هنا نقدم بروتوكولا يستند إلى نظام دودة الوجبات (Tenebrio molitor) الطعم الذي تم استخدامه لعزل واختيار الفطريات المسببة للأمراض (EPF) من عينات التربة. يتم استخدام صيغة رقم كونيديا فعالة (ECN) لاختيار EPF عالية تحمل الإجهاد على أساس الخصائص الفسيولوجية لمكافحة الآفات الميكروبية في هذا المجال.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
عزل واختيار الفطريات الإنتوموباتية من عينات التربة وتقييم الفوعة الفطرية ضد الآفات الحشرية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الفطريات النتوموباثوجينية (EPF) هي واحدة من عوامل مكافحة الميكروبات للإدارة المتكاملة للآفات. لمكافحة الآفات المحلية أو الغازية، من المهم عزل واختيار الشراكة بين الشعوب الأصلية. لذلك ، تم استخدام طريقة طعم التربة جنبا إلى جنب مع الطعم الحشري (دودة الوجبات ، Tenebrio molitor) في هذه الدراسة مع بعض التعديلات. ثم خضع صندوق المعاشات التقاعدية المعزول لاختبار الفوعة ضد الآفات الزراعية سبودوبتيرا ليتورا. وعلاوة على ذلك، تعرضت سلالات ال EPF المحتملة لتحديدات مورفولوجية جزيئية. وبالإضافة إلى ذلك، تم إجراء إنتاج كونيديا و المقايسة الحرارية لسلالات EPF واعدة ومقارنتها؛ وقد تم استبدال هذه البيانات كذلك في صيغة رقم كونيديا الفعال (ECN) لتصنيف المختبر. ويمكن تحسين نظام دودة الطعم في التربة وصيغة ال ECN عن طريق استبدال أنواع الحشرات ودمج المزيد من عوامل الإجهاد لتقييم التسويق والتطبيق الميداني. ويوفر هذا البروتوكول نهجا سريعا وفعالا لاختيار الأنظمة الاحيائية، وسيحسن البحوث المتعلقة بعوامل المكافحة البيولوجية.
المقدمة
حاليا، الفطريات المسببة للأمراض (EPF) تستخدم على نطاق واسع في مكافحة الميكروبات من الآفات الزراعية والغابات والبستانية. ومزايا صندوق الالشراكة الاقتصادية هي نطاقات مضيفه الواسعة، وقدرته الجيدة على التكيف البيئي، وطبيعته الصديقة للبيئة، وأنه يمكن استخدامه مع مواد كيميائية أخرى لإظهار الأثر التآزري للإدارة المتكاملة للآفات(1)،2. للتطبيق كعامل لمكافحة الآفات ، من الضروري عزل عدد كبير من EPF إما عن الحشرات المريضة أو البيئة الطبيعية.
وتساعد عينات هذه الكائنات الحية من مضيفيهم في فهم التوزيع الجغرافي ومعدل انتشار الكائنات الحية الكهربائية في التجمعات الطبيعية....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
ملاحظة: يظهر المخطط الانسيابي بالكامل في الشكل 1.
1. عزل واختيار الفطريات الإنتوموباتية المحتملة (EPF)
- جمع عينة التربة
- إزالة 1 سم من التربة السطحية، ومن ثم جمع التربة داخل عمق 5-10 سم باستخدام مجرفة من كل موقع أخذ العينات.
ملاحظة: مواقع أخذ العينات ستكون جبلا أو غابة أو مناطق قليلة السكان لتجنب تلوث سلالات EPF التي يتم رشها اصطناعيا. التأكد من تغطية مناطق جمع عينات التربة بالحواس على السطح. التربة الجافة أو التربة الرطبة ليست مناسبة لهذه التجربة. - سجل تفاصيل كل موقع لأخذ العينات، بما في ذلك نظام تحديد المواقع العالمي (GPS)، والارتفاع، ونوع الحقل، ودرجة الحرارة السنوية، وهطول الأمط....
- إزالة 1 سم من التربة السطحية، ومن ثم جمع التربة داخل عمق 5-10 سم باستخدام مجرفة من كل موقع أخذ العينات.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
عزل واختيار الفطريات الإنتوموباتشيكية المحتملة (EPF)
وباستخدام طريقة بناء مكتبة تينبريو موليتور بوساطة الفطريات الإنتوموباتشيكية ، سيتم استبعاد عدد الفطريات التي لا تحتوي على نشاط لقتل الحشرات ؛ وبالتالي، يمكن زيادة كفاءة اختيار صندوق المعاشات التقاعدية واختياره بشكل كبير. وأثناء تطبيق هذه الطريقة، سجلت معلومات عن مواقع أخذ العينات وعينات التربة ومعدلات الإنبات الفطري (الجدول 2). واستنادا إلى بياناتنا السابقة، تم الحصول على ما مجموعه 101 عزل .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
وقد استخدمت الفطريات Entomopathogenic (EPF) لمكافحة الحشرات. هناك عدة طرق لعزل وتحديد وتعريف EPF30,31,32. وبمقارنة الأنواع المختلفة من أساليب الطعم الحشري، تم العثور على بوفيريا باسيانا وميتاريزيوم أنيسوبرليا عادة في الطعم الحشري6،12،13،14. من بين هذه الطعوم الحشرية ، أظهرت غاليري.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن المؤلفون أنه لا يوجد تضارب في المصالح في هذا العمل.
شكر وتقدير
تم دعم هذا البحث من قبل غرانت 109-2313-B-005 -048 -MY3 من وزارة العلوم والتكنولوجيا (MOST).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| Agar الصف البكتريولوجي | BIOMAN SCIENTIFIC Co.، Ltd. | AGR001 | مناسب في معظم تطبيقات زراعة الخلايا / الجزيئية والبيولوجيا. |
| AGAROSE ، التكنولوجيا الحيوية الصف | BIOMAN SCIENTIFIC Co.، Ltd. | AGA001 | للرحلان الكهربائي للحمض النووي. |
| BioGreen Safe DNA Gel Buffer | BIOMAN | SDB001T | |
| حفار الفلين النحاسي | Dogger | D89A-44001 | |
| قبلة كانون x2 | Canon | EOS 450D | لمورفولوجيا مستعمرة السلالة القياسية |
| حاضنة درجة حرارة ثابتة | Yihder Co.، Ltd. | LE-509RD | حفظ الفطريات. |
| مكعب ميني الطرد المركزي | GeneReach | MC-CUBEE | |
| DigiGel 10 نظام صور جل رقمي | TOPBIO | DGIS-12S | |
| Finnpipette F2 0.2 إلى 2 & micro ؛ L ماصة | حراري | 4642010 | |
| علمية Finnpipette F2 1 إلى 10 & micro; L ماصة | حرارية 4642030 | ||
| علمية Finnpipette F2 10 إلى 100 & L ماصة | حراري | 4642070 | |
| Finnpipette F2 100 إلى 1000 & micro; L ماصة | حراري 4642090 | ||
| Finnpipette F2 2 إلى 20 & micro; L ماصة | حراري 4642060 | ||
| علمية Finnpipette F2 20 إلى 200 & L الماصة | الحرارية العلمية | 4642080 | |
| GeneAmp نظام PCR 9700 | الأنظمة الحيوية التطبيقية | 4342718 | |
| GenepHlow Gel / PCR Kit | Geneaid | DFH100 | |
| Genius حاضنة الحمام | الجاف العلوم الرئيسية | MD-01N | |
| أسطوانة متدرجة مخصص 100 مل | SIBA | SABP-1195906 | قياس حجم الكواشف. |
| عداد الحساب اليدوي | SDI | NO.1055 | |
| الدم | البشري الحيوي | AP-0650010 | احسب عدد |
| تلقيح | Dogger | D8GA-23000 | |
| غطاء | IDEAHOUSE | RS92004 | |
| زجاج الغطاء الصغير | MUTO PURE CHEMICALS CO.، LTD | 24241 | |
| نظام التصوير المجهري | SAGE VISION CO.,LTD | SGHD-3.6C | |
| مجهر الشرائح | DOGGER | DG75001-07105 | |
| Mupid-2plus DNA Gel Electrophoreses | ADVANCE | AD110 | |
| نيكون مجهر بصري | SAGE VISION CO.، LTD | Eclipse CI-L | |
| كوب بلاستيكي | IDEAHOUSE | CS60016 | |
| Presto Mini gDNA Yeast | Kit Geneaid | GYBY300 | طقم استخراج الحمض النووي الجيني الفطري |
| مرق سكر العنب Sabouraud (Sabouraud Liquid Medium) | HiMedia الرائدة في مجال العلوم البيولوجية | M033 | تستخدم لزراعة الخمائر والعفن والكائنات الحية الدقيقة الحمضية. |
| شفرة مشرط رقم 23 | Swann-Morton | 310 | |
| مقبض مشرط رقم 4 | AGARWAL SURGICAL | SSS -FOR-01-91 | |
| مجرفة | حفظ & آمن | A -1580242 -00 | |
| Silwet L-77 | bioman(phytotech) | S7777 | الفاعل بالسطح |
| Sorvall Legend Micro 17 أجهزة الطرد المركزي | الدقيقة الحرارية العلمية | 75002403 | |
| ملاقط الصلب | SIPEL ELECTRONIC SA | GG-SA | |
| طبق بتري معقم | BIOMAN SCIENTIFIC Co., Ltd. | 1621 | حاويات أسطوانية ضحلة مع أغطية مجهزة ، خصيصا لاستخدام علم الأحياء الدقيقة أو زراعة الخلايا. |
| ThermoCell MixingBlock | BIOER | MB-101 | |
| Tween 80 | FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation | 164-21775 | |
| TwinGuard ULT Freezer | Panasonic Healthcare Holdings Co.، Ltd. | MDF-DU302VX-80 | درجة ؛ تم تخزين عينة C. |
| خزانة من نوع الأرضية العمودية | Chih Chin | BSC-3 | زراعة التشغيل الفطرية. |
| Vortex Genie II | Scientific | SIG560 | |
| Zipper | حفظ & آمن | A -1248915 -00 | |
| 100 نقطة أساس سلم الحمض النووي | Geneaid | DL007-20 | |
| ° C فريزر | فريجيدير | فريجيدير | FFFU21M1QW-20 درجة ؛ تم تخزين عينة C والكواشف التجريبية. |
| 2X SuperRed PCR Master Mix | TOOLS | TE-SR01 | |
| 50X TAE Buffer | BIOMAN | TAE501000 |
المراجع
- Wraight, S. P., Carruthers, R. I. Biopesticides: use and Delivery. , Springer. 233-269 (1999).
- Chase, A., Osborne, L., Ferguson, V. Selective isolation of the entomopathogenic fungi Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae from an artificial potting medium. Flor....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
