نقدم طريقة للتحقيق في تنظيم الخلايا الشوندروسيتية المكانية في الورم الليفي أنولوس للقرص الفقري باستخدام طريقة تقسيم بصري.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
المقطع البصري والتصور للقرص الفقري من التطور الجنيني إلى الانحطاط
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
انحطاط القرص الفقري (IVD) هو السبب الرئيسي لآلام أسفل الظهر ويستلزم درجة عالية من الضعف للأفراد المتضررين. لفك انحطاط القرص وتكون قادرة على تطوير نهج التجديد فهم شامل للبيولوجيا الخلوية لل IVD أمر ضروري. أحد جوانب هذه البيولوجيا التي لا تزال دون إجابة هو مسألة كيفية ترتيب الخلايا مكانيا في حالة فسيولوجية وأثناء الانحطاط. الخصائص البيولوجية لل IVD وتوافرها تجعل من الصعب تحليل هذا النسيج. تبحث هذه الدراسة في تنظيم الخلايا الشوندريوسية المكانية في الورم الليفي الكولوس من التطور الجنيني المبكر إلى انحطاط المرحلة النهائية. يتم تطبيق طريقة الأقسام البصرية (Apotome) لإجراء تحليلات تلطيخ عالية الدقة باستخدام الأنسجة الجنينية البقرية كنموذج حيواني وأنسجة القرص البشري التي تم الحصول عليها من المرضى الذين يخضعون لجراحة العمود الفقري. من كثافة chondrocyte عالية جدا في القرص البقري الجنيني في وقت مبكر، وعدد من الخلايا يقلل خلال الحمل والنمو، والنضج. في الأقراص البشرية ، رافقت زيادة الكثافة الخلوية تطور انحطاط الأنسجة. كما سبق أن ثبت في الغضروف المفصلي، تشكيل الكتلة يمثل سمة مميزة من انحطاط القرص المتقدمة.
المقدمة
القرص الفقري (IVD) هو بنية تعتمد على الغضاريف التي كيميائيا بيولوجيا وفيما يتعلق العمارة الخلوية، للوهلة الأولى، يشبه في نواح كثيرة الغضاريف المفصلية1. في الواقع، يتميز كل من انحطاط IVD وهشاشة العظام (OA) من الغضاريف المفصلية بضيق المساحة المشتركة بسبب ارتداء الغضاريف، والكيس تحت الوخزات وتشكيل هشاشة العظام، والتصلب تحت الوخز2،3. على الرغم من هذه التشابهات الظاهرية تختلف العمارة والدور الوظيفي لكلا النسيجين. في حين تتكون مصفوفة الغضروف المفصلي بشكل رئيسي من شبكة الكولاجين من النوع الثاني المكونة للممرات ، يتكون IVD من ثلاثة أنواع مختلفة من الأنسجة: يأخذ اللبوس النواة الغني بالكولاجين من....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
لتحليل النمو الجنيني والنضج ، تم استخدام أقراص الأبقار. لتقييم انحطاط ال IVD، تم تحليل العينات البشرية.
تم الحصول على أنسجة IVD البشرية من المرضى الذين يخضعون لعملية جراحية لانحطاط القرص القطني ، أو التدلي القرصي ، أو صدمة العمود الفقري في قسم جراحة العظام ، والمستشفى الجامعي في توبنغن ومركز الصدمات BG Tübingen. تم الحصول على موافقة اللجنة الأخلاقية الكاملة قبل بدء الدراسة (المشروع رقم 244/2013BO2). وقد تم الحصول على موافقة خطية مستنيرة من جميع المرضى قبل المشاركة. وقد نفذت هذه الأساليب وفقا للمبادئ التوجيهية المعتمدة.
تم الحصول على الأنسجة البقرية من مكتب ولاية بافاريا للصحة وسلامة الأغذية / Oberschleißheim ومن ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
باستخدام صور الفسيفساء ، يمكن التعرف بوضوح على بنية IVD مع شبكة ألياف الكولاجين الكثيفة في anulus والنواة الأكثر ليونة(الشكل 4). ويمكن ملاحظة انخفاض مستمر في الكثافة الخلوية أثناء النمو الجنيني (الشكل 5). بينما في المراحل المبكرة من تطوير IVD يمكن العثور على كثافة خلية من 11435 خلية / مم² في الليفية الأبقار anulus و 17426 خلية / ملم² في لب النواة البقرية ، وهذه الأرقام تنخفض بسرعة إلى 1011 خلية / مم² (ليفي أنولوس البقري) و 488 خلية / مم² (نواة البقر اللب) حتى ال.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
باستخدام المجهر الفلوري المعزز بتصوير الفسيفساء والقسم البصري ، قمنا بتقييم الترتيب المكاني للخلايا الشوندرية في أنولوس IVD القطني طوال التطوير والنضج والانحطاط. في حين يمكن حصاد الأنسجة التنكسية من المرضى الذين يتلقون جراحة العمود الفقري لانحطاط القرص ، وتحليل الفترة الجنينية ومرحلة النضج يتطلب استخدام كائن حي نموذجي (البقرة). ولوحظت كثافات خلوية عالية في الندول خلال النمو الجنيني المبكر. وفي سياق التطور الإضافي، يمكن ملاحظة انخفاض واضح في الكثافة الخلوية بعد الولادة ونضوجها. في الأنسجة البشرية مع انحطاط القرص المتقدمة،.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.
شكر وتقدير
نشكر المؤلفين المشاركين من المنشورات الأصلية على مساعدتهم ودعمهم. نشكر شارلوت إيما بامبرجر لمساعدتها في الحصول على صور apotome.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| أمفوتريسين ب | ميرك KGaA, ألمانيا | A2942 | |
| مجهر التصاق شرائح SuperFrost Plus | R. Langenbrinck ، ألمانيا | 03-0060 | |
| ApoTome | Carl Zeiss MicroImaging GmbH ، ألمانيا | 462000115 | |
| AxioVision Rel. 4.8 مع Modul MosaiX | Carl Zeiss MicroImaging GmbH ، ألمانيا | ||
| CellMask Actin Tracking Stain | Thermo Fischer Scientific ، الولايات المتحدة | A57249 | |
| Cryostat | Leica Biosystems ، الولايات المتحدة | CM3050S | |
| DAPI | Thermo Fischer Scientific ، الولايات المتحدة | D1306 | |
| Dulbecco's Eagle's medium (DMEM) | Gibco ، Life Technologies ، ألمانيا | 41966052 | |
| حمض الإيثيلين ديامين تترا أسيتيك | سيجما ألدريتش ، الولايات المتحدة | الأمريكية 60004 | |
| منظار التألق - Axio Observer Z1 مع Axio Cam MR3 and Colibri | Carl Zeiss MicroImaging GmbH ، ألمانيا | 3834000604 | |
| الفورمالديهايد | Merck KGaA ، ؛ ألمانيا | 104002 | |
| الصورة J 1.53a ، مع البرنامج المساعد لمضاد الخلية | National Insittute of Health (NIH) ، US | ||
| Invitrogen Alexa Fluor 568 Phalloidin | Thermo Fischer Scientific ، نظارات الغطاء المجهري الأمريكية | A12380 | |
| R. Langenbrinck ، ألمانيا | 01-1818 / 1 | ||
| PAP Pen Liquid Blocker | Science Sevices ؛ GmbH ، ألمانيا | N71310 | |
| Penicillin-Streptomycin | Sigma-Aldrich ، US | P4333 | |
| محلول ملحي مخزن بالفوسفات | Sigma-Aldrich ، الولايات المتحدة | P5119 | |
| Scalpel | pf medical AG ، ألمانيا | 2023-01 | |
| Tissue-tek O.C.T. مركب | Sakura Finetek ، هولندا | SA6255012 |
المراجع
- Urban, J. P. G., Roberts, S. Degeneration of the intervertebral disc. Arthritis Research and Therapy. 5 (3), 120-130 (2003).
- Gupta, K. B., Duryea, J., Weissman, B. N. Radiographic evaluation of osteoarthritis. Radiologic Clinics of North America. 42 (1), 11-41 (2004....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
