNKT. هذا البروتوكول ينتج حوالي 2 × 106 من 95-98٪ خلايا iNKT نقية من طحال فأرة iVa14-Ja18 TG واحدة...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

هنا نعرض بروتوكول قابل للاستنساخ وقابلة للتنفيذ للحصول على الملايين من خلايا iNKT الجاهزة للاستخدام. بسبب ندرة هذه الخلايا في الجسم الحي، كانت هناك حاجة ماسة إلى طريقة لتوسيعها. البروتوكول الذي نقترحه لا يتطلب أجهزة معينة ولا عدد كبير من الفئران. لقد استغلينا فئران iVα14-Jα18 المعدلة وراثيا عن قصد لتقليل عدد الفئران اللازمة لهذا الإجراء.

بروتوكول آخر ناجح لتوسيع الخلية iNKT من الفئران المعدلة وراثيا iVα14-Jα18 متاح في الأدب10. يتضمن هذا البروتوكول توليد خلايا دندريتيك ط...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.

شكر وتقدير

نشكر باولو ديلابونا وجوليا كاسوراتي على الدعم العلمي والقراءة النقدية للمخطوطة. نشكر أيضا مرفق NIH Tetramer Core على رباعي الأقراص المضغوطة CD1d. تم تمويل الدراسة من قبل فوندازيون كاريبلو غرانت 2018-0366 (إلى M.F.) وزمالة الجمعية الإيطالية لأبحاث السرطان (AIRC) 2019-22604 (إلى G.D.).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
محلول الأمونيوم كلوريد والبوتاسيوم (ACK)في المنزل0.15M NH4Cl ، 10 ملي مولار KHCO3 ، 0.1 ملي مولار EDTA ، درجة الحموضة 7.2-7.4
ميكروبيدات مضادة ل FITCMiltenyi Biotec130-048-701
ميكروبيدات مضادة ل PEMiltenyi Biotec130-048-801
Brefeldin ASigmaB6542
CD19 -FITCBiolegend115506استنساخ 6D5
CD1d-tetramer -PENIH tetramer الماوس الأساسي للمنشأةPBS57-Cd1d-tetramers
CD4 -PeCy7Biolegend100528استنساخ RM4-5
Fc مانعBD Bioscience553142
مصل الأبقار الجنيني (FBS)EurocloneECS0186Lتعطيل حراريا وتصفية .22 قبل استخدام
FOXP3 مخزن مؤقت تلطيخ عامل النسخeBioscience00-5523-00
H2 (IAb) -استنساخ FITCBiolegend114406AF6-120.1
hrIL-2Chiron Corp
IonomycinSigmaI0634
LD أعمدةMiltenyi Biotec130-042-901
LS ColumnsMiltenyi Biotec130-042-401
MACS buffer (MB)في المنزل0.5٪ ألبومين مصل البقر (BSA; Sigma-Aldrich) و 2 مم EDTA
MS ColumnsMiltenyi Biotec130-042-201
الأحماض الأمينية غير الأساسيةGibco11140-035
البنسلين والستربتومايسين (Pen-Strep)Lonza15140-122
PermWashBD Bioscience51-2091KZ
PFASigmaP6148
Phosphateed محلول ملحي (PBS) مرشحاتالفصل المسبق EuroCloneECB4004L
PMASigmaP1585
(30 وميكرو ؛ م)Miltenyi Biotec130-041-407
Recombinat Mouse IL-7R & نظام D407-ML-025
RPMI 1640 مع glutamaxGibco61870-010
بيروفات الصوديومGibco11360-039
TCR & beta ؛ -APCBiolegend109212استنساخ H57-597
& alpha ؛ منشط CD3CD28 الماوس T DynabeadsGibco11452D
& beta - mercaptoethanolGibco31350010

المراجع

  1. Bendelac, A., Savage, P. B., Teyton, L. The biology of NKT cells. Annual Review of Immunology. 25, 297-336 (2007).
  2. Brennan, P. J., Brigl, M., Brenner, M. B. Invariant natural killer T cells: an innate activation scheme linked to diverse effector functions. Nature Reviews: Immunology. 13 (2), 101-117 (2013).
  3. Pellicci, D. G., et al. A natural killer T (NKT) cell developmental pathway iInvolving a thymus-dependent NK1.1(-)CD4(+) CD1d-dependent precursor stage. Journal of Experimental Medicine. 195 (7), 835-844 (2002).
  4. Benlagha, K., Kyin, T., Beavis, A., Teyton, L., Bendelac, A. A thymic precursor to the NK T cell lineage. Science. 296 (5567), 553-555 (2002).
  5. Lee, Y. J., Holzapfel, K. L., Zhu, J., Jameson, S. C., Hogquist, K. A. Steady-state production of IL-4 modulates immunity in mouse strains and is determined by lineage diversity of iNKT cells. Nature Immunology. 14 (11), 1146-1154 (2013).
  6. Griewank, K., et al. Homotypic interactions mediated by Slamf1 and Slamf6 receptors control NKT cell lineage development. Immunity. 27 (5), 751-762 (2007).
  7. Cortesi, F., et al. Bimodal CD40/Fas-Dependent Crosstalk between iNKT Cells and Tumor-Associated Macrophages Impairs Prostate Cancer Progression. Cell Reports. 22 (11), 3006-3020 (2018).
  8. Heczey, A., et al. Invariant NKT cells with chimeric antigen receptor provide a novel platform for safe and effective cancer immunotherapy. Blood. 124 (18), 2824-2833 (2014).
  9. Liu, Y., et al. A modified alpha-galactosyl ceramide for staining and stimulating natural killer T cells. Journal of Immunological Methods. 312 (1-2), 34-39 (2006).
  10. Chiba, A., et al. Rapid and reliable generation of invariant natural killer T-cell lines in vitro. Immunology. 128 (3), 324-333 (2009).
  11. Crowe, N. Y., et al. Differential antitumor immunity mediated by NKT cell subsets in vivo. Journal of Experimental Medicine. 202 (9), 1279-1288 (2005).
  12. de Lalla, C., et al. Production of profibrotic cytokines by invariant NKT cells characterizes cirrhosis progression in chronic viral hepatitis. Journal of Immunology. 173 (2), 1417-1425 (2004).
  13. Tian, G., et al. CD62L+ NKT cells have prolonged persistence and antitumor activity in vivo. Journal of Clinical Investigation. 126 (6), 2341-2355 (2016).
  14. Gaya, M., et al. Initiation of Antiviral B Cell Immunity Relies on Innate Signals from Spatially Positioned NKT Cells. Cell. 172 (3), 517-533 (2018).
  15. Rotolo, A., et al. Enhanced Anti-lymphoma Activity of CAR19-iNKT Cells Underpinned by Dual CD19 and CD1d Targeting. Cancer Cell. 34 (4), 596-610 (2018).
  16. Schneidawind, D., et al. Third-party CD4+ invariant natural killer T cells protect from murine GVHD lethality. Blood. 125 (22), 3491-3500 (2015).
  17. Schneidawind, D., et al. CD4+ invariant natural killer T cells protect from murine GVHD lethality through expansion of donor CD4+CD25+FoxP3+ regulatory T cells. Blood. 124 (22), 3320-3328 (2014).
  18. Schneidawind, D., Pierini, A., Negrin, R. S. Regulatory T cells and natural killer T cells for modulation of GVHD following allogeneic hematopoietic cell transplantation. Blood. 122 (18), 3116-3121 (2013).
  19. Leveson-Gower, D. B., et al. Low doses of natural killer T cells provide protection from acute graft-versus-host disease via an IL-4-dependent mechanism. Blood. 117 (11), 3220-3229 (2011).
  20. Coman, T., et al. Human CD4- invariant NKT lymphocytes regulate graft versus host disease. Oncoimmunology. 7 (11), 1470735(2018).
  21. Xu, X., et al. NKT Cells Coexpressing a GD2-Specific Chimeric Antigen Receptor and IL15 Show Enhanced In vivo Persistence and Antitumor Activity against Neuroblastoma. Clinical Cancer Research. 25 (23), 7126-7138 (2019).
  22. Heczey, A., et al. Anti-GD2 CAR-NKT cells in patients with relapsed or refractory neuroblastoma: an interim analysis. Nature Medicine. 26 (11), 1686-1690 (2020).
  23. Exley, M. A., et al. Adoptive Transfer of Invariant NKT Cells as Immunotherapy for Advanced Melanoma: A Phase I Clinical Trial. Clinical Cancer Research. 23 (14), 3510-3519 (2017).
  24. Wolf, B. J., Choi, J. E., Exley, M. A. Novel Approaches to Exploiting Invariant NKT Cells in Cancer Immunotherapy. Frontiers in Immunology. 9, 384(2018).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

iNKT iNKT CD1d Anti CD3 CD28 IL 2 IL 7
تنقية وتوسيع الخلايا T القاتل الطبيعي الثابت الماوس في المختبر وفي دراسات في الجسم الحي
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.