مقالة منهجية

تلطيخ immunofluorescent لتصور البروتينات المرتبطة Heterochromatin في الغدد اللعابية Drosophila

DOI:

10.3791/62408

⸱

أغسطس 21, 2021

 ,  , 
1Instituto de Biotecnología, Departamento de Genética del Desarrollo y Fisiología Molecular, Universidad Nacional Autónoma de México

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يهدف هذا البروتوكول إلى تصور مجاميع الهتيروماتين في خلايا البوليتين Drosophila.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يمكن أن يكون تصور مجاميع الهتيروماتين عن طريق التصبغ المناعي أمرا صعبا. يتم الحفاظ على العديد من مكونات الثدييات من الكروماتين في Drosophila melanogaster. لذلك، وهو نموذج ممتاز لدراسة تشكيل heterochromatin والصيانة. الخلايا المتعددة، مثل تلك الموجودة في الغدد اللعابية من يرقات نجمة النستار الثالثة D. melanogaster، توفر أداة ممتازة لمراقبة الكروماتين تضخيم ما يقرب من ألف مرة، وسمحت للباحثين لدراسة التغيرات في توزيع التركروماتين في النواة. على الرغم من أن مراقبة مكونات هيتيركروماتين يمكن أن تتم مباشرة في مستحضرات كروموسوم البوليتين ، يمكن تغيير توطين بعض البروتينات من خلال شدة العلاج. لذلك ، فإن التصور المباشر للتركروماتين في الخلايا يكمل هذا النوع من الدراسة. في هذا البروتوكول، نقوم بوصف تقنيات التصبغ المناعي المستخدمة لهذا النسيج، واستخدام الأجسام المضادة الفلورية الثانوية، والمجهر البؤري لمراقبة هذه المجاميع الهتيروماتين بمزيد من الدقة والتفاصيل.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

منذ الدراسات المبكرة لإميل هيتز1، يعتبر هيتيركروماتين منظما مهما للعمليات الخلوية مثل التعبير الجيني ، والفصل الميوتي والميتوتيك للكروموسومات ، والحفاظ على استقرار الجينوم2و3و4.

وينقسم الهتيروماتين أساسا إلى نوعين: هيتيركروماتين التأسيسية التي تحدد بشكل مميز تسلسل المتكررة، والعناصر القابلة للانتقال التي توجد في مواقع كروموسوم محددة مثل التيلوميرات والقنطورات. هذا النوع من heterochromatin هو تعريف أساسا اللاجينية من قبل علامات الهستون محددة مثل دي أو ثلاثي ميثيل ليسين 9 من الهستون H3 (H3K9me3) وربط بروتين هيتيروكروماتين 1a (HP1a)5,6. من ناحية أخرى، لغات heterochromatin الكلية من خلال ذراعي الكروموسوم ويتكون أساسا من الجينات صامتة تنمويا7،8. وقد كشف عن التئاس المناعة من كتل heterochromatin في خلايا ميتافيزي، أو مراقبة المجاميع heterochromatin في الخلايا بين المراحل، الكثير من الضوء في فهم تشكيل ووظيفة المناطق غير لوني9.

وقد سمح استخدام Drosophila كنظام نموذجي لتطوير الأدوات الأساسية لدراسة الهتيروماتين دون استخدام المجهر الإلكتروني10. منذ وصف تأثير الموقف المتنوع واكتشاف البروتينات المرتبطة بالهيتوكروماتين ، مثل HP1a ، وتعديلات ما بعد الهستون بعد الترجمية ، طورت العديد من المجموعات العديد من التقنيات الكيميائية المناعية التي تسمح بتصور هذه المناطق غير اللونية10،11.

وتستند هذه التقنيات على استخدام أجسام مضادة محددة تتعرف على البروتينات المرتبطة بالهتيروماتين أو علامات الهستون. لكل نوع الخلية والأجسام المضادة، يجب تحديد شروط التثبيت والتهيئة تجريبيا. أيضا، قد تختلف الظروف إذا تم استخدام عمليات ميكانيكية إضافية مثل تقنيات السحق. في هذا البروتوكول، ونحن نصف استخدام الغدد اللعابية Drosophila لدراسة بؤر غير لونية. الغدد اللعابية لديها خلايا متعددة الأضلاع تحتوي على أكثر من 1000 نسخة من الجينوم ، مما يوفر رؤية مكبرة لمعظم ميزات الكروماتين ، باستثناء الحمض النووي للأقمار الصناعية وبعض المناطق غير اللونية التي تخضع للتكفير. ومع ذلك ، يتم تصور مناطق heterochromatin بسهولة في مستحضرات كروموسوم البوليتين ، ولكن تقنيات السحق قد تعطل في بعض الأحيان المجمعات المميزة المرتبطة بالكروماتين أو بنية الكروماتين. لذلك ، يمكن أن يتجاوز تحديد موقع المناعة للبروتينات في أنسجة الغدة اللعابية الكاملة هذه الآثار غير المرغوب فيها. لقد استخدمنا هذا البروتوكول للكشف عن العديد من البروتينات المقيدة بالكروماتين ، وأثبتنا أن هذا البروتوكول جنبا إلى جنب مع مخزونات Drosophila المتحولة يمكن استخدامه لدراسة اضطراب الهتيروماتين12.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. زراعة يرقات النجوم الثالثة

  1. إعداد 1 لتر من وسائل الإعلام القياسية بإضافة 100 غرام من الخميرة، 100 غرام من السكر قصب كامل غير المكرر، 16 غرام من أجار، 10 مل من حمض البروبيونيك و 14 غرام من الجيلاتين. حل جميع المكونات باستثناء الخميرة في 800 مل من ماء الصنبور ومن ثم حل الخميرة. الأوتوكلاف على الفور لمدة 30 دقيقة.
    1. بعد ذلك، دع الوسائط تبرد إلى 60 درجة مئوية وأضف حمض البروبيونيك إلى التركيز النهائي بنسبة 0.01٪. دع الزجاجة تقف حتى يتم تشكيل الجيلاتين.
  2. لتحسين استزراع يرقات النجوم 3o ، قم أولا بجمع البالغين الذين تتراوح أعمارهم بين 5 و 10 أيام ووضع 50 (25 ذكرا و 25 أنثى) في زجاجة عنق واسعة من الوسائط القياسية.
  3. ضع الزجاجة مع الذباب في حاضنة درجة حرارة خاضعة للرقابة عند 25 درجة مئوية حتى يبلغ عدد البيض الموضوع 50 (حوالي 12 ساعة للسلالة البرية).
  4. بعد انتهاء فترة الحضانة، قم بإزالة البالغين ونقلهم إلى زجاجة جديدة لتكرار الإجراء. دع الأجنة تنمو عند 18 درجة مئوية لمدة 72 ساعة
    ملاحظة: لمزيد من المعلومات حول ظروف صيانة المخزون Drosophila، راجع تينيسين وThymmel13.

2. جمع اليرقات

  1. لجمع اليرقات اختيار اليرقات الهائمة التي لم يكن لديك القرصنة everted. بعد انعكاس القرصنة ، تدخل اليرقة المرحلة الإعدادية ، مع الاحتفاظ بكروموسومات البوليتين الممتازة المناسبة للتحليل. فقط بعد 12 ساعة تبدأ خلايا الغدة اللعابية في الاستعداد لموت الخلاياالمبرمجة 14،15.
  2. خذ يرقات نجمة 15 درجة 3 ووضعها في كوب ساعة لغسلها. ثم نقلها إلى محلول ملحي الجليد الباردة أو برنامج تلفزيوني (1x PBS: 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4, ضبط درجة الحموضة إلى 7.4).
  3. تشريح 15 إلى 30 زوجا من الغدد اللعابية (أو أكبر عدد ممكن في 30 دقيقة) في برنامج تلفزيوني الباردة مع مثبطات البروتيز تحت المجهر مجسمة. نقل الغدد اللعابية إلى أنبوب 1.5 مل مع برنامج تلفزيوني الجليد الباردة.
  4. غسل مرة واحدة مع 1 مل من برنامج تلفزيوني بالإضافة إلى مثبطات بروتياز. انتظر حتى يصل النسيج إلى أسفل الأنبوب.
  5. بعد الغسيل، قم بإزالة برنامج تلفزيوني مع ماصة 1000 ميكرولتر. الحرص على عدم لمس الأنسجة.
    1. بدلا من ذلك، تشريح الغدد اللعابية في 5 مل من برنامج تلفزيوني للقضاء على الحاجة إلى هذه الخطوة الغسيل والمضي قدما إلى الخطوة 3 عن طريق نقل الغدد اللعابية إلى 0.5 مل من العازلة إصلاح Ruvkun المذكورة أدناه.

3. تثبيت أنسجة الغدة اللعابية

  1. بعد إزالة برنامج تلفزيوني من الخطوة الأخيرة، إضافة مباشرة 0.5 مل من 1x Ruvkun تحديد العازلة، مع 50٪ الميثانول (إضافة 0.5 مل من الميثانول) و 2٪ الفورمالديهايد.
    ملاحظة: 2x روفكون الحل هو 160 MM KCl، 40 mM NaCl، 20 M EGTA، 30 mM PIPES في pH 7.4.
  2. حضانة لمدة 2 ساعة في 4 درجة مئوية مع تناوب معتدل.

4. غسل أنسجة الغدة اللعابية

  1. نفذ غسل دوران واحد لمدة 5 دقائق مع 1 مل من مخزن Tris/Triton المؤقت (100 mM Tris pH 7.4 و 1٪ Triton X-100 و 1 mM EDTA).
    ملاحظة: انتظر حتى يصل النسيج إلى أسفل الأنبوب.

5. البيرميلات

  1. احتضان الغدد اللعابية في 1 مل من تريس / تريتون X-100 (نفس أعلاه). بالنسبة لبعض البروتينات قد يكون من الضروري إضافة 1٪ β ميركابتوثانول.
  2. حضانة لمدة 2 ساعة في 37 درجة مئوية مع اهتزاز خفيف (300 دورة في الدقيقة).

6. خطوة الحفظ (اختياري)

ملاحظة: إذا لم يتم الشروع فورا في الحضانة مع الأجسام المضادة، حافظ على النسيج كما يلي.

  1. اغسل مع 1 مل من المخزن المؤقت BO3 (0.01 M H3BO3 درجة الحموضة 9.2 + 0.01 M NaOH) ثم احتضن في BO3/10 mM DTT عند 37 درجة مئوية مع اهتزاز خفيف (300 دورة في الدقيقة) لمدة 15 دقيقة.
  2. في نهاية فترة الحضانة، قم بإجراء غسل مع 1 مل من المخزن المؤقت BO3 وحده.
    ملاحظة: انتظر حتى يصل النسيج إلى أسفل الأنبوب.
  3. إضافة 1 مل من برنامج تلفزيوني. الحفاظ على الأنسجة في هذا الحل في 4 درجة مئوية لمدة تصل إلى 72 ساعة ومن ثم المضي قدما في الخطوة التالية. هذه الخطوة مفيدة بشكل خاص عند العمل مع سلالات متحولة مختلفة قد تمثل دورة حياة متأخرة ، لذلك يمكن إجراء التنميتين المناعي في نفس الوقت مع عناصر التحكم.

7. حجب الأنسجة

  1. احتضان الغدد اللعابية في 1 مل من العازلة B (برنامج تلفزيوني + 0.1٪ BSA + 0.5٪ تريتون X-100 + 1 mM EDTA) لمدة 2 ساعة في درجة حرارة الغرفة مع التناوب.

8. التثبيط المناعي

  1. إزالة كافة المخزن المؤقت B وإضافة المخزن المؤقت A (PBS + 0.1٪ BSA) بالإضافة إلى الأجسام المضادة ذات الفائدة.
    ملاحظة: نستخدم HP1a C1A9c (الأجسام المضادة المركزة) من Hybridoma Bank حتى الساعة 1:3000. عند استخدام C1A9s (supernatant) حاولنا من 1:100 إلى 1:500 التخفيف وأي تخفيف بين هذه الرتبة يعمل بشكل جيد) بين عشية وضحاها في 4 OC مع التناوب. عند هذه النقطة من المهم أن الهز لا يثير فقاعات التي قد تضر الأجسام المضادة.

9. الغسيل المناعي

  1. قم بإجراء عمليات غسل لمدة 3 × 15 دقيقة مع العازلة B تحت التحريك في درجة حرارة الغرفة باستخدام 1 مل في كل مرة.
  2. نقل الغدد إلى العازلة B جنبا إلى جنب مع الأجسام المضادة الثانوية إلى جانب الفلوروفور لمدة 2 ساعة تحت دوران في 4 oC (تم استخدام الأجسام المضادة الثانوية اليكسا فلور 568 Invitrogen 1:3000).
    1. قم بتغطية الأنبوب بورق الألومنيوم لحماية الجسم المضاد الثانوي من الضوء.
  3. نفذ يغسل 2 × 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة أثناء الدوران مع 1 مل من العازلة B.
  4. احتضان مع علامة الحمض النووي مثل Sytox (اتخاذ 2 ميكرولتر من المخزون 5 mM وتذوب في 1 مل من العازلة B) أو Hoechst (اتخاذ 1 ميكرولتر من 10 ملغ / مل المخزون وتذوب في 1 مل من العازلة B) لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة مع التناوب.
  5. نفذ غسيلا واحدا مع Buffer B ومرة واحدة مع PBS ، يستمر كل غسل لمدة 10 دقائق أثناء الدوران في درجة حرارة الغرفة.
    ملاحظة: تذكر لحمايته من الضوء.

10. التصوير

  1. جبل الغدد اللعابية على الشريحة، مما يجعل بركة مع غطاء.
  2. وضع الغدد اللعابية في منتصف حمام السباحة وتغطي مع AF1 citifluor لتجنب تشكيل فقاعات تمديد السائل لزج في جميع أنحاء المكان. ثم ختم جميع الجوانب مع طلاء الأظافر واضحة.
  3. مراقبة تحت المجهر مضان أو confocal. إذا كانت العينة لن يتم ملاحظتها في نفس اليوم، فخزنها بعيدا عن الضوء عند درجة حرارة 4 درجات مئوية.
  4. استخدم GraphPad Prism 6 لإنشاء جميع الرسوم البيانية والتحليلات الإحصائية.
  5. تحليل البيانات من توزيع HP1a في الغدد اللعابية باستخدام اختبار كروسكال واليس. تم تعيين الأهمية الإحصائية في (ص < 0.05*، < 0.01 **، < 0.001***، < 0.0001****).)

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تظهر النتائج التمثيلية ل HP1a المناعية في الغدد اللعابية Drosophila في الشكل 1. والنتيجة الإيجابية هي ملاحظة نقطة محورية واحدة(الشكل 1a)(تجميع أو مكثفات غير لونية). والنتيجة السلبية هي عدم وجود إشارة أو إشارة مشتتة. في بعض الأحيان يمكن ملاحظة إشارة مزدوجة ، أي بنقطة مزدوجة(الشكل 1c)، ولكنها تحدث عادة بكميات أصغر.

يمكن تمثيل تحليل البيانات كرسم بياني شريطي، مقارنة توزيع HP1a ضمن خلفيات متحولة مختل...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يمكن للوظيفة الخلوية للكائنات الحية النواة تحديد الهيكل ثلاثي الأبعاد داخل النواة ، والذي تدعمه التفاعلات بين البروتينات المختلفة مع الكروماتين والجزيئات المختلفة بما في ذلك الحمض النووي الريبي. في السنوات الثلاث الماضية، والمكثفات البيولوجية التي لها أهمية، بما في ذلك هيتيركروماتين، وقد اتخذت دورا أساسيا في تحديد فصل المرحلة تعزيز التنظيم المكاني النووي المتميز من الكروماتين النشطة والقمعية 16،17،18.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويعلن أصحاب البلاغ أنه ليس لديهم مصالح متنافسة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نشكر ماركو أنطونيو روزاليس فيغا وهابيل سيغورا على التقاط بعض الصور الكونفوكوكال، وكارمن مونيوز لإعداد وسائل الإعلام، والدكتور أرتورو بيمنتل، .C أندريس ساراليغوي، والدكتور كريس وود من LMNA للحصول على المشورة بشأن استخدام المجاهر.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
1.5 مل أنابيب الطرد المركزي الدقيقةAxygen MCT-150-Cالعلامة التجارية 11351904ليست حرجة
16٪ فورمالديهايدThermo Scientific28908
AF1 CitifluorTed pella1947025 مل
BSA ، علم الأحياء الجزيئي درجةRoche10735078001العلامة التجارية ليست حرجة
كاملة ، مثبطات البروتياز خالية من EDTA
مثبطات		Merck5892953001
CoverslipCorningCLS285022-200EA22x22 ، العلامة التجارية ليست حرجة
DTTSigmad9779العلامة التجارية ليست حرجة
EDTASigmaE5134العلامة التجارية ليست حرجة
EGTAليست حرجة
الشريحة الزجاجيةالذهب3011العلامة التجارية ليست حرجة
H3BO3Baker0084-01العلامة التجارية غير حرجة
H3K9me3Abcam8889
HP1aHybridoma BankC1A9نموذج المنتج   مركز 0.1 مل
KClBaker3040-01العلامة التجارية غير حرجة
الميثانولبيكر9070-03العلامة التجارية غير حرجة
كلوريد الصوديومسيجما71376العلامة التجارية ليست حرجة
هيدروكسيد الصوديومالعلامة التجارية ليست حرجة
الأنابيبالعلامة التجارية غير حرجة
الدوارالحراري العلمي13-687-12Q  Labquake Tube Shaker
Thermo Mixer CEppendorf13527550SmartBlock 1.5 مل
TrisMiliporeالعلامة التجارية 648311ليست حرجة
Triton X-100SigmaT8787100 مل ، العلامة التجارية ليست حرجة
بيتا ؛ -mercaptoethanolBio-Rad161071025 مل ، العلامة التجارية ليست حرجة
العلامة التجارية ختم

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Berger, F. Emil Heitz, a true epigenetics pioneer. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 20 (10), 572(2019).
  2. Irick, H. A new function for heterochromatin. Chromosoma. 103 (1), 1-3 (1994).
  3. Kasinathan, B., et al. Innovation of heterochromatin functions drives rapid evolution of essential ZAD-ZNF genes in Drosophila. Elife. , 1-31 (2020).
  4. Lifschytz, E., Hareven, D. Heterochromatin markers: Arrangement of obligatory heterochromatin, histone genes and multisite gene families in the interphase nucleus of D. melanogaster. Chromosoma. 86 (4), 443-455 (1982).
  5. Eissenberg, J. C., Elgin, S. C. R. HP1a: A structural chromosomal protein regulating transcription. Trends in Genetics. 30 (3), 103-110 (2014).
  6. Lee, Y. C. G., et al. Pericentromeric heterochromatin is hierarchically organized and spatially contacts H3K9me2 islands in euchromatin. PLoS Genetics. 16 (3), 1-27 (2020).
  7. Koryakov, D. E., et al. The SUUR protein is involved in binding of SU (VAR)3-9 and methylation of H3K9 and H3K27 in chromosomes of Drosophila melanogaster. Chromosome Research. 19 (2), 235-249 (2011).
  8. Cao, R., et al. Role of Histone H3 Lysine 27 Methylation in Polycomb-Group Silencing. Science. 298 (5595), 1039(2002).
  9. Hines, K. A., et al. Domains of heterochromatin protein 1 required for Drosophila melanogaster heterochromatin spreading. Genetics. 182 (4), 967-977 (2009).
  10. Elgin, S. C. R., Reuter, G. Position-effect variegation, heterochromatin formation, and gene silencing in Drosophila. Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 5 (8), 1-26 (2013).
  11. Eissenberg, J. C., Elgin, S. C. R. HP1a: A structural chromosomal protein regulating transcription. Trends in Genetics. 30 (3), 103-110 (2014).
  12. Meyer-Nava, S., Torres, A., Zurita, M., Valadez-graham, V. Molecular effects of dADD1 misexpression in chromatin organization and transcription. BMC Molecular and Cell Biology. 2, 1-17 (2020).
  13. Tennessen, J. M., Thummel, C. S. Coordinating growth and maturation - Insights from drosophila. Current Biology. 21 (18), 750-757 (2011).
  14. Cai, W., Jin, Y., Girton, J., Johansen, J., Johansen, K. M. Preparation of drosophila polytene chromosome squashes for antibody labeling. Journal of Visualized Experiments. (36), 1-4 (2010).
  15. Bainbridge, S. P., Bownes, M. Staging the metamorphosis of Drosophila melanogaster. Journal of Embryology and Experimental Morphology. 66 (1967), 57-80 (1981).
  16. Larson, A. G., et al. Liquid droplet formation by HP1α suggests a role for phase separation in heterochromatin. Nature. 547 (7662), 236-240 (2017).
  17. Larson, A. G., Narlikar, G. J. The Role of Phase Separation in Heterochromatin Formation, Function, and Regulation. Biochemistry. 57 (17), 2540-2548 (2018).
  18. Keenen, M. M., Larson, A. G., Narlikar, G. J. Visualization and Quantitation of Phase-Separated Droplet Formation by Human HP1α. Methods in Enzymology. , (2018).
  19. Lu, B. Y., Emtage, P. C., Duyf, B. J., Hilliker, aJ., Eissenberg, J. C. Heterochromatin protein 1 is required for the normal expression of two heterochromatin genes in Drosophila. Genetics. 155 (2), 699-708 (2000).
  20. Marsano, R. M., Giordano, E., Messina, G., Dimitri, P. A New Portrait of Constitutive Heterochromatin: Lessons from Drosophila melanogaster. Trends in Genetics. , (2019).
  21. Strom, A. R., et al. Phase separation drives heterochromatin domain formation. Nature. 547 (7662), 241-245 (2017).
  22. Sanulli, S., et al. HP1 reshapes nucleosome core to promote phase separation of heterochromatin. Nature. 575 (7782), 390-394 (2019).
  23. Dialynas, G., Delabaere, L., Chiolo, I. Arp2/3 and Unc45 maintain heterochromatin stability in Drosophila polytene chromosomes. Experimental Biology and Medicine. 244 (15), 1362-1371 (2019).
  24. Kolesnikova, T. D., et al. Induced decondensation of heterochromatin in drosophila melanogaster polytene chromosomes under condition of ectopic expression of the supressor of underreplication gene. Fly. 5 (3), Austin. 181-190 (2011).
  25. Bettinger, J. C., Lee, K., Rougvie, A. E. Stage-specific accumulation of the terminal differentiation factor LIN-29 during Caenorhabditis elegans development. Development. 122 (8), 2517-2527 (1996).
  26. Messina, G., et al. Yeti, an essential Drosophila melanogaster gene, encodes a protein required for chromatin organization. Journal of Cell Science. 127 (11), 2577-2588 (2014).
  27. Aguilar-Fuentes, J., et al. p8/TTDA overexpression enhances UV-irradiation resistance and suppresses TFIIH mutations in a Drosophila trichothiodystrophy model. PLOS Genetics. 4 (11), 1-9 (2008).
  28. Reynaud, E., Lomeli, H., Vazquez, M., Zurita, M. The Drosophila melanogaster Homologue of the Xeroderma Pigmentosum D Gene Product Is Located in Euchromatic Regions and Has a Dynamic Response to UV Light-induced Lesions in Polytene Chromosomes. Molecular Biology of the Cell. 10 (4), 1191-1203 (1999).
  29. Farkaš, R., Mechler, B. M. The timing of Drosophila salivary gland apoptosis displays an I (2)gl-dose response. Cell Death & Differentiation. 7 (1), 89-101 (2000).
  30. Zhang, P., Spradling, A. C. The Drosophila salivary gland chromocenter contains highly polytenized subdomains of mitotic heterochromatin. Genetics. 139 (2), 659-670 (1995).
  31. Stormo, B. M., Fox, D. T. Polyteny: still a giant player in chromosome research. Chromosome Research. 25 (3-4), 201-214 (2017).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

HP1

مقالات ذات صلة