القياس الكمي للكثافة الخلوية والخصائص المضادة للجينات باستخدام الارتفاع المغناطيسي

Summary

تصف هذه الورقة طريقة قائمة على الارتفاع المغناطيسي يمكنها الكشف على وجه التحديد عن وجود المستضدات ، إما قابلة للذوبان أو مقيدة بالغشاء ، عن طريق تحديد التغيرات في ارتفاع ارتفاع حبات الالتقاط ذات الكثافات الثابتة.

Abstract

تم تطوير الطريقة الموصوفة على أساس مبادئ الارتفاع المغناطيسي ، الذي يفصل بين الخلايا والجسيمات على أساس كثافتها وخصائصها المغناطيسية. الكثافة هي نوع الخلية تحديد الممتلكات، ترتبط مباشرة إلى معدل الأيض، والتمايز، وحالة التنشيط. يسمح الارتفاع المغناطيسي بنهج خطوة واحدة لفصل خلايا الدم المتداولة بشكل ناجح، وصورها وتوصيفها، والكشف عن فقر الدم، وأمراض الخلايا المنجلية، وتعميم الخلايا السرطانية على أساس الكثافة والخصائص المغناطيسية. هذا النهج قابل أيضا للكشف عن المستضدات القابلة للذوبان الموجودة في محلول باستخدام مجموعات من الخرز منخفض الكثافة وعالي الكثافة المغلفة بالأجسام المضادة للالتقاط والكشف ، على التوالي. إذا كان المستضد موجودا في الحل ، فإنه سيتم جسر مجموعتين من الخرز ، وتوليد مجمع حبة حبة جديدة ، والتي سوف ترتفع بين صفوف الخرز المغلفة بالأجسام المضادة. زيادة تركيز المستضد المستهدف في المحلول سوف تولد عددا أكبر من مجمعات حبة الخرز بالمقارنة مع تركيزات أقل من المستضد، مما يسمح بإجراء قياسات كمية للمضاد المستهدف. الارتفاع المغناطيسي مفيد لطرق أخرى بسبب انخفاض وقت إعداد العينة وعدم الاعتماد على طرق القراءة الكلاسيكية. يتم التقاط الصورة التي تم إنشاؤها بسهولة وتحليلها باستخدام المجهر القياسي أو الجهاز المحمول، مثل الهاتف الذكي أو الكمبيوتر اللوحي.

Introduction

الارتفاع المغناطيسي هو تقنية تم تطويرها لفصل وتحليل وتحديد أنواع الخلايا^1و2و³والبروتينات⁴و⁵ والمواد الأفيونية⁶ استنادا فقط إلى كثافتها المحددة وخصائصها المغناطيسية. كثافة الخلية هي فريدة من نوعها، خاصية جوهرية من كل نوع الخلية ذات الصلة مباشرة لمعدل الأيض والتمايز حالة^{7،8،9،10،11،12،13،14}. إن تحديد التغيرات الدقيقة والعابرة في كثافة الخلايا خلال ظروف الحالة الثابتة، وخلال مجموعة متنوعة من عمليات الخلايا، يمكن أن يوفر للمرء نظرة ثاقبة لا مثيل لها في فسيولوجيا الخلايا والفيزيولوجيا المرضية. وترتبط التغيرات في كثافة الخلية مع تمايز الخلية^15،16، تطور دورة الخلية^{9،17،18،19}، موت الخلايا المبرمج^{20،21،22،23}، والتحول الخبيث^24،25،26 . لذلك ، يمكن استخدام القياس الكمي للتغيرات المحددة في كثافة الخلايا ، للتمييز بين الخلايا من أنواع مختلفة ، وكذلك التمييز بين نفس النوع من الخلايا التي تخضع لعمليات تنشيط مختلفة. وهذا يمكن التجارب التي تستهدف خلية معينة من السكان الفرعيين، حيث التغيرات الديناميكية في الكثافة بمثابة مؤشر على تغيير استقلاب الخلية²⁷. كما ثبت أن الخلية قد تغير كثافتها استجابة لبيئة متغيرة⁷، فمن الضروري قياس حركية الخلية فيما يتعلق بكثافتها لفهمها بشكل كامل ، والتي قد لا توفرها الطرق الحالية¹². الارتفاع المغناطيسي من ناحية أخرى، يسمح لتقييم ديناميكي للخلايا وخصائصها²⁸.

الخلايا هي ثنائية المغناطيسية بمعنى أنها لا تملك لحظة ثنائي القطب المغناطيسي الدائم. ومع ذلك ، عندما تتعرض لحقل مغناطيسي خارجي ، يتم إنشاء لحظة ثنائي القطب المغناطيسي ضعيفة في الخلايا ، في الاتجاه المعاكس للمجال التطبيقي. وهكذا، إذا تم تعليق الخلايا في محلول مغناطيسي وعرضها لحقل مغناطيسي عمودي قوي، فإنها سوف ترتفع بعيدا عن المصدر المغناطيسي وتتوقف إلى ارتفاع، والذي يعتمد في المقام الأول على كثافتها الفردية. الارتفاع ثنائي المغناطيسي للجسم المحصور في الحد الأدنى من المجال المغناطيسي غير المتجانس ممكن عندما يتم استيفاء المعيارين التاليين: 1) يجب أن تكون الحساسية المغناطيسية للجسيمات أصغر من المتوسط المحيط ، و 2) يجب أن تكون القوة المغناطيسية قوية بما يكفي لموازنة قوة الطفو للجسيمات. ويمكن الوفاء بكلا المعيارين عن طريق تعليق RBCs في العازلة المغناطيسية وخلق تدرجات المجال المغناطيسي قوية مع مغناطيس دائم صغيرة وغير مكلفة ومتاحة تجاريا¹. يتم تحديد موضع توازن جسيم محصور مغناطيسيا على محور على طول اتجاه الجاذبية من خلال كثافته (بالنسبة لكثافة العازلة) ، وقابليته المغناطيسية (بالنسبة للحساسية المغناطيسية للحاجز) ، وتوقيع المجال المغناطيسي التطبيقي. وبما أن الكثافة والخصائص المغناطيسية للمحلول ثابتة في جميع أنحاء النظام ، فإن خصائص الكثافة الجوهرية للخلايا ستكون العامل الرئيسي الذي يحدد ارتفاع ارتفاع الخلايا ، مع خلايا أكثر كثافة ترتفع أقل مقارنة بالخلايا الأقل كثافة. يستخدم هذا النهج مجموعة من حبات مرجعية ذات كثافة (1.05 و 1.2 غرام/مل) تسمح لنا باستخدام تحليل دقيق وقياسي لقياس الكثافة. تغيير تركيز المحلول المغناطيسي يسمح لأحد لعزل مجموعات مختلفة من الخلايا، مثل RBCs من WBCs، وكثافة الخلايا المتداولة هي خلية محددة، وإزالة الحاجة إلى بروتوكولات العزل أو التلاعب الخلية الأخرى.

تعتمد غالبية طرق الكشف المستخدمة في أبحاث البيولوجيا على استقراء أحداث ملزمة محددة في سهولة تحديد الإشارات الخطية. وغالبا ما تكون أساليب القراءة هذه معقدة وتنطوي على معدات متخصصة وموظفين علميين متفرغين. وصف نهج يهدف إلى الكشف عن المستضدات الموجودة إما على غشاء البلازما للخلايا أو الحويصلات خارج الخلية أو القابلة للذوبان في البلازما ، باستخدام حبة واحدة أو اثنتين من الأجسام المضادة المغلفة . يجب أن تكون الخرز ذات كثافات مختلفة عن بعضها البعض ومن تلك الخاصة بالأهداف التي تم استجوابها. يتم ترجمة وجود مستضد الهدف في أي سائل حيوي معين إلى تغيير محدد وقابل للقياس في ارتفاع الارتفاع لخلية إيجابية مستضد مرتبطة بالخرزة الكشفية. في حالة المستضدات القابلة للذوبان أو الحويصلات خارج الخلية ، فهي ملزمة بالتقاط والخرز والكشف عنه ، مما يشكل مجمع حبة حبة بدلا من مجمع خلايا الخرز. يعتمد التغيير في ارتفاع الارتفاع على الكثافة الجديدة لمجمعات خلية الخرز أو حبة الخرز. بالإضافة إلى التغير في ارتفاع الارتفاع للمجمعات ، مما يشير إلى وجود مستضد في السائل الحيوي ، يعتمد عدد المجمعات أيضا على مقدار الهدف ، مما يجعل الارتفاع المغناطيسي أيضا نهجا كميا للكشف عن المستضد²⁴.

Protocol

تمت الموافقة على البروتوكول التجريبي المستخدم في هذه الدراسة من قبل مجلس المراجعة المؤسسية لمركز بيت إسرائيل الطبي (IRB).

1. إعداد الصك

ملاحظة: يتطلب التصوير رفع الخلايا اثنين من المغناطيس النيودميوم الأرض النادرة ممغنطة على المحور ض ليتم وضعها مع القطب نفسه التي تواجه بعضها البعض لتوليد حقل مغناطيسي. يمكن تخصيص المسافة بين المغناطيس اعتمادا على كثافة المجال المغناطيسي وكثافة الأهداف. في هذه الحالة يتم فصل المغناطيس بمساحة 1mm كافية لإدراج 50 ملم طويلة 1x1 مم مربع أنبوب زجاجي شعري. تم طباعة الجهاز ثلاثي الأبعاد باستخدام تصميم AutoCAD ، وهو متاح عند الطلب.

1. وضع المجهر على جانبها، أفقي تماما.
   ملاحظة: المجهر الموضوع في وضع مستقيم قياسي غير مناسب مباشرة لتصوير الأجسام المرفوعة بسبب مواقع المغناطيس فيما يتعلق بالمكثف والهدف. يمكن تجاوز هذا القيد عن طريق وضع المجهر على جانبه ، أفقيا تماما مما يسمح للمكثف بتركيز الضوء في الشعرية ، والعدسة الموضوعية لتصوير الخلية التي ترتفع بين المغناطيس ، مع الحفاظ على متطلبات إضاءة Köhler.
2. دعم ومستوى الموقف على طاولة الاتساع باستخدام 2 أو 3 مقابس المختبر.
3. للحد من الاهتزازات، قم بدعم طاولة لوح الخبز بأقدام مطاطية مبللة.
4. إزالة المرحلة واستبدالها بمقبس معمل مضغوط لضبط ارتفاع جهاز الرفع(المحور ص)،ومرحلتين تحويليتين أحاديتي المحور؛ واحد لضبط التركيز(ض المحور)، والثاني لمسح أنبوب الشعرية.
5. قم بتوصيل جهاز الرفع المغناطيسي بمقبس المختبر باستخدام وظيفتين بصريتين صغيرتين.

2. ربط الأجسام المضادة لكاربوكوسي-Microparticles/الخرز (تعديل من بروتوكول من قبل PolyAn)

ملاحظة: تحتاج الخرز منخفض الكثافة فقط (1.05 جم/مل) إلى أن تكون مغلفة للكشف عن Rh(+)، ولكن يتم تغطية كل من الخرز عالي الكثافة ومنخفض الكثافة للكشف عن الحويصلات خارج الخلية.

1. إخراج 1 ملغ ما يعادل تعليق حبة وإضافة إلى 0.5 مل من تنشيط العازلة (50 mM MES (MW195.2, 9.72 ملغ في 1 مل)) الرقم الحموضة 5.0 و 0.001٪ بوليسوربات-20).
2. إضافة 12 ميكرولتر من EDC 1.5 M الطازجة (MW 191.7، 0.28755 غرام في 1 مل) و 12 ميكرولتر من 0.3 M Sulfo-NHS (MW 217.14، 0.0651 غرام في 1 مل) في الماء البارد الجليد.
3. وضع أنابيب على شاكر المداري ويهز بقوة لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة لتنشيط مجموعات الكربوسيل على الخرز.
4. إيقاف التنشيط بعد 1 ساعة بإضافة 0.5 مل من اقتران المخزن المؤقت (10x PBS، أو 0.1 M فوسفات pH 7-9).
5. بيليه الخرز عن طريق الطرد المركزي في 20،000 × ز لمدة 10 دقيقة، أو، إذا كان لا يمكن بيليه الخرز، واستخدام 0.45 ميكرومتر فلتر أنبوب الطرد المركزي. يستنشق الفائقة أو التدفق من خلال.
6. غسل الخرز مع 1 مل من 10x برنامج تلفزيوني 3 مرات كما هو الحال في الخطوة 2.5.
7. حساب 25 ميكروغرام من الأجسام المضادة لكل حبات ملغ ومزيج الأجسام المضادة المطلوبة مع الخرز المنشط إلى تركيز الأجسام المضادة النهائي 0.7-1.0 ملغ / مل في برنامج تلفزيوني 10X.
8. وضع أنابيب على أنبوب الروك تعيين على سرعة منخفضة. لفة أنابيب بلطف في درجة حرارة الغرفة بين عشية وضحاها لاقتران.
9. كرر الخطوة 2.5 وغسل الخرز مرتين مع 1 مل من برنامج تلفزيوني 10x.
10. اغسله مع 0.5 مل من 1 M الإيثانولامين (98٪ مخزون = 16.2 M) في درجة الحموضة العازلة 8.0 مع 0.02٪ Polysorbate-20 لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة أثناء اهتزاز بلطف.
11. كرر الخطوة 2.5 واغسل الخرز مرة واحدة في 1 مل من DPBS. يمكن تخزين الخرز في 200 ميكرولتر من DPBS عند 4 درجة مئوية حتى الحاجة.
    ملاحظة: يمكن إيقاف البروتوكول مؤقتا هنا.

3. جمع وإعداد الدم للكشف Rh(+)

1. باستخدام جهاز lancing بنقرة واحدة، وخز إصبع المتبرع Rh(+) وجمع 10 ميكرولتر من الدم إلى 1 مل من DPBS.
2. وصمة عار في الخلايا Rh + مع بقعة غشاء البلازما الفلورسنت. اختياريا، إضافة 1 ميكرولتر من صبغة الفلورسنت إلى تعليق 1 مل من الخلايا Rh+ (1:1000 التخفيف).
3. احتضان الخلايا مع صبغة الفلورسنت في 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.
4. بيليه الخلايا عن طريق الغزل في 5600 × غرام لمدة 15 ق وغسل 3 مرات باستخدام 1 مل من DPBS. ريسوسبند في 1 مل من HBSS مع الكالسيوم والمغنيسيوم (HBSS ++).
5. باستخدام جهاز lancing بنقرة واحدة ، وخز إصبع متبرع Rh(-) وجمع 2 ميكرولتر من الدم.
   ملاحظة: إذا كان إعداد أكثر من 2 الشروط، وجمع ما يكفي من الدم لإضافة 1 ميكرولتر من Rh(-) الدم إلى كل أنبوب.
6. إعداد الأنابيب التجريبية اللازمة: الخرز وحدها، التحكم IgG، عينة.
   1. الخرز وحده: إضافة 174 ميكرولتر من HBSS ++، 1 ميكرولتر من الخرز التحكم IgG، 1 ميكرولتر من الخرز عالية الكثافة (1.2 غرام / مل)، و 24 ميكروغرام من 500 MM GD³⁺ (60 mM).
   2. التحكم IgG: إضافة 172 ميكرولتر من HBSS ++, 1 ميكرولتر من الخرز التحكم IgG, 1 ميكرولتر من الخرز عالية الكثافة, 1 ميكرولتر من Rh- الدم, 1 ميكرولتر من ملطخة Rh + تعليق الدم, و 24 ميكرولتر من 500 mM GD³⁺.
   3. أنبوب عينة إضافة 172 ميكرولتر من HBSS ++، 1 ميكرولتر من الخرز المغلفة المضادة لل RhD، 1 ميكرولتر من الخرز عالية الكثافة، 1 ميكرولتر من Rh-الدم، 1 ميكرولتر من تعليق الدم الملون Rh(+)، و 24 ميكروغرام من 500 مليون غرام من GD^{3 +}.
      ملاحظة: تضاف الخرز عالية الكثافة إلى عينات Rh للرجوع إليها.

4. عزل PMNs للتظاهر فصل الخلية

1. عزل العدلات
   1. ارسم 40 مل من الدم الوريدي في حقنة سعة 60 مل تحتوي على 6 مل من حمض سيترات الصوديوم /الستريك (0.15 م، درجة الحموضة 5.5) و14 مل من 6٪ Dextran-70.
   2. انتظر لمدة 50 دقيقة للدم إلى الرواسب.
   3. طبقة ببطء خلايا معطف برتقالي على رأس 20 مل من Ficoll-Paque عن طريق دفع أعلى 18 مل من خلال أنابيب جمع الدم في أنبوب 50 مل، وتجنب التلوث مع RBCs المترسبة. فمن المستحسن استخدام مجموعة جديدة لجمع الدم، لتقليل التلوث مع RBCs المتبقية المتبقية في أنبوب جمع الدم الأصلي.
   4. بيليه الخلايا معطف بافي عن طريق الطرد المركزي لمدة 20 دقيقة في 3000 × ز. العدلات وتلوث RBCs سوف بيليه في الجزء السفلي من الأنبوب. سوف PBMC تشكيل طبقة بيضاء على رأس Ficoll-باك.
   5. نقل العدلات إلى أنبوب جديد 50 مل.
   6. Lyse أي RBCs المتبقية عن طريق احتضان العدلات مع 20 مل من 0.2٪ محلول NaCl الباردة لمدة 25 ثانية، تليها إضافية 20 مل من 1.6٪ NaCl. يجب أن يكون الحفل النهائي ل NaCl 0.9٪ (متساوي التوتر).
   7. الطرد المركزي تعليق لمدة 10 دقيقة في 3000 x ز.
   8. إزالة supernatant وإعادة إنفاق العدلات إلى التركيز المطلوب.
2. عزل الخلايا الليمفاوية
   1. لوحة PBMCs في RPMI مع 5٪ الحرارة المعطل المصل في لوحات الثقافة 6-جيدا.
   2. احتضان لوحات لمدة 1 ساعة في 37 درجة مئوية. سوف Monocytes تلتزم لوحة، وسوف تكون الخلايا الليمفاوية العائمة بحرية.
   3. إزالة العازلة التي تحتوي على الخلايا الليمفاوية وغسله مرتين مع RPMI.
   4. إعادة تمركز الخلايا اللمفاوية في التركيز المطلوب.
3. تسمية RBCs، PMN، والخلايا الليمفاوية.
   1. تسمية كل نوع الخلية مع صبغة الفلورسنت مختلفة. تأكد من كل فلوريس صبغة في قناة مختلفة. اتبع تعليمات الشركة المصنعة لكل من الأصباغ المختارة.

5. جيل من Vesicles خارج الخلية RBC عن طريق تفعيل تكملة

1. الحصول على الدم الكامل من خلال venipuncture باستخدام أنابيب EDTA.
2. تمرير الدم من خلال مرشح خلايا الدم البيضاء، ومن ثم الطرد المركزي 3 مرات في 500 × ز لمدة 10 دقيقة لكل لعزل خلايا الدم الحمراء. استخدم HBSS++ كحاجز غسيل.
3. جعل aliquots من 100 ميكرولتر RBCs معبأة في أنابيب 1.5 مل، وجعل حجم إلى 1 مل عن طريق إضافة HBSS ++.
4. إضافة C5b,6 إلى تركيز نهائي 0.18 ميكروغرام/مل في HBSS++, ثم دوامة.
5. وضع على شاكر بطيء في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة.
6. أضف بروتين C7 إلى تركيز نهائي قدره 0.2 ميكروغرام/مل. مزيج عن طريق عكس الأنبوب بلطف عدة مرات. لا دوامة من هذه النقطة إلى الأمام.
7. ضع الأنبوب على أنبوب شاكر تعيين بسرعة منخفضة لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
8. أضف بروتين C8 إلى تركيز نهائي قدره 0.2 ميكروغرام/مل، وبروتين C9 إلى 0.45 ميكروغرام/مل. مزيج عن طريق عكس الأنابيب بلطف عدة مرات.
9. حضانة عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
10. الطرد المركزي الأنبوب في 10،000 × ز لمدة 10 دقيقة.
11. جمع النافورة التي تحتوي على EV في أنبوب جديد (ق). لا تترى نقل الناطقة قريبة جدا من بيليه الخلية.

6. تحليل الخلايا على جهاز الارتفاع المغناطيسي

1. تنفيذ بدء تشغيل الأداة وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.
2. تحميل 50 ميكرولتر من العينة في أنبوب الشعرية حتى يتم تعبئة الأنبوب. ختم نهايات الأنبوب الشعري مع تسرب الشعرية التأكد من عدم وجود فقاعات الهواء الحالية.
3. تحميل أنبوب الشعرية في حامل بين المغناطيس العلوي والسفلي. ضبط المرحلة والتركيز على عرض الأمثل.
   ملاحظة: يمكن أن تأخذ الخلايا / الخرز في أي مكان من 5-20 دقيقة للوصول إلى وضع التوازن المغناطيسي على أساس كثافتها وتركيز GD^{3 +}. كلما زاد تركيز GD^{3 +}، كلما كان الوقت أقصر.

Results

يركز الارتفاع المغناطيسي الأجسام ذات الكثافات المختلفة على ارتفاعات مختلفة للارتفاع اعتمادا على كثافة الجسم ، وتوقيعه المغناطيسي ، وتركيز المحلول المغناطيسي ، وقوة المجال المغناطيسي الذي أنشأه مغناطيسان قويان نادران. كما يتم وضع المغناطيس اثنين فوق بعضها البعض، يمكن فقط أن ينظر إلى عينات الرفع، مع الحفاظ على الإضاءة كوهلر، وذلك باستخدام المجهر تحولت على جانبها(الشكل 1). يمكن بسهولة تعديل الارتفاع النهائي للارتفاع الذي يصل إليه كل نوع من أنواع الخلايا عن طريق تغيير تركيز المحلول المغنطيسي.

Discussion

الطارد المركزي المتدرجة حاليا تقنية قياسية لعزل المكونات دون الخلوية على أساس كثافات فريدة من نوعها. غير أن هذا النهج يتطلب استخدام وسائط متخصصة متدرجة ومعدات للطرد المركزي. يسمح نهج الارتفاع المغناطيسي المعروض هنا بإجراء تحقيق مفصل في الخصائص المورفولوجية والوظيفية للخلايا المتداولة ، مع الحد الأدنى ، إن وجد من التلاعب بالخلايا ، مما يوفر وصولا قريبا في الجسم الحي إلى الخلايا المتداولة.

ومع ذلك، عند استخدام الارتفاع المغناطيسي عدة نقاط جديرة بالذكر. أولا ، يجب أن يكون المجهر المستخدم...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
2- (N-Morpholino) هيدرات حمض الإيثان سلفونيك	Sigma Aldrich	M-2933	(MES) ؛ مكون من عازلة التنشيط
50x2.5x1 مم مغناطيس ، مطلي بالنيكل (Ni-Cu-Ni) ، درجة N52 ، ممغنط من خلال سمك 5 مم (0.197 بوصة	) K & J Magnetics		مغناطيس مخصص يستخدم لجهاز الرفع المغناطيسي
التسرب الأنبوبي الشعري (Critoseal)	Leica Microsystems	267620	تستخدم لتغطية نهايات الأنابيب الشعرية
مرشحات أنبوب الطرد المركزي (Corning Costar Spin-X)	Sigma Aldrich	CLS8163	تستخدم لغسل الخرز
مختبر مدمج	جاك Thorlabs	LJ750	تستخدم لضبط جهاز الرفع المغناطيسي
DPBS ، خال من الكالسيوم ، خال من المغنيسيوم	Gibco	14190-144	محلول لتعليق الخرز
Ethanolamine	Sigma Aldrich	E9508-100ML	يستخدم أثناء خطوة الغسيل للخرز
صبغة غشاء البلازما الفلورية (CellMask الأخضر)	Invitrogen	C37608	يستخدم لتلطيخ خلايا Rh +
Gadoteridol Injection	ProHance	NDC 0270-1111-03	الجادولينيوم (Gd3+) ؛ الحل المغناطيسي المستخدم لتعليق الخلايا
HBSS ++	Gibco	14025-092	حل لإعداد العينة
Human C5b ، 6 Complex	Complementary Technology، Inc	A122	تستخدم لتوليد
تقنية تكملة	Human C7	A124	تستخدم لتوليد
تقنية تكملة	Human C8	A125	المستخدمة لتوليد كرات الدم الحمراء Evs
Human C9	protein Complement Technology، Inc	A126	تستخدم لتوليد RBC Evs
Mini Series Post Collar	Thorlabs	MSR2	تستخدم لتأمين جهاز الرفع المغناطيسي لمختبر الرافعات
N- (3-Dimethylaminopropyl) -N & Prime ؛ -ethylcarbodiimide hydrochloride	Sigma Aldrich	E1769-10G	(EDC) ؛ تستخدم في تفاعل اقتران الأجسام المضادة
التحكم	العادي في IgG للأرانبR & D Systems	AB-105-C	تستخدم لطلاء الخرز كحالة تحكم
محلول ملحي مخزن بالفوسفات (محلول 10X ، درجة الحموضة 7.4)	Boston Bioproducts	BM-220	مكون عازلة اقتران ، يستخدم لغسل خطوات
Polysorbate 20 (Tween 20)	Sigma Aldrich	P7949-500ML	مكون عازلة التنشيط
مختبرات	بوليسترين كربوكسيل بوليمر	PC06004	حبات عالية الكثافة (1.05 جم / مل) ، تستخدم لاقتران الأجسام المضادة
Rabbit RhD الأجسام المضادة متعددة النسيلة	Invitrogen	PA5-112694	تستخدم لطلاء الخرز لإزالة عامل Rh في خلايا الدم الحمراء
مجهر من الدرجة البحثية	أوليمبوس	بروفيس AX-70	مجهر يستخدم لتركيب جهاز الرفع المغناطيسي وعرض الخلايا المرتفعة
أقدام الترطيب المطاطية	Thorlabs	RDF1	تستخدم لدعم طاولة اللوح الزجاجي
Square Boro Tubing	VitroTubes	8100-050	أنبوب شعري يستخدم لتحميل العينة في Maglev
Sulfo-NHS	Thermoscientific	24510	يستخدم في تفاعل اقتران الأجسام المضادة
المرحلة الانتقالية	Thorlabs	PT1	تستخدم للتركيز ومسح الأنبوب الشعري