Method Article

استخدام الطلاء الأساسي ومنظار صغير مثبت مسبقا بعدسة موضوعية لأبحاث الكالسيوم العابرة في الفئران

DOI:

10.3791/62611

⸱

June 5th, 2021

 ,  ,  , 
1Department of Veterinary Medicine, School of Veterinary Medicine, National Taiwan University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يؤدي انكماش الأسمنت السني أثناء المعالجة إلى إزاحة الصفيحة الأساسية. يقلل هذا البروتوكول من المشكلة عن طريق إنشاء أساس أولي لأسمنت الأسنان يترك مساحة لتدعيم الصفيحة الأساسية. بعد أسابيع ، يمكن تثبيت الصفيحة الأساسية في موضعها على هذه السقالة باستخدام القليل من الأسمنت الجديد ، وبالتالي تقليل الانكماش.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يستخدم علماء الأعصاب المجاهر المصغرة (المناظير) لمراقبة النشاط العصبي في الحيوانات التي تتصرف بحرية. يوفر فريق Miniscope بجامعة كاليفورنيا ، لوس أنجلوس (UCLA) موارد مفتوحة للباحثين لبناء مناظير صغيرة بأنفسهم. يعد V3 UCLA Miniscope أحد أشهر المناظير مفتوحة المصدر المستخدمة حاليا. يسمح بتصوير العابرات الفلورية المنبعثة من الخلايا العصبية المعدلة وراثيا من خلال عدسة موضوعية مزروعة على القشرة السطحية (نظام أحادي العدسة) ، أو في مناطق الدماغ العميقة من خلال مزيج من عدسة ترحيل مزروعة في الدماغ العميق وعدسة موضوعية مثبتة مسبقا في المنظار الصغير لمراقبة الصورة المنقولة (نظام ثنائي العدسات). حتى في ظل الظروف المثلى (عندما تعبر الخلايا العصبية عن مؤشرات مضان ويتم زرع عدسة الترحيل بشكل صحيح) ، يمكن أن يؤدي تغيير حجم الأسمنت السني بين الصفيحة الأساسية وتعلقها بالجمجمة عند معالجة الأسمنت إلى اختلال المحاذاة مع تغيير المسافة بين الهدف وعدسات التتابع ، مما يؤدي إلى ضعف جودة الصورة. الصفيحة الأساسية هي صفيحة تساعد على تركيب المنظار الصغير على الجمجمة وتثبت مسافة العمل بين الهدف وعدسات الترحيل. وبالتالي ، فإن التغيرات في حجم الأسمنت السني حول الصفيحة الأساسية تغير المسافة بين العدسات. يهدف البروتوكول الحالي إلى تقليل مشكلة الاختلال الناتجة عن التغيرات في الحجم في الأسمنت السني. يقلل البروتوكول من اختلال المحاذاة عن طريق بناء أساس أولي لأسمنت الأسنان أثناء زرع عدسة التتابع. وقت النقاهة بعد الزرع كاف لأساس الأسمنت السني لعلاج الصفيحة تماما ، لذلك يمكن تدعيم الصفيحة على هذه السقالة باستخدام أقل قدر ممكن من الأسمنت الجديد. في هذه المقالة ، نصف استراتيجيات الطلاء الأساسي في الفئران لتمكين تصوير النشاط العصبي باستخدام عدسة موضوعية مثبتة في المنظار المصغر.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تعتبر مراسلات النشاط الفلوري مثالية لتصوير النشاط العصبي لأنها حساسة ولها نطاقات ديناميكية كبيرة1،2،3. لذلك ، يستخدم عدد متزايد من التجارب الفحص المجهري الفلوري لمراقبة النشاط العصبي مباشرة1،2،3،4،5،6،7،8،9،10،11،12،13،14....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت الموافقة على جميع الإجراءات التي أجريت في هذه الدراسة من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوان بجامعة تايوان الوطنية (رقم الموافقة: NTU-109-EL-00029 و NTU-108-EL-00158).

1. تقييم حجم تغيير الأسمنت السني

ملاحظة: تحدث تغييرات في حجم الأسمنت السني أثناء عملية المعالجة. اختبر التغيرات في حجم الأسمنت السني قبل الزرع والطلاء الأساسي. يمكن للباحثين اختبار أي نوع من الأسمنت السني واستخدام العلامة التجارية بأقل تغيير في الحجم لتدعيم الصفيحة الأساسية. مثال موضح في الشكل 3.

  1. تزن 0.5 غرام من كل مسحوق أسمنت أسنان وتخلطه مع محلوله المناسب (1 مل).
    ملا....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تقييم تغيير حجم الأسمنت السني
نظرا لأن حجم الأسمنت السني يتغير أثناء عملية المعالجة ، فقد يؤثر بشكل كبير على جودة التصوير ، نظرا لأن مسافة عمل عدسة GRIN تبلغ حوالي 50 إلى 350 ميكرومتر 4,8. لذلك ، تم اختبار اثنين من الأسمنت السني المتاح تجاريا في هذه الحالة ، Tempron و Tokuso ، قبل إجراء الزرع والطلاء الأساسي (الشكل 5). تم تقييم مقاطع الفيديو أولا لتحديد ما إذا كان الأسمنت قد تقلص ثم تمت مقارنة أحجام الأسمنت عند تج.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف هذا التقرير بروتوكولا تجريبيا مفصلا للباحثين الذين يستخدمون نظام UCLA Miniscope ثنائي العدسات. الأدوات المصممة في بروتوكولنا ميسورة التكلفة نسبيا لأي مختبر يرغب في تجربة تصوير الكالسيوم في الجسم الحي. يمكن أيضا استخدام بعض البروتوكولات ، مثل الحقن الفيروسي ، وزرع العدسة ، والطلاء الأساسي الوهمي ، والطلاء الأساسي ، لإصدارات أخرى من نظام miniscope لتحسين معدل نجاح تصوير الكالسيوم. بخلاف المشاكل العامة المتعلقة بالحقن الفيروسي ، وزرع العدسة التي تحتاج إلى إصلاح بغض النظر عن إصدار miniscope ، قد يتسبب هيكل صفيحة.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذه ليست دراسة مدعومة من الصناعة. لم يبلغ المؤلفون عن أي تضارب في المصالح المالية.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم دعم هذا العمل من قبل وزارة العلوم والتكنولوجيا ، تايوان (108-2320-B-002 -074 ، 109-2320-B-002-023-MY2).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
مثقاب 0.7 مم  # 19008-07أدوات العلوم الدقيقة ؛ الولايات المتحدة الأمريكيةللجراحة
0.1 &ndash ؛ 10 و مو ؛ ل أطراف الماصة104-Q ؛ QSPفيشر العلمية. سنغافورةلاختبار الأسمنت للأسنان
20 G IV cathater#SR-OX2032CATerumo Corporation ؛ طوكيو ، اليابانللجراحة
27 G إبرةAGANI ، AN * 2713Rشركة Terumo ؛ طوكيو ، اليابانللجراحة
AAV9-syn-jGCaMP7s-WPRE# 104487-AAV9 ؛ 1.5 * 10 ^ 13Addgene الفيروسي الإعدادي ؛ MA ، الولايات المتحدة الأمريكيةللحقن الفيروسي
كبريتاتAstart. Hsinchu ، تايوانللجراحة / الطلاء الوهمي / الطلاء
الأساسي V3http://miniscope.orgللطلاء الوهمي / الطلاء
BLU TACK# 30840350Bostik ؛ تشيلسي ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكيةطين لاصق قابل لإعادة الاستخدام ؛ للجراحة / الطلاء الوهمي / الطلاء
الأساسي Bone Rongeur Friedman13 سمDiener ؛ توتلينغن ، ألمانيالطلاء الأساس
بوبرينورفينإنديفيور ؛ المملكة المتحدةللجراحة
كاربروفينريماديلزويتيس. إكستون, السلطة الفلسطينيةتسكين
Ceftazidimeتايوان التكنولوجيا الحيوية; تايوانتمنع العدوى
الحصول على البيانات ثنائي الفينيل متعدد الكلور ل UCLA Miniscopeتم شراؤها على https://www.labmaker.org/collections/neuroscience/products/data-aquistion-system-daqلطلاء
مجموعة أسمنت الأسنانTempronGC Corp ؛ طوكيو ، اليابانلاختبار مجموعة الأسمنت
للأسنانTokuso CurefastTokuyama Dental Corp. ؛ طوكيو ، اليابانلاختبار الأسمنت / الجراحة / الطلاء الوهمي / الطلاء
الأساسي المزدوج المختبر القياسي مع محولات الماوس والفئران# 51673Stoelting Co ؛ إلينوي ، الولايات المتحدة الأمريكيةللجراحة / الطلاء الوهمي / الطلاء الأساسي
مرهمAlcon ؛ جنيف ، سويسراللجراحة / الطلاء الوهمي / الطلاء
إيبوبروفينيونغشين ؛ تسكين تايوان
IsofluranePanion & شركة BF Biotech Inc. ؛ تاويوان ، تايوانللجراحة / الطلاء الوهمي / الطلاء
InscopixnVista SystemInscopix ؛ بالو ألتو ، كاليفورنياللمقارنة مع V3 UCLA Miniscope
KetaminePfizer ؛ نيويورك ، نيويوركللقتل الرحيم
محلول ملحيللجراحة
مشابك بلدغ صغيرة# 12.102.04ديميدو ؛ Tuttlingen ، ألمانيالزرع العدسات
Microliter Microsynringes ، 2.0 & micro ؛ L ، مقياس 25# 88400هاميلتون ؛ Bonaduz ، سويسراللحقن الفيروسي
صب مطاط السيليكونZA22 ThixoZhermack. باديا بوليسين ، إيطالياللطلاء الوهمي
لمؤشر التدرج الموضوعي (GRIN) عدسة# 64519بصريات إدموند ؛ نيوجيرسي ، الولايات المتحدة الأمريكيةللطلاء الوهمي / الطلاء
الأساسي Parafilm#PM996Bemis ؛ Neenah ، الولايات المتحدة الأمريكيةللطلاء الوهمي
شفط محمول#DF-750Doctor's Friend Medical Instrument Co.، Inc. ، Taichung ، تايوانللجراحة
Relay GRIN# 1050-002177Inscopix ؛ بالو ألتو ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكيةللطلاء الوهمي / الطلاء
الأساسي مسامير تثبيت من الفولاذ المقاوم للصدأبقطر 1.00 مم ، الطول الإجمالي 3.00 ممللجراحة
مجهرستيريو #SL720سيج فيسون ؛ مدينة تايبيه الجديدة ، تايوانللجراحة / الطلاء الوهمي / الطلاء
الأساسي جهاز التجسيم# 51673Stoelting ؛ إلينوي ، الولايات المتحدة الأمريكيةللجراحة / الطلاء الوهمي / الطلاء
للأشعة فوق البنفسجية علاج لاصق# 3321لوكتايت ؛ Dü سلدورف ، ألمانيالاختبار الأسمنت للأسنان
V3 UCLA Miniscopeتم شراؤها على https://www.labmaker.org/products/miniscope-complete-set-of-componentsللجراحة / الطلاء الوهمي / الطلاء
XylazineX1126Sigma-Aldrich ؛ سانت لويس ، ميزوري
مضخة Xylocaine للقتل الرحيم 10٪AstraZeneca ؛ S & ouml; درت & أومل; lje ، السويدللجراحة
الأتروبين الأساسي Duratear الأساسي الأساسي عادي عدسة الأساسي الأساسي لرذاذ

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Tian, L., Hires, S. A., Looger, L. L. Imaging neuronal activity with genetically encoded calcium indicators. Cold Spring Harbor Protocols. 2012 (6), 647-656 (2012).
  2. Grienberger, C., Konnerth, A. Imaging calcium in neurons. Neuron. 73 (5), 862-885 (2012).
  3. Dana, H., et a....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Miniscope ImagingCalcium TransientsBaseplating MiceObjective LensRelay Lens ImplantationDental CementFluorescence SignalsStereotaxic SurgeryNeural Activity ImagingViral Vector Injection

Related Articles