يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

الحصول على البلاعم من الخلايا الوحيدة البشرية لتقييم معدل الإصابة بداء الليشمانيا البرازيلي والاستجابة المناعية الفطرية للمضيف

1.1K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/62555

⸱

أغسطس 7, 2021

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Oswaldo Cruz Foundation, Gonçalo Moniz Institute, 2Federal University of Bahia, 3National Institute of Science and Technology (INCT), Research Institute in Immunology, 4Senai Institute for Innovation in Advanced Health Systems, National Service for Industrial Learning, Integrated Manufacturing and Technology Campus, SENAI - CIMATEC Salvador

في هذه المقالة

ملخص

يصف هذا البروتوكول عملية الحصول على البلاعم البشرية من الخلايا الوحيدة للإصابة بمرض الليشمانيا البرازيلية. كما يسمح للباحثين بتقييم معدل العدوى وقابلية طفيليات البقاء ، وإنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية عن طريق الفحص المجهري الفلوري ، وإنتاج الوسطاء الالتهابيين في المواد الطافية المزروعة للتحقيق في استجابة البلاعم للعدوى.

الملخص

الضامة هي خلايا متعددة الوظائف ضرورية لوظيفة الجهاز المناعي ، والخلية المضيفة الأولية في عدوى الليشمانيا البرازيلية (Lb). هذه الخلايا متخصصة في التعرف على الكائنات الحية الدقيقة والبلعمة ، ولكنها تنشط أيضا الخلايا المناعية الأخرى والمستضدات الحالية ، فضلا عن تعزيز الالتهاب وإصلاح الأنسجة. هنا ، نصف بروتوكولا للحصول على خلايا أحادية النواة من الدم المحيطي (PBMC) للمتبرعين الأصحاء لفصل الخلايا الوحيدة التي تتمايز بعد ذلك إلى ضامة. يمكن بعد ذلك إصابة هذه الخلايا في المختبر بتركيزات مختلفة من الباطل لتقييم القدرة على السيطرة على العدوى ، وكذلك تقييم الاستجابة المناعية للخلية المضيفة ، والتي يمكن قياسها بعدة طرق. تم عزل PBMCs أولا عن طريق الطرد المركزي بتدرج Ficoll-Hypaque ثم تم طلاؤها للسماح للخلايا الوحيدة بالالتصاق بألواح الاستزراع. تمت إزالة الخلايا غير الملتصقة عن طريق الغسيل. بعد ذلك ، تم زراعة الخلايا الملتصقة بعامل تحفيز مستعمرة البلاعم (M-CSF) لمدة 7 أيام للحث على تمايز البلاعم. نقترح طلاء 2 × 106 خلايا لكل بئر على ألواح 24 بئرا من أجل الحصول على 2 × 105 ضامة. يمكن بعد ذلك إصابة البلاعم المتمايزة تماما بالرطل لمدة 4 أو 24 ساعة. ينتج عن هذا البروتوكول نسبة كبيرة من الخلايا المصابة ، والتي يمكن تقييمها عن طريق الفحص المجهري البصري أو الفلوري. بالإضافة إلى مؤشر العدوى ، يمكن قياس حمل الطفيليات عن طريق حساب أعداد الطفيليات داخل كل خلية. يمكن أيضا إجراء المزيد من المقايسات الجزيئية والوظيفية في الثقافة الطفية أو داخل الضامة نفسها ، مما يسمح بتطبيق هذا البروتوكول في مجموعة متنوعة من السياقات وتكييفه أيضا مع أنواع الطفيليات الأخرى داخل الخلايا.

المقدمة

الطفيلي الأولي داخل الخلايا من جنس الليشمانيا هو العامل المسبب لمركب مرض مهمل يعرف باسم داء الليشمانيات1. هذه الأمراض المدارية لها مجموعة واسعة من المظاهر السريرية التي يمكن أن تتراوح من الآفات الجلدية إلى المضاعفات الناشئة عن الشكل الحشوي للمرض ، والتي يمكن أن تكون قاتلة إذا لم يتم علاجها. داء الليشمانيات الجلدي (CL) هو الشكل الأكثر شيوعا لداء الليشمانيات ويتميز بآفات جلدية متقرحة واحدة أو قليلة مع تفاقم الالتهابالمزمن 2. يعتمد تطور المرض على أنواع الليشمانيا ، بالإضافة إلى مجموعة من العوامل المرتبطة بالاستجابة المناعية للمضيف ، والتي تحدد النتائج السريرية3،4. الليشمانيا البرازيلية هي الأنواع الرئيسية التي تسبب مرض الليشمانيا البرازيلي في البرازيل، حيث تم الإبلاغ عن حالات في جميع ولايات البلاد5. تعتبر الاستجابة المناعية ضد L. braziliensis وقائية ، لأنها تقيد الطفيلي في موقع التلقيح ، وتشمل عدة أنواع من الخلايا المناعية ، مثل البلاعم ، العدلات e الخلايا الليمفاوية4،6،7.

البلاعم هي خلايا متعددة الوظائف ضرورية لجهاز المناعة ، لأنها متخصصة في الكشف عن الكائنات الحية الدقيقة وبلعمة لها ، ويمكنها تقديم المستضدات وتنشيط أنواع الخلايا الأخرى. البلاعم قادرة على تنظيم العمليات من الالتهاب إلى إصلاح الأنسجة والحفاظ على التوازن8،9. تلعب هذه الخلايا دورا أساسيا في الاستجابة المناعية المبكرة ضد الطفيليات داخل الخلايا ، مثل الليشمانيا ، كونها مهمة للقضاءعليها 10،11،12.

أثناء عدوى L. braziliensis ، يمكن أن تستجيب البلاعم من خلال آليات مختلفة للقضاء على الطفيلي ، مثل إنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) والوسطاء الالتهابيين13،14. يمكن أن تسترشد الاستجابات المناعية بإنتاج السيتوكينات المسببة للالتهابات أو المضادة للالتهابات ، والتي تساهم في تفاقم الحالة الالتهابية أو عمليات إصلاح الأنسجة6،15،16. تعتبر مرونة الضامة أمرا أساسيا للتسبب المناعي ل CL ، وكذلك للتفاعل بين الطفيليات والمضيف ، وتعتبر هذه الخلايا حاسمة لتوضيح آليات المرض وتطوير مناهج علاجية جديدة.

نظرا لأن CL مرض معقد ، تتطلب التحقيقات من الباحثين استكشاف أنواع الخلايا التي تحاكي تلك الموجودة في البشر. يمكن أن تختلف الاستجابات المناعية التي لوحظت في النماذج التجريبية المختلفة وتنتج نتائج لا تعكس الاستجابة المناعية التي لوحظت في البشر المصابين بشكل طبيعي. وبالتالي ، تم تصميم البروتوكول المقدم هنا لتمكين دراسة البلاعم البشرية واستجاباتها المناعية أثناء CL الناجم عن L. braziliensis.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

وافق مجلس المراجعة المؤسسية للأخلاقيات في البحوث البشرية في معهد غونسالو مونيز (مؤسسة أوزوالدو كروز-IGM-FIOCRUZ، سلفادور، باهيا-البرازيل) على هذه الدراسة (رقم البروتوكول: CAAE 95996618.8.0000.0040).

1. عزل PBMCs البشرية

  1. تأكد من أن عينات الدم ، تدرج الكثافة 1.077 جم / مل (على سبيل المثال ، Ficoll-Histopaque) ، والمحلول الملحي في درجة حرارة الغرفة.
  2. تمييع عينات الدم بمحلول ملحي بنسبة 1: 1.
  3. نقل 10-12 مل من تدرج الكثافة إلى أنابيب 50 مل.
  4. قم بتراكب ما يصل إلى 40 مل من عينة الدم المخففة بعناية فوق تدرج الكثافة. افصل طبقات تدرج الدم والكثافة.
  5. الطرد المركزي الأول: أنابيب الطرد المركزي التي تحتوي على طبقات تدرج الدم والكثافة عند 400 × جم لمدة 30 دقيقة عند 24 درجة مئوية.
    ملاحظة: قم بإيقاف تشغيل الفرامل قبل بدء تشغيل جهاز الطرد المركزي.
  6. قم بإزالة البلازما فوق حلقة PBMC باستخدام ماصة (تقع طبقة الطبقة المصفرية بين طبقات البلازما وتدرج الكثافة ؛ يوجد أدناه خلايا الدم الحمراء / حبيبات الخلايا المحببة).
  7. انقل طبقة PBMC الشبيهة بالسحابة (طبقة طبقة معطف مصفر) بماصة إلى أنبوب سعة 15 مل واملأها بمحلول ملحي بارد (يحفظ على الجليد أو عند 4 درجات مئوية).
  8. الطرد المركزي الثاني: أنابيب الطرد المركزي عند 300 × جم لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية مع تشغيل الفرامل.
  9. تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق الحبيبات عن طريق ملء الأنبوب بالمحلول الملحي البارد.
  10. الطرد المركزي الثالث: أنابيب الطرد المركزي عند 250 × جم لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية مع تشغيل الفرامل.
  11. تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق الحبيبات ، واملأ الأنبوب بالمحلول الملحي البارد.
  12. الطرد المركزي الرابع: الطرد المركزي للأنبوب عند 200 × جم لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية مع تشغيل الفرامل.
  13. تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق الحبيبات ب 1 مل من وسط RPMI البارد.
  14. عد الخلايا لتحديد عدد الخلايا التي تم الحصول عليها.

2. التمايز إلى البلاعم البشرية

ملاحظة: بالنسبة للوحة 24 بئرا ، احسب كمية الخلايا الإجمالية اللازمة للوحة 2 × 106 خلايا لكل بئر ، مما ينتج عنه 2 × 105 ضامة. يعتمد هذا العائد على متوسط 10٪ من الخلايا الوحيدة في دم الإنسان. بدلا من ذلك ، يمكن أيضا إطلاق الخلايا الوحيدة بطرق غير إنزيمية ثم عدها للطلاء.

  1. على طبق 24 بئرا ، ضع أغطية زجاجية مستديرة مقاس 13 مم في قاع كل بئر. لوحة ما يعادل 2×106 خلايا في 1 مل من RPMI غير مكتملة لكل بئر.
    ملاحظة: قلل من عدد الخلايا في كل بئر ، لأن الكميات المبالغ فيها يمكن أن تعيق التصاق الخلايا وتضر بالثقافة. بالإضافة إلى ذلك ، يجب أن تكون جميع الأغطية نظيفة ومعقمة.
  2. احتضان الألواح لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية تحت 5٪ ثاني أكسيد الكربون2 للتصاق الخلية.
  3. قم بإزالة المواد الطافية واغسلها مرة واحدة بمحلول ملحي 0.9٪ في درجة حرارة الغرفة لإزالة أي خلايا غير ملتصقة.
  4. بعد الغسيل، قم بإزالة المحلول الملحي وإضافة 250 ميكرولتر من وسط RPMI المكممل في درجة حرارة الغرفة (10٪ مصل بقري جنين (FBS)، 2 ملي لجلوتامين، 100 ميكروغرام/مل بنسلين، 100 ميكروغرام/مل ستربتومايسين و50 نانوغرام/مل م-سي إسف) لكل بئر.
  5. احتضان الخلايا لمدة 7 أيام عند 37 درجة مئوية تحت 5٪ ثاني أكسيد الكربون2.
    1. أضف 125 ميكرولتر من وسط RPMI المكممل إلى كل بئر كل يومين. في نهاية تمايز الخلايا ، سيكون الحجم النهائي 500 ميكرولتر لكل بئر.
    2. لتحليل صلاحية الخلية ، قم بإجراء ثقافة أخرى بالتوازي على صفيحة 96 بئرا (2 × 105 لكل بئر).
    3. بعد التمايز إلى البلاعم (7 أيام) ، أضف 20 ميكرولتر من كاشف AlamarBlue.
    4. بعد 7 ساعات من الحضانة ، اقرأ اللوحات على مقياس الطيف الضوئي بأطوال موجية تبلغ 570 نانومتر و 600 نانومتر.

3. ثقافة الليشمانيا والعدوى

ملاحظة: L. braziliensis promastigotes من سلالتين مختلفتين (MHOM / BR / 01 / BA788 و MHOM / BR88 / BA-3456) تم استخدامها في هذا الفحص.

  1. عد طفيليات رطل واحسب الحجم للحصول على طفيليات 5 × 105 / مل.
  2. تحضير وسط حشرات شنايدر المكمل (10٪ FBS ، 2 ملي مولار L-glutamine ، 100 U / مل بنسلين ، و 100 مجم / مل ستربتومايسين).
  3. احتضان الطفيليات بحجم إجمالي قدره 5 مل في حاضنة 24 درجة مئوية حتى يتم الوصول إلى المرحلة الثابتة (4 إلى 6 أيام).
    ملاحظة: عد الطفيليات كل يوم لتقييم النمو.
  4. بعد الوصول إلى المرحلة الثابتة ، تقوم مزارع الليشمانيا بالطرد المركزي عند 100 × جم لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية لإزالة أي طفيليات ميتة (تترسب في قاع الأنبوب).
  5. انقل المادة الطافية إلى أنبوب جديد وجهاز طرد مركزي عند 1,800 × جم لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية لاستعادة الطفيليات القابلة للحياة. تخلص من المادة الطافية.
  6. أعد تعليق الحبيبات ب 1 مل من وسط RPMI المكممل لحساب الطفيليات.
  7. احسب حجم الطفيليات للحصول على نسبة طفيلي 10: 1. نقل الطفيليات إلى صفائح الاستزراع التي تحتوي على البلاعم التي سبق زراعتها في وسط RPMI مكمل (~ 300 ميكرولتر / بئر) في درجة حرارة الغرفة.
  8. قم بإزالة المادة الطافية من كل بئر تحتوي على ضامة متباينة.
    ملاحظة: في أقرب وقت ممكن ، استبدل الوسط في كل بئر لتجنب قضاء الخلايا لفترات طويلة بدون وسيط. نقترح إزالة واستبدال الوسط في ثلاثة آبار في المرة الواحدة.
  9. انقل الكمية المحسوبة من الباطل إلى كل بئر يحتوي على ضامة متمايزة.
  10. تصيب الخلايا لمدة 4 أو 24 ساعة عند 37 درجة مئوية تحت 5٪ ثاني أكسيدالكربون 2.
    1. بعد 4 ساعات ، اغسل البلاعم 3 مرات بالمحلول الملحي في درجة حرارة الغرفة لإزالة أي طفيليات غير داخلية.
    2. بالنسبة لفترة العدوى التي تبلغ 24 ساعة ، أضف 300 ميكرولتر من وسط RPMI المكمل إلى كل بئر بعد الغسيل ، ثم أعد احتضانة لمدة 20 ساعة أخرى عند 37 درجة مئوية تحت 5٪ ثاني أكسيدالكربون 2.
  11. قم بإزالة المادة الطافية لقياس الوسطاء الالتهابيين باستخدام مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) باتباع تعليمات الشركة المصنعة.
    1. جهاز طرد مركزي المادة الطافية التي تم جمعها عند 1,800 × جم لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. انقل المادة الطافية إلى أنبوب جديد. يتم تنفيذ هذا الإجراء لإزالة أي طفيليات غير داخلية. يمكن تجميد المواد الطافية والاحتفاظ بها في درجة حرارة -80درجةمئوية حتى وقت التحليل المستقبلي.
      ملاحظة: يمكن استخدام الخلايا لتقييم معدل العدوى أو قابلية الطفيليات أو إنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية.

4. تقييم العدوى

  1. القياس الكمي لمعدل الإصابة
    1. أضف 300 ميكرولتر من الميثانول إلى كل بئر بعد إزالة المادة الطافية. اترك 15 دقيقة لإصلاح الخلايا الملتصقة بقلائف الغطاء.
    2. قم بإزالة الغطاء من الآبار وضعه على دعامة لامتصاصها في محلول تلطيخ الخلية (على سبيل المثال ، Quick Panoptic 2) لمدة 1 دقيقة.
    3. اغمر أغطية الغمر مرتين في محلول تلطيخ الخلية (على سبيل المثال ، Quick Panoptic 3) وانتظر حتى تجف.
    4. ضع 15 ميكرولتر من وسط التثبيت (على سبيل المثال ، Entellan) على الشرائح ، ثم ضع أغطية فوق الوسط.
      ملاحظة: يجب أن تكون جميع البلاعم المرفقة بطبقات الغطاء على اتصال بوسط التركيب.
    5. عد 100 خلية عشوائيا تحت المجهر البصري باستخدام هدف 100x لتحديد معدل الإصابة وعدد الداخلية
  2. الجدوى الطفيلية
    1. بعد 4 ساعات من الإصابة ، اغسل الخلايا بالمحلول الملحي في درجة حرارة الغرفة 3 مرات.
    2. أضف 300 ميكرولتر من وسط حشرات شنايدر المكملة.
    3. احتضن في حاضنة 24 درجة مئوية.
    4. تحديد نمو الطفيليات بعد 48 و 72 و 96 و 120 ساعة.

5. تقييم إنتاج ROS عن طريق المجهر الفلوري

  1. بعد فترة الإصابة ، قم بإزالة المادة الطافية وغسل الخلايا ب 500 ميكرولتر من المحلول الملحي.
  2. أضف 300 ميكرولتر من كاشف المسبار الفلوري (على سبيل المثال ، كاشف CellROX الأخضر عند 5 ميكرومتر) إلى كل بئر.
  3. احتضان الخلايا لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيدالكربون 2.
  4. اغسل الخلايا 3x ب 500 ميكرولتر من محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS).
  5. قم بإصلاح الخلايا التي تحتوي على 300 ميكرولتر من 3.7٪ فورمالديهايد واتركها لمدة 15 دقيقة.
    ملاحظة: قم بقياس إشارة الإزهار في غضون 24 ساعة.
  6. أضف 5 ميكرولتر من عامل تلطيخ DAPI (على سبيل المثال ، DAPI ProLong Gold المضاد للتلاشي) لتلوين الخلايا. ضع الغطاء مع السطح الذي يحتوي على البلاعم على اتصال مباشر بعامل تلطيخ DAPI.
  7. تحليل إشارة الإزهار عن طريق المجهر الفلوري بطول موجة إثارة يبلغ 485/520 نانومتر.
  8. احسب التألق الكلي للخلية المصححة (CTCF) من 30 خلية لكل غطاء باستخدام ImageJ.
    CTCF = الكثافة المتكاملة (مساحة خلية مختارة × متوسط تألق قراءات الخلفية)

6. التحليل الإحصائي

  1. استخدم اختبار مان ويتني لمقارنة مجموعتين مع عينات غير متزاوجة. قم بإجراء التحليلات الإحصائية باستخدام GraphPad Prism 7.0. ضع في اعتبارك الاختلافات ذات دلالة إحصائية عندما < p 0.05.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

يعد فهم الطفيليات وتفاعل الخلايا المضيفة أمرا بالغ الأهمية لتوضيح الآليات المشاركة في التسبب في العديد من الأمراض. على الرغم من أن الخلايا البشرية المستزرعة أقل استخداما بسبب قيود زراعة الخلايا مقارنة بسلالات الخلايا ، إلا أن البروتوكول المقدم هنا يظهر تمايزا قويا وقابلا للتكرار للبلاعم البشرية. يتيح هذا البروتوكول تحليل العديد من جوانب الاستجابة المناعية وبيولوجيا الخلية ، من إنتاج الوسطاء الالتهابيين إلى قابلية العامل المعدي في البلاعم البشرية.

أول دليل على حدوث التمايز الخلوي هو مورفولوجيا ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

البروتوكول المقدم هنا لتمايز الخلايا الوحيدة البشرية إلى البلاعم متبوعا بالعدوى بسلالتين من L. braziliensis يسمح بتقييم العديد من جوانب تفاعل الخلايا الطفيلية. يمكن أن تكون هذه الأدوات حاسمة لتوضيح الأسئلة التي لم تتم الإجابة عليها حول CL. مع إنشاء هذا البروتوكول ، تمكنت مجموعتنا من الكشف عن بعض جوانب الاستجابة المناعية للبلاعم التي تم الحصول عليها من الأفراد المصابين بداء السكري و CL14.

عملية تمايز الخلايا الوحيدة إلى البلاعم ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ويعلن أصحاب البلاغ أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.

شكر وتقدير

تم دعم هذا العمل من قبل Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado da Bahia (FAPESB) بموجب المنحة رقم PET0009/2016 و Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brazil (CAPES) بموجب قانون المالية 001.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
كاشف AlamarBlue Cell ViabilityInvitrogenDAL1100
قارورة ثقافة الخلايا 25 سم & sup2 ؛SPL70125
CellROX كاشف أخضرInvitrogenC10444
دوائر Coverslip 13 ممPerfecta10210013CE
DAPI (4 '، 6-diamidino-2-phenylindole)ThermoFisherD1306
دعم يمكن التخلص منه لجمع الدمBD Vacutainer364815
إبرة جمع الدم Eclipse 21 جم × 1.25 بوصةBD Vacutainer368607
EntellanSigma Aldrich107961
Falcon Hoseical Tubes ، 15 ملSigma AldrichCLS430791-500EA
Falcon Hideical Tubes ، 50 ملStemCell Technologies100-0090
مصل الأبقار الجنينيGibcoA4766801
الفورمالديهايد 3.7٪Merck 252549
شريحة زجاجية  25,4x76,2mmPerfecta0200
HistopaqueSigma Aldrich10771
Human IL-6 ELISA KitRDDY206
Human M-CSF البروتين المؤتلفPeproTech300-25
TNF-a ELISA KitRDDY210
Leukotriene B4 ELISA Kitكايمان520111
ميثانولميركMX0482
بينيليسين - سيربتومايسين - جلوتامين (100x)ThermoFisher10378-016
فوسفات محلول ملحي مخزن درجة الحموضة 7.2 (10x)أنبوب البلازما 70013032
، 158 وحدة USP من هيبارين الصوديوم (مطلي بالرش) BDVacutainer367874
Quick H& طقم تلطيخ E (هيماتوكسيلين ويوسين)abcamab245880
RPMI 1640 جيبكو متوسط11875093
شنايدر متوسطةسيجما ألدريتشS0146
ثقافة الأنسجة 24 بئرا لوحةTPPZ707791-126EA
تريبان بلوجيبكو15250061
جيبكو حشرة

المراجع

  1. Desjeux, P. Leishmaniasis: current situation and new perspectives. Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. 27 (5), 305-318 (2004).
  2. Burza, S., Croft, S. L., Boelaert, M. Leishmaniasis. The Lancet. 392 (10151), 951-970 (2018).
  3. Arenas, R., Torres-Guerrero, E., Quintanilla-Cedillo, M. R., Ruiz-Esmenjaud, J. Leishmaniasis: A review. F1000Research. 6, 1-15 (2017).
  4. Scott, P., Novais, F. O. Cutaneous leishmaniasis: Immune responses in protection and pathogenesis. Nature Reviews Immunology. 16 (9), 581-592 (2016).
  5. Bittencourt, A. L., Barral, A. Evaluation of the histopathological classifications of American cutaneous and mucocutaneous leishmaniasis. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz. 86 (1), 51-56 (1991).
  6. Scorza, B. M., Carvalho, E. M., Wilson, M. E. Cutaneous manifestations of human and murine leishmaniasis. International Journal of Molecular Sciences. 18 (6), (2017).
  7. Carvalho, L. P., Passos, S., Schriefer, A., Carvalho, E. M. Protective and pathologic immune responses in human tegumentary leishmaniasis. Frontiers in Immunology. 3, 1-9 (2012).
  8. Wood, W., Martin, P. Macrophage Functions in Tissue Patterning and Disease: New Insights from the Fly. Developmental Cell. 40 (3), 221-233 (2017).
  9. Okabe, Y., Medzhitov, R. Tissue biology perspective on macrophages. Nature Immunology. 17 (1), 9-17 (2016).
  10. Ribeiro-Gomes, F. L., et al. Macrophage Interactions with Neutrophils Regulate Leishmania major Infection. The Journal of Immunology. 172 (7), 4454-4462 (2004).
  11. Liu, D., Uzonna, J. E. The early interaction of Leishmania with macrophages and dendritic cells and its influence on the host immune response. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 2, 1-8 (2012).
  12. Giudice, A., et al. Macrophages participate in host protection and the disease pathology associated with Leishmania braziliensis infection. BMC Infectious Diseases. 12, (2012).
  13. Morato, C. I., et al. Essential role of leukotriene B4 on Leishmania (Viannia) braziliensis killing by human macrophages. Microbes and Infection. , (2014).
  14. Bonyek-Silva, I., et al. Unbalanced Production of LTB 4/PGE 2 Driven by Diabetes Increases Susceptibility to Cutaneous Leishmaniasis. Emerging Microbes & Infections. , (2020).
  15. Tomiotto-Pellissier, F., et al. Macrophage Polarization in Leishmaniasis: Broadening Horizons. Frontiers in Immunology. 9, 2529(2018).
  16. Anderson, C. F., Mosser, D. M. A novel phenotype for an activated macrophage: the type 2 activated macrophage. Journal of Leukocyte Biology. 72 (1), 101-106 (2002).
  17. Jin, X., Kruth, H. S. Culture of macrophage colony-stimulating factor differentiated human monocyte-derived macrophages. Journal of Visualized Experiments. 2016 (112), 6-11 (2016).
  18. Rios, F. J., Touyz, R. M., Montezano, A. C. Isolation and differentiation of human macrophages. Methods in Molecular Biology. 1527, 311-320 (2017).
  19. Hamilton, T. A., Zhao, C., Pavicic, P. G., Datta, S. Myeloid colony-stimulating factors as regulators of macrophage polarization. Frontiers in Immunology. 5, 1-6 (2014).
  20. Jaguin, M., Houlbert, N., Fardel, O., Lecureur, V. Polarization profiles of human M-CSF-generated macrophages and comparison of M1-markers in classically activated macrophages from GM-CSF and M-CSF origin. Cellular Immunology. 281 (1), 51-61 (2013).
  21. Wozencraft, A. O., Blackwell, J. M. Increased infectivity of stationary-phase promastigotes of Leishmania donovani: Correlation with enhanced C3 binding capacity and CR3-mediated attachment to host macrophages. Immunology. 60 (4), 559-563 (1987).
  22. Sinha, R., et al. Genome plasticity in cultured Leishmania donovani: Comparison of early and late passages. Frontiers in Microbiology. 9, 1-20 (2018).
  23. Rebello, K. M., et al. Leishmania (Viannia) braziliensis: Influence of successive in vitro cultivation on the expression of promastigote proteinases. Experimental Parasitology. 126 (4), 570-576 (2010).
  24. Maspi, N., Abdoli, A., Ghaffarifar, F. P. ro- Pro- and anti-inflammatory cytokines in cutaneous leishmaniasis: a review. Pathogens and Global Health. 110 (6), 247-260 (2016).
  25. Nunes, S., et al. Integrated analysis reveals that miR-193b, miR-671, and TREM-1 correlate with a good response to treatment of human Localized cutaneous leishmaniasis caused by Leishmania braziliensis. Frontiers in Immunology. 9, 1-13 (2018).
  26. De Moura, T. R., et al. Toward a Novel Experimental Model of Infection To Study American Cutaneous Leishmaniasis Caused by Leishmania braziliensis. Infection and Immunity. 73 (9), 5827-5834 (2005).
  27. Lima, F. R., Ferreira, L. D. M., Bonyek-silva, I., Santos, R. L., Tavares, N. M. Metformin promotes susceptibility to experimental Leishmania braziliensis infection. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz. 115, 1-8 (2020).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

تمايز الخلايا البلعميةالاستجابة المناعية الفطريةعزل الخلايا أحادية النواة في الدم المحيطيتدرج فيكولعدوى الخلايا البلعميةالحمل الطفيليالمجهر الفلورياستجابة الخلية المضيفة

تم نشر هذه المقالة

الفيديو قريباً

تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.