هنا، نقدم بروتوكولا للزرع الجراحي لنافذة بصرية مذهولة بشكل دائم لصدر مورين، والتي تمكن من التصوير عالي الدقة داخل الرئة. إن ديمومة النافذة تجعلها مناسبة تماما لدراسة العمليات الخلوية الديناميكية في الرئة ، خاصة تلك التي تتطور ببطء ، مثل التقدم النقيلي للخلايا السرطانية المنشورة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نافذة دائمة للتحقيق في انتشار السرطان إلى الرئة
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الانبثاث، الذي يمثل حوالي 90٪ من الوفيات المرتبطة بالسرطان، ينطوي على الانتشار الجهازي للخلايا السرطانية من الأورام الأولية إلى المواقع الثانوية مثل العظام والدماغ والرئة. وعلى الرغم من الدراسة المكثفة، لا تزال التفاصيل الآلية لهذه العملية غير مفهومة بشكل جيد. في حين أن طرائق التصوير الشائعة، بما في ذلك التصوير المقطعي المحوسب (CT)، والتصوير المقطعي للانبعاثات البوزيترونية (PET)، والتصوير بالرنين المغناطيسي (MRI)، توفر درجات متفاوتة من التصور الإجمالي، يفتقر كل منها إلى الدقة الزمنية والمكانية اللازمة للكشف عن ديناميكيات الخلايا السرطانية الفردية. ولمعالجة ذلك، تم وصف العديد من التقنيات للتصوير داخل الحتمية للمواقع النقيلية الشائعة. من بين هذه المواقع، أثبتت الرئة أنها تواجه تحديا خاصا في الوصول إلى التصوير داخل الفيتي بسبب رقتها ودورها الحاسم في الحفاظ على الحياة. على الرغم من أن العديد من النهج قد وصفت سابقا للتصوير داخل الخلية الواحدة للرئة سليمة، وكلها تنطوي على إجراءات الغازية للغاية ونهاية، والحد من الحد الأقصى لمدة التصوير ممكن إلى 6-12 ساعة. وصف هنا هو تقنية محسنة لزرع دائم من نافذة بصرية صدرية طفيفة التوغل لتصوير عالية الدقة للرئة (WHRIL). وإلى جانب النهج المكيف للتصوير الدقيق، تسهل النافذة البصرية المبتكرة التصوير المتسلسل داخل الفيتية للرئة السليمة بدقة خلية واحدة عبر جلسات تصوير متعددة وتمتد لعدة أسابيع. وبالنظر إلى المدة غير المسبوقة للوقت الذي يمكن جمع بيانات التصوير خلاله، يمكن أن تسهل WHRIL الاكتشاف المتسارع للآليات الديناميكية الكامنة وراء التقدم النقيلي والعديد من العمليات البيولوجية الإضافية داخل الرئة.
المقدمة
المسؤولة عن ~ 90٪ من الوفيات، الانبثاث هو السبب الرئيسي للوفيات المرتبطة بالسرطان1. من بين المواقع الرئيسية للنقائل لوحظ سريريا (العظام والكبد والرئة والدماغ)2، وقد ثبت الرئة تحديا خاصا للتصوير في الجسم الحي عن طريق المجهر داخل الجسم. وذلك لأن الرئة هي جهاز حساس في حركة دائمة. تمثل الحركة المستمرة للرئتين، التي تتفاقم أكثر بسبب حركة القلب داخل الصدر، حاجزا كبيرا أمام التصوير الدقيق. لذلك ، نظرا لعدم إمكانية الوصول النسبي إلى طرائق التصوير البصري داخل الفيتالي عالي الدقة ، غالبا ما يعتبر نمو السرطان داخل الرئة عملية غامضة3.
في الإعداد السريري، تتيح تقنيات التصوير مثل التصوير المقطعي المحوسب (CT) والتصوير المقطعي لانبعاثات البوزيترون (PET) والتصوير بالرنين المغناطيسي (MRI) التصور العميق داخل الأعضاء الحيوية السليمة مثل الرئة4. ومع ذلك ، في حين أن هذه الطرائق توفر وجهات نظر ممتازة للعضو الإجمالي (غالبا ما تكشف عن علم الأمراض قبل ظهور الأعراض السريرية) ، إلا أنها غير كافية للكشف عن الخلايا السرطانية المنشورة الفردية أثناء تقدمها خلال المراحل المبكرة من الانبثاث. وبالتالي ، بحلول الوقت الذي توفر فيه الطرائق المذكورة أعلاه أي مؤشر على الانبثاث في الرئة ، تكون البؤر النقيلية راسخة بالفعل وتتكاثر. منذ البيئة الدقيقة الورم يلعب دورا محوريا في تطور السرطان وتشكيل الانبثاث5،6، هناك اهتمام كبير في التحقيق في الخطوات الأولى من البذر النقيلي في الجسم الحي. ومما يزيد من هذا الاهتمام زيادة التقدير أن الخلايا السرطانية نشر حتى قبل الكشف عن الورم الأساسي7,8 والأدلة المتزايدة على أنها البقاء على قيد الحياة كخلايا واحدة وفي حالة نائمة لسنوات إلى عقود قبل أن يتم النمو إلى الانبثاث الكلي9.
في السابق ، كان تصوير الرئة بدقة خلية واحدة ينطوي بالضرورة على تحضيرات الجسم الحي السابق أو explant10،11،12،13، مما يحد من التحليلات إلى نقاط زمنية واحدة. في حين أن هذه الاستعدادات لا توفر معلومات مفيدة، فإنها لا توفر أي نظرة ثاقبة في ديناميات الخلايا السرطانية داخل الجهاز متصلة بنظام الدورة الدموية سليمة.
وقد مكنت التطورات التكنولوجية الأخيرة في التصوير التصور داخلvital من الرئة سليمة في قرار خلية واحدة على مدى فترات تصل إلى 12 ساعة14،15،16. وقد تم تحقيق ذلك في نموذج مورين باستخدام بروتوكول ينطوي على التهوية الميكانيكية، وإعادة استئصال القفص الصدري، وشل الرئة بمساعدة الفراغ. ومع ذلك ، على الرغم من تقديم أول صور خلية واحدة دقة الرئة سليمة من الناحية الفسيولوجية ، وتقنية الغازية للغاية ونهاية ، وبالتالي منع المزيد من جلسات التصوير وراء الإجراء مؤشر. هذا القيد، لذلك، يمنع تطبيقه على دراسة الخطوات النقيلية التي تستغرق وقتا أطول من 12 ساعة، مثل السكون وإعادة بدء النمو14،15،16. وعلاوة على ذلك، يجب تفسير أنماط السلوك الخلوي التي لوحظت باستخدام هذا النهج التصوير بحذر، بالنظر إلى أن فروق الضغط الناجمة عن الفراغ من المرجح أن تسبب تسريبات في تدفق الدم.
للتغلب على هذه القيود، تم مؤخرا تطوير نافذة طفيفة التوغل للتصوير عالي الدقة للرئة (WHRIL)، مما يسهل التصوير التسلسلي على مدى فترة ممتدة من أيام إلى أسابيع، دون الحاجة إلى التهوية الميكانيكية17. وتنطوي هذه التقنية على إنشاء "قفص الصدري شفاف" مع تجويف صدري مختوم للحفاظ على وظيفة الرئة الطبيعية. هذا الإجراء جيد التحمل ، مما يسمح للفأر بالتعافي دون تغيير ذي مغزى في نشاط خط الأساس ووظيفته. لتعريب موثوق بالضبط نفس منطقة الرئة في كل جلسة تصوير ذات الصلة، تم تطبيق تقنية تعرف باسم التصوير الدقيق لهذه النافذة18. من خلال هذه النافذة ، كان من الممكن التقاط صور للخلايا عند وصولها إلى سرير الأوعية الدموية في الرئة ، وعبور البطانة ، والخضوع لتقسيم الخلايا ، والنمو إلى الانبثاث الدقيق.
هنا ، تقدم الدراسة وصفا مفصلا لبروتوكول جراحي محسن لزرع WHRIL ، والذي يبسط الجراحة مع زيادة إمكانية إعادة إنتاجها وجودتها في الوقت نفسه. في حين تم تصميم هذا البروتوكول لتمكين التحقيق في العمليات الديناميكية الكامنة وراء الانبثاث ، يمكن تطبيق هذه التقنية بدلا من ذلك على التحقيقات في العديد من عمليات بيولوجيا الرئة وعلم الأمراض.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وقد تم تنفيذ جميع الإجراءات الموصوفة في هذا البروتوكول وفقا للمبادئ التوجيهية واللوائح الخاصة باستخدام الحيوانات الفقارية، بما في ذلك الموافقة المسبقة من قبل كلية ألبرت أينشتاين للطب المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها.
1. يزيف من نوافذ
- شطف إطارات النوافذ البصرية (الشكل التكميلي 2) مع محلول 1٪ (ث / v) من المنظفات النشطة أنزيميا.
- داخل جرة زجاجية، غمر إطارات النوافذ البصرية في محلول هيدروكسيد الصوديوم بنسبة 5٪ (ث/v) لمدة 30 دقيقة عند 70 درجة مئوية.
- إزالة وغسل إطارات النوافذ مع الماء deionized.
- داخل جرة زجاجية جديدة، غمر إطارات النوافذ البصرية في محلول حمض الستريك 7٪ (ث / v) لمدة 10 دقائق عند 55 درجة مئوية.
- مرة أخرى، قم بإزالة إطارات النوافذ وغسلها بالماء المتأين.
- كرر الخطوة 1.2; ثم، وإزالة وغسل إطارات النوافذ مع الماء deionized.
2. التحضير للجراحة
- إجراء الجراحة في غطاء محرك السيارة أو خزانة تدفق صفح. لتجنب تلوث المجال الجراحي، تأكد من مناطق منفصلة ومتميزة للتحضير والجراحة والتعافي على التوالي.
- قبل الجراحة، قم بتعقيم جميع الأدوات الجراحية في الأوتوكلاف. إذا تم التخطيط لإجراءات لاحقة، إعادة تعقيم الأدوات باستخدام معقم حبة ساخنة. لهذا الإجراء الجراحي، يتم استخدام تقنية نصائح فقط.
- السلطة على حبة الجراحية ساخنة والخرز معقم.
- تخدير الماوس مع 5٪ isoflurane في غرفة التخدير.
- لإزالة الشعر، ضعي كريم إزالة الشعر بسخاء على موقع شق الصدر العلوي الأيسر. بعد ما لا يزيد عن 20 ثانية، مسح بحزم الشعر وكريم إزالة الشعر باستخدام ورق الأنسجة الرطبة. كرر حسب الضرورة لإزالة الشعر من موقع الجراحة.
- باستخدام خياطة حرير 2-0، ربط عقدة في قاعدة القسطرة 22 G، وترك ذيول طويلة 2 بوصة (انظر الشكل 1A).
3. جراحة نافذة الرئة
- غسل اليدين باستخدام الصابون المطهر.
- قبل كل عملية جراحية جديدة، دون قفازات معقمة جديدة.
- لمنع جفاف القرنية وتلف عيون الماوس، وتطبيق مرهم العيون على كلتا العينين.
- تمييع 10 ميكرولتر (0.1 ملغم/كغ) من البوبرينورفين في 90 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني معقم، ثم حقن تحت الجلد لضمان المسكنات قبل الجراحة.
- Intubate الماوس مع خياطة الحرير مربوطة 22 G القسطرة15. باستخدام لمبة التضخم، تأكد من التنبيب الناجح من خلال ونلحظ ارتفاع الصدر الثنائية عند ضغط لمبة.
- تأمين القسطرة التنبيب عن طريق ربط خياطة الحرير 2-0 حول خطم الماوس (انظر الشكل 1B).
- ضع الماوس على الحامل الجراحي الساخن وضعية في التداعي الجانبي الأيمن لكشف الصدر الأيسر.
- توصيل جهاز التنفس الصناعي إلى القسطرة التنبيب.
- ضمان التحكم، والتهوية مستقرة على جهاز التنفس الصناعي ومن ثم خفض الايزوفلوران إلى 3٪. في بداية الإجراء ودوريا طوال مدة الإجراء، قم بتقييم كفاية التخدير من خلال إجراء اختبار قرصة إصبع القدم.
- باستخدام الشريط الورقي، بشكل قحفي وcaudally تأمين الأطراف الأمامية والهندية، على التوالي، إلى المرحلة الجراحية ساخنة. ضع شريطا آخر بطول ظهر الفأرة لزيادة التعرض إلى أقصى حد للمجال الجراحي (انظر الشكل 1C).
- فتح جميع الأدوات الجراحية تحت غطاء محرك السيارة للحفاظ على العقم.
- تعقيم الموقع الجراحي من خلال تطبيق سخية من المطهر على جلد الفأر.
- باستخدام ملقط، ورفع الجلد وجعل شق دائري ~ 10 ملم، ~ 7 ملم إلى يسار القص و ~ 7 مم متفوقة على الهامش الفرعي(الشكل 1D).
- تحديد بعناية أي السفن الرئيسية. إذا كان تقسيم الأوعية ضروريا، الكي في كلا الطرفين مع القلم الكهربائي للحفاظ على hemostasis.
- استئصال الأنسجة الرخوة overlying الأضلاع.
- رفع الضلع6 أو7 باستخدام ملقط. باستخدام شفرة واحدة من مقص تشريح صغيرة حادة، والجانب مدورة نحو الرئة، واخترق بعناية العضلات الوربي بين الأضلاع6 و7 th لدخول الفضاء داخل الصدر (الشكل 1E).
- تصريف دقيق علبة الهواء المضغوط في عيب لانهيار الرئة وفصلها عن جدار الصدر. أطلق الهواء المضغوط في رشقات نارية قصيرة لمنع إصابة الرئة المسببة للياتوجينيك.
- ضع لكمة الخزعة على أداة القطع(الشكل التكميلي 1)ومناورة بعناية قاعدة أداة القطع من خلال شق الوربي(الشكل 1F).
- توجيه قاعدة أداة القطع بحيث أنها موازية مع جدار الصدر. لكمة ثقب دائري 5 ملم من خلال القفص الصدري (الشكل 1G).
ملاحظة: تأكد من أن أنسجة الرئة المكشوفة وردية اللون، دون ظهور علامات على حدوث تلف. - باستخدام خياطة الحرير 5-0، وخلق غرزة محفظة سلسلة ~ 1 ملم من الحفرة، محيط، متشابكة مع الأضلاع (الشكل 1H).
- ضع إطار النافذة بحيث تتم محاذاة حواف العيب الدائري داخل أخدود النافذة (انظر الشكل 1I).
- قفل آمن النافذة المزروعة عن طريق ربط بإحكام أسفل خياطة الحرير 5-0.
- تحميل 100 ميكرولتر من مادة لاصقة هلام سيانواكريلات في حقنة 1 مل.
- جفف الرئة عن طريق تطبيق تيار لطيف ثابت من الهواء المضغوط ل ~ 10-20 ق (الشكل 1J).
- باستخدام ملقط لقبضة إطار النافذة من قبل الحافة الخارجية، ورفع بلطف لضمان فصل الرئة من تحت سطح الأمواج من إطار النافذة.
- الاستغناء عن طبقة رقيقة من مادة لاصقة سيانواكريلات على طول تحت سطح الأمواج من إطار النافذة البصرية(الشكل 1K).
- زيادة الضغط الإيجابي للانتهاء من الزمام (PEEP) على جهاز التنفس الصناعي لتضخيم الرئة.
- عقد لمدة 10-20 ق، وتطبيق ضغط لطيف ولكن شركة لإرفاق إطار النافذة البصرية على أنسجة الرئة(الشكل 1L).
- الاستغناء عن قطرة 5 ملم من مادة لاصقة هلام سيانواكريلات المتبقية على غطاء مستطيل.
- التقط غطاء 5 مم باستخدام التقاطات الفراغ. تراجع تحت السطح من coverlip في لاصقة ، ثم كشط قبالة لاصقة الزائدة ثلاث مرات ضد الجانب من غطاء مستطيل ، بحيث لا يبقى سوى طبقة رقيقة جدا(الشكل 1M).
- وضع بعناية coverlip لتناسب داخل العطلة في وسط إطار النافذة البصرية ويقام فوق أنسجة الرئة في زاوية. لفترة وجيزة المشبك جهاز التنفس الصناعي لتوليد ضغط إيجابي، فرط تضخيم الرئة. باستخدام حركة دوارة، قم بتوجيه الغطاء الموازي لأنسجة الرئة لإنشاء تباعد مباشر بين سطح الرئة وتحت سطح السطح للزلزلة. الحفاظ على ضغط لطيف، مما يسمح لاصقة سيانواكريلات لتعيين (~ 25 ق).
- استخدام ملقط لفصل coverlip من التقاطات فراغ (الشكل 1N).
- باستخدام خياطة الحرير 5-0، مرة أخرى إنشاء غرزة سلسلة محفظة، وهذه المرة <1 ملم محيط من الحافة القطعية لشق الجلد. دس أي جلد زائد تحت الحافة الخارجية للإطار النافذة قبل ربط عليه بإحكام مع عقدة قفل.
- لضمان وجود ختم محكم الهواء بين غطاء الغطاء وإطار النافذة، قم بتوزيع كمية صغيرة من السيانواكريل السائل في واجهة الزجاج المعدني (انظر الشكل 1O).
- قم بإرفاق إبرة معقمة بحقنة الأنسولين 1 مل. أدخل الإبرة أسفل عملية xiphoid ، وتقدم نحو الكتف الأيسر ، وأدخل تجويف الصدر من خلال الحجاب الحاجز. سحب بلطف مرة أخرى على حقنة لإزالة أي الهواء المتبقي من تجويف الصدر (انظر الشكل 1P).
- إزالة الشريط من الماوس.
- إيقاف ايزوفلوران.
- استمر في التهوية باستخدام الأكسجين بنسبة 100٪ حتى يظهر الماوس جاهزا للاستيقاظ.
- قطع بعناية خياطة الحرير 2-0 حول خطم الماوس وتقشير الماوس.
- نقل الماوس إلى قفص نظيف ورصد حتى تعافى تماما. قتل الفأرة إذا كانت علامات صعوبة في التنفس موجودة.
- توفير مسكن بعد العملية الجراحية عن طريق حقن تحت الجلد 10 ميكرولتر (0.1 ملغم / كجم) من البوبرينورفين المخفف في 90 ميكرولتر من محلول الفوسفات المعقم العازل (PBS).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يتم تلخيص خطوات العملية الجراحية الموصوفة في هذا البروتوكول وتوضيحها في الشكل 1. لفترة وجيزة، قبل الجراحة، يتم تخدير الفئران ويتم إزالة الشعر فوق الصدر الأيسر. يتم تنبيب الفئران وتهوية ميكانيكيا لتمكين البقاء على قيد الحياة عند اختراق تجويف الصدر. يتم استئصال الأنسجة الرخوة التي تفرط في الأضلاع ، ويتم إنشاء عيب دائري صغير ، يمتد علىالأضلاع 6 و 7. يتم إدخال إطار النافذة البصرية في العيب ويتم الالتزام بجانبها السفلي (خارج الفتحة الواضحة) إلى أنسجة الرئة. ثم يتم تأمين إطار...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
في مواقع الانبثاث البعيد مثل الرئة ، يوفر التصوير البصري عالي الدقة نظرة ثاقبة على الديناميكيات المتقنة لنبثبث الخلايا السرطانية. من خلال تمكين التصور في الجسم الحي للخلايا السرطانية الفردية وتفاعلاتها مع الأنسجة المضيفة ، أثبت التصوير داخل الجسم عالي الدقة أنه مفيد لفهم الآليات الكامنة وراء الانبثاث.
الموصوفة هنا هو بروتوكول جراحي محسن لزرع الصدر الدائم من نافذة بصرية مصممة لتمكين التصوير التسلسلي للرئة مورين عن طريق المجهر متعدد الفوتون عالية الدقة. النافذة التي تم إنشاؤها باستخدام ...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ولا يكشف صاحبا البلاغ عن أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
تم دعم هذا العمل من خلال المنح التالية: CA216248 ، CA013330 ، وجائزة مونتيفيوري روث ل. كيرششتاين T32 للتدريب CA200561 ، وجائزة METAvivor المهنية المبكرة ، ومركز Gruss-Lipper Biophotonics وبرنامج التصوير المتكامل ، وجين أ. ومايلز ديمبسي. نود أن نشكر مرفق التصوير التحليلي (AIF) في كلية آينشتاين للطب على دعم التصوير.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| محلول 1٪ (وزن / حجم) من المنظفات النشطة للإنزيم | Alconox Inc | N / A | & nbsp ؛ منظف أنيوني مركز مع إنزيم البروتياز للتنظيف اليدوي والموجات فوق الصوتية |
| 2 & Micro ؛ م الكريات المجهرية الفلورية | Invitrogen | F8827 | |
| 5 مم غطاء | المجهر الإلكتروني | 72296-05 | |
| 5٪ (وزن / حجم) محلول هيدروكسيد الصوديوم | Sigma-Aldrich | S8045 | |
| 5٪ Isoflurane | Henry Schein، Inc | 29405 | |
| 5-0 حرير مضفر بإبرة قطع RB-1 | Ethicon، Inc. | 774B | |
| 7٪ (وزن / حجم) محلول حامض الستريك | Sigma-Aldrich | 251275 | |
| نافذة من الفولاذ المقاوم للصدأ مقاس 8 مم | N / A | N / A | مخصص ، <قوي> الشكل التكميلي 2< / قوي> |
| 9 سم 2-0 ربطة عنق حريرية | Ethicon، Inc. | LA55G | |
| 5 مم لكمة خزعة يمكن التخلص | منها Integra | 33-35-SH | |
| مقص تشريح دقيق حاد | Roboz | RS-5980 | |
| حامل أداة نافذة نحاسية | N / A | N / A | حسب الطلب ، الشكل التكميلي 3 |
| Buprenorphine | Hospira | 0409-2012-32 | |
| قلم Cautery | Braintree Scientific | GEM 5917 | |
| Chlorhexidine gluconate | ؛ بيكتون وديكنسون وشركاه | 260100 | ChloraPrep عصا مسحة واحدة 1.75 مل |
| علبة هواء مضغوط | Falcon | DPSJB-12 | |
| Cyanoacrylate | Henkel | LOC1363589 | |
| O.C. White Company | FL3000 | ||
| معقم حبة | CellPoint Scientific | GER & nbsp ؛ 5287-120 فولت | المبرم 500 |
| ملقط Graefe | Roboz | RS-5135 | |
| مصباح حراري بالأشعة تحت الحمراء | Braintree Scientific | HL-1 | |
| محاقن الأنسولين | Becton Dickinson | 329424 | |
| Isoflurane مبخر | SurgiVet | VCT302 | |
| Jacobson حامل إبرة مع قفل | Kalson Surgical | T1-140 | |
| أدوات تطبيق طرف القطن الطويلة | Medline Industries | MDS202055 | |
| Nair | Church & amp شركة دوايت | 40002957 | |
| نيومايسين / بوليميكسين ب / باسيتراسين | جونسون & أمبير جونسون | 501373005 | مضاد حيوي مرهم |
| العيون | Dechra المنتجات البيطرية | 17033-211-38 | |
| شريط ورقي | فيشر Scientific | S68702 | |
| جهاز التنفس الصناعي للفئران | كينت Scientific | PS-02 | PhysioSuite |
| غطاء مستطيل زجاجي | Corning | 2980-225 | |
| حامل | التنبيب القوارضBraintree Scientific | RIS 100 | |
| لمبة تضخم الرئة الحيوانية الصغيرة | هارفارد | جهاز 72-9083 | |
| أداة قطع الفولاذ المقاوم للصدأ | N / A | N / A | حسب الطلب ، <قوية> الشكل التكميلي 1< / قوي> |
| سلفاميثوكسازول وتريميثوبريم مضاد حيوي عن طريق الفم | Hi-Tech Pharmacal Co. | 50383-823-16 | |
| منصة جراحية متعددة الوظائف للفئران ، مع تدفئة | كينت Scientific | SURGI-M02 | منصة جراحية ساخنة |
| قسطرة القصبة الهوائية | Exelint International | 26746 | 22 G قسطرة |
| نظام التقاط الفراغ مسبار معدني | Ted Pella، Inc. | 528-112 |
المراجع
- Mehlen, P., Puisieux, A. Metastasis: a question of life or death. Nature Reviews Cancer. 6 (6), 449-458 (2006).
- Lee, Y. T. Breast carcinoma: pattern of metastasis at autopsy. Journal of Surgical Oncology. 23 (3), 175-180 (1983).
- Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites. Nature Reviews Cancer. 2 (8), 563-572 (2002).
- Coste, A., Oktay, M. H., Condeelis, J. S., Entenberg, D. Intravital imaging techniques for biomedical and clinical research. Cytometry Part A. 95 (5), 448-457 (2019).
- DeClerck, Y. A., Pienta, K. J., Woodhouse, E. C., Singer, D. S., Mohla, S. The tumor microenvironment at a turning point knowledge gained over the last decade, and challenges and opportunities ahead: A white paper from the NCI TME network. Cancer Research. 77 (5), 1051-1059 (2017).
- Borriello, L., et al. The role of the tumor microenvironment in tumor cell intravasation and dissemination. European Journal of Cell Biology. 99 (6), 151098(2020).
- Hosseini, H., et al. Early dissemination seeds metastasis in breast cancer. Nature. 540 (7634), 552-558 (2016).
- Harper, K. L., et al. Mechanism of early dissemination and metastasis in Her2(+) mammary cancer. Nature. 540, 589-612 (2016).
- Risson, E., Nobre, A. R., Maguer-Satta, V., Aguirre-Ghiso, J. A. The current paradigm and challenges ahead for the dormancy of disseminated tumor cells. Nature Cancer. 1 (7), 672-680 (2020).
- Qian, B., et al. A distinct macrophage population mediates metastatic breast cancer cell extravasation, establishment and growth. PLoS One. 4 (8), 6562(2009).
- Qian, B. Z., et al. CCL2 recruits inflammatory monocytes to facilitate breast-tumour metastasis. Nature. 475 (7355), 222-225 (2011).
- Miyao, N., et al. Various adhesion molecules impair microvascular leukocyte kinetics in ventilator-induced lung injury. American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 290 (6), 1059-1068 (2006).
- Bernal, P. J., et al. Nitric-oxide-mediated zinc release contributes to hypoxic regulation of pulmonary vascular tone. Circulation Research. 102 (12), 1575-1583 (2008).
- Entenberg, D., et al. In vivo subcellular resolution optical imaging in the lung reveals early metastatic proliferation and motility. IntraVital. 4 (3), 1-11 (2015).
- Rodriguez-Tirado, C., et al. Long-term High-Resolution Intravital Microscopy in the Lung with a Vacuum Stabilized Imaging Window. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (116), e54603(2016).
- Looney, M. R., et al. Stabilized imaging of immune surveillance in the mouse lung. Nature Methods. 8 (1), 91-96 (2011).
- Entenberg, D., et al. A permanent window for the murine lung enables high-resolution imaging of cancer metastasis. Nature Methods. 15 (1), 73-80 (2018).
- Dunphy, M. P., Entenberg, D., Toledo-Crow, R., Larson, S. M. In vivo microcartography and subcellular imaging of tumor angiogenesis: a novel platform for translational angiogenesis research. Microvascular Research. 78 (1), 51-56 (2009).
- Harney, A. S., Wang, Y., Condeelis, J. S., Entenberg, D. Extended time-lapse intravital imaging of real-time multicellular dynamics in the tumor microenvironment. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (112), e54042(2016).
- Seynhaeve, A. L. B., Ten Hagen, T. L. M. Intravital microscopy of tumor-associated vasculature using advanced dorsal skinfold window chambers on transgenic fluorescent mice. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (131), e55115(2018).
- Entenbery, D., et al. Time-lapsed, large-volume, high-resolution intravital imaging for tissue-wide analysis of single cell dynamics. Methods. 128, 65-77 (2017).
- Ueki, H., Wang, I. H., Zhao, D., Gunzer, M., Kawaoka, Y. Multicolor two-photon imaging of in vivo cellular pathophysiology upon influenza virus infection using the two-photon IMPRESS. Nature Protocols. 15 (3), 1041-1065 (2020).
- Ritsma, L., Ponsioen, B., van Rheenen, J. Intravital imaging of cell signaling in mice. IntraVital. 1 (1), 2-10 (2012).
- Kedrin, D., et al. Intravital imaging of metastatic behavior through a mammary imaging window. Nature Methods. 5 (12), 1019-1021 (2008).
- Harney, A. S., et al. Real-time imaging reveals local, transient vascular permeability, and tumor cell intravasation stimulated by TIE2hi macrophage-derived VEGFA. Cancer Discovery. 5 (9), 932-943 (2015).
- Karagiannis, G. S., et al. Assessing tumor microenvironment of metastasis doorway-mediated vascular permeability associated with cancer cell dissemination using intravital imaging and fixed tissue analysis. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (148), e59633(2019).
- Karagiannis, G. S., et al. Neoadjuvant chemotherapy induces breast cancer metastasis through a TMEM-mediated mechanism. Science Translational Medicine. 9 (397), (2017).
- Dreher, M. R., et al. Tumor vascular permeability, accumulation, and penetration of macromolecular drug carriers. Journal of the National Cancer Institute. 98 (5), 335-344 (2006).
- Rizzo, V., Kim, D., Duran, W. N., DeFouw, D. O. Ontogeny of microvascular permeability to macromolecules in the chick chorioallantoic membrane during normal angiogenesis. Microvascular Research. 49 (1), 49-63 (1995).
- Hoshino, A., et al. Tumour exosome integrins determine organotropic metastasis. Nature. 527 (7578), 329-335 (2015).
- Ueki, H., et al. In vivo imaging of the pathophysiological changes and neutrophil dynamics in influenza virus-infected mouse lungs. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (28), 6622-6629 (2018).
- Kornfield, T. E., Newman, E. A. Measurement of retinal blood flow using fluorescently labeled red blood cells. eNeuro. 2 (2), (2015).
- Dasari, S., Weber, P., Makhloufi, C., Lopez, E., Forestier, C. L. Intravital microscopy imaging of the liver following leishmania infection: An assessment of hepatic hemodynamics. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (101), e52303(2015).
- Chaigneau, E., Roche, M., Charpak, S. Unbiased analysis method for measurement of red blood cell size and velocity with laser scanning microscopy. Frontiers in Neuroscience. 13, 644(2019).
- Kim, T. N., et al. Line-scanning particle image velocimetry: an optical approach for quantifying a wide range of blood flow speeds in live animals. PLoS One. 7 (6), 38590(2012).
- Presson, R. G., et al. Two-photon imaging within the murine thorax without respiratory and cardiac motion artifact. American Journal of Pathology. 179 (1), 75-82 (2011).
- Tabuchi, A., Mertens, M., Kuppe, H., Pries, A. R., Kuebler, W. M. Intravital microscopy of the murine pulmonary microcirculation. Journal of Applied Physiology. 104 (2), 338-346 (2008).
- Travis, W. D. Classification of lung cancer. Seminars in Roentgenology. 46 (3), 178-186 (2011).
- Scholten, E. T., Kreel, L. Distribution of lung metastases in the axial plane. A combined radiological-pathological study. Radiologica Clinica (Basel). 46 (4), 248-265 (1977).
- Braman, S. S., Whitcomb, M. E. Endobronchial metastasis. Archives of Internal Medicine. 135 (4), 543-547 (1975).
- Herold, C. J., Bankier, A. A., Fleischmann, D. Lung metastases. European Radiology. 6 (5), 596-606 (1996).
- Kimura, H., et al. Real-time imaging of single cancer-cell dynamics of lung metastasis. Journal of Cellular Biochemistry. 109 (1), 58-64 (2010).
- Thevenaz, P., Ruttimann, U. E., Unser, M. A pyramid approach to subpixel registration based on intensity. IEEE Transactions on Image Processing: A Publication of the IEEE Signal Processing Society. 7 (1), 27-41 (1998).
- Sharma, V. P. ImageJ plugin HyperStackReg V5.6. Zenodo. , (2018).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
