طريقة عالية الإنتاجية وقوية ومرنة للغاية للوقت للتعقيم السطحي لبذور Arabidopsis

أربيدوبسيس هو نوع نباتي ثنائي الفصي ينتمي إلى عائلة براسيكاي. دورة حياتها قصيرة نسبيا (شهرين لكل جيل في ظل ظروف النمو ليوم طويل)، وحجم النبات الصغير، والتلقيح الذاتي مع إنتاج مئات البذور لكل نبات جعلت من أول نوع نموذج نباتي أساسي^1،2. وبالإضافة إلى ذلك، كان تسلسل الجينوم لها تماما^3،واسعة أدوات علم الوراثة العكسي (المشبعة T-DNA، transposon، والسكان المعدلة كيميائيا) متوفرة^4،5،6، وفعالة Agrobacterium-بوساطة التحول راسخة للحصول على خطوط معدلة وراثيا كافية لمزيد من العمل المصب⁷ . وهكذا، خلال العقدين الماضيين، تم تحقيق تقدم كبير باستخدام Arabidopsis كنوع نموذجي لتشريح جوانب متنوعة من بيولوجيا النبات على المستوى الجزيئي، بما في ذلك الاختلاف الطبيعي والوراثي والفينوتيبيك^8،9.

لتوصيف وظيفيا الجينات ذات الاهتمام في Arabidopsis، التعقيم السطحي البذور للقضاء على الملوثات الفطرية والبكتيرية هو الخطوة الأساسية لكثير من بروتوكولات المصب التي تتطلب الثقافات المحورية. التحول الوراثي لفرط التعبير¹⁰، الضربة القاضية (RNA-I¹¹⁾أو خروج المغلوب (تحرير الجينوم^12،13)من وظيفة الجينات ، توطين subcellular¹⁴، نشاط المروج^15،16، البروتين البروتين¹⁷ والتفاعل بين البروتين والحمض النووي¹⁸، على سبيل المثال لا يذكر سوى التطبيقات الأكثر شيوعا ، وكلها تتطلب خطوة التعقيم سطح البذور. وهكذا، على الرغم من بساطته النسبية، يلعب تعقيم سطح البذور دورا أساسيا في العديد من التحليلات الوظيفية.

حتى الآن، وقد وضعت فئتين رئيسيتين من أساليب التعقيم السطحي البذور على أساس إما الغاز أو على التعقيم في مرحلة السائل¹⁹. وفي حين أن إنتاجية التعقيم السطحي للبذور في مرحلة الغاز متوسطة إلى عالية، فإن استخدام غاز الكلور الكاشف الخطر كعامل تعقيم سطحي أعاق تطبيقه على نطاق واسع. تعتمد الطرق القائمة على التعقيم في المرحلة السائلة ، على العكس من ذلك ، على مواد كيميائية أكثر اعتدالا مثل الإيثانول وحلول التبييض للتعقيم السطحي ، وتستخدم على نطاق أوسع على الرغم من أن إنتاجها أقل بطبيعته من تبخير الكلور. بشكل عام، يتم استخدام طريقتين مختلفتين تستخدمان الكواشف السائلة بشكل عام. ويستند أسلوب واحد يستخدم إلى حد كبير على الغسيل مع الإيثانول والتبييض بتركيزات مختلفة لمدة مختلفة من الوقت^20،21. ويستند أسلوب آخر على تطبيق التبييض فقط^21،22. وتطبق كلتا الطريقتين أساسا لتعقيم سطح البذور على نطاق صغير. ومع ذلك، في العديد من التجارب، فمن الضروري لفحص العديد من خطوط أربيدوبسي المعدلة وراثيا المستمدة من تحويل واحد^15،23 أو الشاشة في موازاة العديد من خطوط المعدلة وراثيا ولدت من التحولات المختلفة^24،25. وعلى حد علمنا، لم تنشر أي طريقة قائمة على السوائل لتعقيم سطح البذور عالي الإنتاجية، مما يشكل، على الرغم من عدم الاعتراف به، اختناقا هاما لنهج الجينوم الوظيفي. لذلك، تطوير أساليب آمنة وقوية وعالية الإنتاجية لتعقيم سطح البذور هو خطوة ضرورية وحاسمة نحو نجاح التوصيف الوظيفي للعديد من الجينات في وقت واحد.

وتحقيقا لهذه الغاية، في الدراسة الحالية، يتم تقديم طريقة محسنة للتعقيم السطحي لبذور الأرابيدوسيس. هذه الطريقة آمنة ومنخفضة التكلفة وقوية للغاية وعالية الإنتاجية ، مما يسمح بالتعامل مع 96 خطا مستقلا في غضون ساعة واحدة من بداية تعقيم سطح البذور حتى نهاية بذر البذور في أطباق بيتري. تعتمد الطريقة التي أثبتت على الأجهزة المختبرية الأساسية المتاحة على نطاق واسع مثل مضخة فراغ ، وأواني زجاجية قابلة للاستهلاك ، وأدوات بلاستيكية. توفر هذه الطريقة المحسنة للمجتمع العلمي نهجا آمنا وبسيطا وبأسعار معقولة لتبسيط تعقيم سطح البذور مع إنتاجية كافية لنهج الجينوم الوظيفي الحديث في Arabidopsis وغيرها من الأنواع النباتية غير النموذجية.

1. الكواشف وإعداد وسائل الإعلام

1. إعداد محلول الإيثانول بنسبة 70٪: أضف 737 مل من الإيثانول التقني بنسبة 95٪ إلى 263 مل من الماء المقطر. تخلط جيدا.
   ملاحظة: إعداد محلول الإيثانول 70٪ على مقاعد البدلاء العمل غير عقيمة.
   تنبيه: الإيثانول شديد الاشتعال ويمكن أن يسبب تهيجا خطيرا في العينين. الابتعاد عن النيران ومصادر الحرارة. في حالة ملامسة العينين، اشطفي بالماء الوفير.
2. إعداد محلول التبييض بنسبة 5٪: أضف 5 مل من التبييض المنزلي (يحتوي على ~ 3.5٪ من هيبوكلوريت الصوديوم، NaClO) إلى 95 مل من الماء المقطر العقيم. أضف بضع قطرات من المنظفات غير الأيونية (على سبيل المثال، توين 20) واخلطها جيدا.
   ملاحظة: إعداد محلول التبييض 5٪ داخل غطاء محرك السيارة صفح.
   تنبيه: هيبوكلوريت الصوديوم، المكون النشط للتبييض، هو مزعج للغاية. وهو شديد التآكل ويمكن أن يسبب أضرارا جسيمة للجهاز الهضمي. في حالة الاتصال، شطف فورا مع وفرة المياه. في حالة الابتلاع، اتصل بمركز مكافحة السموم أو طبيب للحصول على المشورة العلاجية.
3. إعداد نصف قوة Murashige وسكوغ (1/2 MS)^{المتوسطة 26}.
   1. أضف 2.2 غرام من مسحوق MS المتوسط (بما في ذلك الفيتامينات) و 10 غرام من السكروز في 800 مل من الماء المقطر. ضبط درجة الحموضة للمحلول باستخدام 1 M KOH وبذلك يصل حجم إلى 1 لتر باستخدام الماء المقطر. Aliquot 500 مل في زجاجة 1 لتر وإضافة 4G من أجار لإعداد وسيطة صلبة. أوتوكلاف الحل.
   2. بعد الالاستعباد التلقائي، تبرد المتوسطة إلى 50-53 درجة مئوية في حمام مائي وتصب في أطباق بيتري تحت غطاء محرك السيارة تدفق صفح. لإعداد المتوسطة الانتقائية، أضف 1000 ميكرولتر/لتر من محلول مخزون كاناميسين 50 ملغم/مل (اخلط 500 ملغ من الكاناميسين كبريتات أحادية الهيدروهيدرات في 10 مل من الماء المقطر، وتصفية التعقيم وتخزينها عند -20 درجة مئوية) إلى الوسط (50-53 درجة مئوية). تخلط جيدا عن طريق الدوامة، وتصب في أطباق بيتري كما ذكر من قبل.

2. الإعداد أسبيراتور

ملاحظة: يتم تلخيص إعداد الأداة في الشكل 1.

1. قم بتوصيل مدخل مضخة الفراغ بأحد طرفي أنبوب البولي إيثيلين (PE) بحجم مناسب. قم بتوصيل الطرف الآخر من الأنبوب بمنفذ الغطاء ثنائي الاتجاه لزجاجة التكتكة. التفاف تقاطع الأنابيب بإحكام مع فيلم الختم(جدول المواد)لضمان اتصال الهواء ضيق.
2. توصيل أنبوب PE الثاني إلى مدخل (ثقب جاحظ إلى داخل الزجاجة) من screwcap على زجاجة decantation. تناسب الجانب الآخر من الأنبوب إلى منفذ صمام حوض السمك. إذا لزم الأمر، التفاف مع فيلم الختم على طول تقاطع للقضاء على تسرب الهواء.
3. قبل الاستخدام مباشرة، تناسب العقيمة 200 ميكرولتر ماصة تلميح إلى مدخل مرشح الحوض تحت غطاء محرك السيارة تدفق صفح.

الشكل 1: الرسم التخطيطي لجهاز الشفط لإزالة عالية الإنتاجية من السوائل التعقيم. للوضوح، لا يتم رسم أجزاء واحدة إلى الحجم. الحرف (أ) يشير إلى مضخة فراغ،(ب)زجاجة الخزان لجمع السوائل (الإيثانول، التبييض، أو المياه العقيمة)،(ج)صمام لتجنب ارتجاع السوائل،(D)العقيمة 200 ميكرولتر ماصة تلميح، و (ه) أنبوب الطرد الدقيق 1.5 مل تحتوي على البذور والتعقيم السائل. تشير الأسهم إلى اتجاه تدفق الهواء. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

3. عالية الإنتاجية السائل تعقيم سطح البذور

ملاحظة: الإجراء العام والحد الأدنى من الوقت اللازم للتعقيم السطحي ل Arabidopsis thaliana (L.) Heynh البرية نوع (كول-0) (Arabidopsis) البذور مع 96 عينات مستقلة هي تلخيصها في الشكل 2.

1. تسمية مع علامة دائمة دفعتين من أنابيب الطرد الدقيق 48 × 1.5 مل مع أرقام التدريجي.
2. إضافة 100-200 بذور Arabidopsis إلى كل من أنابيب الطرد الدقيق 1.5 مل معقمة 96 (ما يقرب من 1-2 مم فوق الجزء السفلي من نهاية مخروطية من الأنبوب).
3. Aliquot حوالي 1000 ميكرولتر من الإيثانول 70٪ في كل أنبوب باستخدام ماصة المصلية المعقمة 10 مل داخل غطاء محرك السيارة تدفق صفح (دفعة البذور واحد، 48 أنابيب) وإغلاق بعناية الأغطية.
   ملاحظة: الاستغناء عن الحلول لا تحتاج إلى أن تكون دقيقة للغاية، طالما أن حجم الاستغناء عدة مرات أعلى من حجم البذور. بدلا من ذلك، قم بتنفيذ هذه الخطوة خارج غطاء غطاء الرأس (حالة غير معقمة).
4. هز الأنابيب على تردد التذبذب من 8.0 هرتز لمدة 3 دقائق على الأقل في شاكر.
5. إزالة المحولات من شاكر ونقلها إلى سلة من جهاز الطرد المركزي على مقاعد البدلاء.
6. تدور بسرعة أسفل البذور باستخدام وظيفة نبض (موجودة في معظم أجهزة الطرد المركزي benchtop) للوصول إلى 1880 × ز (~ 15 ق).
   ملاحظة: تؤثر قوى الطرد المركزي الأطول أو الأعلى سلبا على إنبات البذور.
7. نقل أنابيب 48 من المحولات إلى رف واحد وفتح جميع الأنابيب تحت غطاء محرك السيارة تدفق صفح. تجنب التلوث بعدم لمس جزء من الأغطية المناسب في الأنابيب. إذا كانت الأغطية قريبة جدا من بعضها البعض، فقسم الأنابيب إلى رفين لتسهيل التعامل معها.
8. تناسب العقيمة 200 μL تلميح أصفر على مدخل صمام الحوض من الطامح محلية الصنع تحت غطاء محرك السيارة تدفق صفح والتبديل على المضخة.
9. أدخل الطرف الأصفر فوق مستوى البذور لتجنب لمس البذور عند مص السائل. بدلا من ذلك، بسرعة وضع طرف في الجزء السفلي من الأنبوب. إذا كانت البذور كتل شفط السائل، والقضاء على طرف أصفر وإدراج واحدة جديدة.
10. Aliquot في كل أنبوب حوالي 1000 ميكرولتر من 5٪ التبييض باستخدام ماصة المصلية العقيمة 10 مل داخل غطاء محرك السيارة تدفق صفح.
11. أغلق جميع الأغطية بإحكام وضع جميع الأنابيب مرة أخرى في محولات شاكر. هز الأنابيب على تردد التذبذب من 8.0 هرتز لمدة 3 دقائق على الأقل في شاكر.
12. تدور بسرعة أسفل البذور باستخدام وظيفة نبض الطرد المركزي benchtop للوقت اللازم للوصول إلى 1880 × ز (~ 15 ق).
13. تناسب العقيمة الجديدة 200 μL تلميح أصفر على صمام الحوض متصلة مضخة فراغ تحت غطاء محرك السيارة تدفق صفح، والتبديل على المضخة.
14. أدخل الطرف الأصفر فوق مستوى البذور لتجنب لمس البذور عند مص محلول التبييض.
15. Aliquot في كل أنبوب حول 1000 ميكرولتر من تعقيم H₂O باستخدام ماصة المصلية المعقمة 10 مل في غطاء محرك السيارة تدفق صفح.
    ملاحظة: ضم دفعتين من البذور لتقليل وقت العملية.
16. تناسب جديدة عقيمة 200 ميكرولتر تلميح أصفر على صمام الحوض متصلة مضخة فراغ تحت غطاء محرك السيارة تدفق صفح والتبديل على المضخة.
17. إدراج طرف أصفر فقط فوق مستوى البذور لتجنب لمس البذور عند مص H₂O.
18. Aliquot في كل أنبوب حول 500 ميكرولتر من تعقيم H₂O باستخدام ماصة المصلية المعقمة 10 مل وإغلاق جميع الأغطية في غطاء محرك السيارة تدفق صفح. البذور جاهزة للنواة. إذا لزم الأمر، والحفاظ على أنابيب في درجة حرارة الغرفة لبضع ساعات كحد أقصى أو في 4 درجة مئوية بين عشية وضحاها.
19. ملء زجاجة الخزان المستخدمة لجمع السائل مع كمية كافية من المياه وautclave ذلك. بعد ذلك، تجاهل السائل في بالوعة عادية.
    ملاحظة: أوتوكلاف السائل لقتل جميع البذور داخل الخزان.

الشكل 2:نظرة عامة على الإجراء والحد الأدنى من الوقت اللازم للتعقيم السطحي لبذور Arabidopsis مع 96 عينات مستقلة. وفي التجربة المقدمة، تعالج 96 عينة مستقلة على دفعتين متساويتي الحجم. الإجراء بأكمله هو نفسه لكلا الدفعتين، وتتم معالجتها بالتوازي، ولكن تتم معالجة الدفعة الثانية مع تأخير خطوة واحدة مقارنة بالدفعة الأولى. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

4. الطلاء وتسجيل Arabidopsis على لوحات MS 1/2

1. نقل البذور و300-400 ميكرولتر من H₂O المعقمة في طبق بيتري عن طريق الأنابيب لطيف مع ماصة 1000 ميكرولتر.
2. بعد نقل 10 أنابيب، تصب في كل لوحة حول 1.5-2.0 مل من المتوسطة 1/2 MS الذائبة دون المضادات الحيوية.
   ملاحظة: تذوب مقدما ثم تبقى 1/2 MS ذاب المتوسطة في حمام الحرارة تعيين في 50-53 درجة مئوية لتجنب التجسيد. تأكد من أن درجة الحرارة لا تتجاوز 58 درجة مئوية لتجنب تقليل قابلية البذور للانبات.
3. دوامة بسرعة لوحة لتوزيع البذور داخله. الشريط لوحات على طرفي نقيض.
4. لف الأطباق في رقائق بلاستيكية أو الألومنيوم ثم وضعها في الثلاجة (4 درجة مئوية) لمدة 3 أيام في الظلام للحصول على الإنبات موحدة.
5. نقل لوحات في غرفة النمو المحددة في 23 درجة مئوية في ظل ظروف اليوم الطويل (16 ساعة ضوء / 8 ساعة الظلام) مع كثافة الضوء من 100-120 ميكرومول ·م^-2· ق^-1 و 60٪ الرطوبة النسبية.
6. بعد يومين، يسجل النباتات من خلال وجود الشقوق. الكشف عن ظهور شعاعي وتشكيل كوتيليدون الخضراء (فتح كامل من اثنين من cotyledons) لتقييم إنبات البذور.

5. التحليلات الإحصائية

ملاحظة: هنا، تم استخدام اختبار توكي الثنائي للتحليلات الإحصائية.

1. النظر في القيم P أقل من 0.01 كما ذات دلالة إحصائية. إجراء جميع التجارب على الأقل مع خمس نسخ بيولوجية.

من أجل تقييم الوقت اللازم لإجراء تعقيم البذور بأكمله ، تم حساب الاختلافات الزمنية للتعامل مع السائل 96 عينة في البروتوكول الحالي ومقارنتها مع طرق الأنابيب التقليدية. وتشير النتيجة إلى أن البروتوكول الحالي يوفر الوقت، مما يقلل من وقت المناولة السائلة إلى ربع ذلك مع البروتوكولات التقليدية(الجدول 1). ويسلط الجدول الضوء كذلك على أن وقت إزالة السائل في البروتوكول الحالي يوفر وقتا أطول من الوقت الذي توفره الأساليب التقليدية، مع تخفيض إجمالي قدره ثمانية أضعاف.

اختيار النطاق الزمني لتعقيم البذور
خطوات التعقيم أطول تقليل معدلات التلوث ولكن يمكن أن تؤثر سلبا على إنبات البذور. لتحديد أفضل نطاق زمني لتعقيم البذور مع أعلى معدلات الإنبات دون تلوث، تم اختبار فترات مختلفة من كل خطوة تعقيم، وتقييم كل من إنبات البذور ومعدلات ظهور كوتيلون الخضراء. لم تشر تحليلات الإنبات التي أجريت من اليوم الثاني إلى اليوم الرابع وفي اليوم السابع إلى عدم وجود اختلافات كبيرة بين النطاق الزمني من 10 دقائق إلى 40 دقيقة من تعقيم الإيثانول بنسبة 70٪. ومع ذلك ، من 40 دقيقة من العلاج مع الإيثانول 70 ٪ ، انخفضت معدلات الإنبات(الشكل 3). وفي المقابل، انخفضت معدلات ظهور الكوتيليدون الأخضر(الشكل 4). وبما أن فترات التعقيم الأقصر يمكن أن تزيد من الإنتاجية ولكنها تزيد من معدلات التلوث، فقد تم تقييم الحد الأدنى من الوقت اللازم لتعقيم 96 عينة بذور مختلفة على دفعتين من 48 عينة. بالإضافة إلى ذلك ، نظرا للإعداد المفضل مع الهز الذي يتم إجراؤه في شاكر ، اختبرنا الحد الأدنى من الوقت اللازم لتعقيم البذور من خلال التعامل مع 96 عينة على دفعتين من 48 عينة لكل منهما. وكان الحد الأدنى من الوقت اللازم لمعالجة 48 عينة في وقت واحد 3 دقائق، مما يسمح بمعالجة المجموعة الثانية من 48 عينة مباشرة بعد المجموعة الأولى دون أي وقت للانتظار. وهكذا، تم تطبيق 3 دقائق ل70٪ الإيثانول و 3 دقائق لمدة 5٪ التبييض والحد الأدنى من الوقت لتعقيم البذور (نقطة (أ) في الشكل 3). وأسفرت هذه التحليلات عن معدلات إنبات مماثلة لأعلى المعدلات دون تلوث وفقدان حيوية البذور(الشكل 3).

وباختصار، فإن النطاقات الزمنية المناسبة للحفاظ على أعلى نسبة من إنبات البذور دون تلوث المستمدة من القضاء الكافي على الكائنات الحية الدقيقة بين 3-30 دقيقة ل70٪ الإيثانول وبين 3-22.5 دقيقة لتبييض 5٪.

من أجل إثبات أن البذور التي استخدمناها في الأصل كانت ملوثة بالكائنات الحية الدقيقة ، تم زرع البذور غير المعقمة مباشرة على لوحات MS. ظهرت الفطريات على لوحات بعد زرع لمدة يومين وتنتشر في جميع أنحاء لوحات بعد سبعة أيام الإنبات (الشكل التكميلي 1).

تقييم التلوث المتبادل بين الأنماط الجينية المختلفة للبذور
للتحقق مما إذا كان استخدام طرف ماصة معقم واحد لمعالجة عينات البذور المختلفة يمكن أن يؤدي إلى تلوث متقاطع وتقييم كمية مثل هذا التلوث المتبادل ، تم تناوب نوعين جينيين مختلفين من البذور (Col-0 البرية ، حساسة للكاناميسين ، وخط أرابيدوسيس المعدل وراثيا AdoIspS-79 ، المقاوم للكاناميسين24)أثناء إجراء التعقيم. بعد تعقيم البذور القياسية، زرعت في لوحات صلبة MS نصف قوة تكمل دون أو مع 50 ملغ / ل كاناميسين. وقد تكررت التجارب خمس مرات. وأشارت هذه التحليلات إلى أن حوالي 96٪ من البذور التي نبتت في لوحات MS التي تحتوي على كاناميسين، ولكن لم يتم رصد أي كوتيليدوناتخضراء في اليوم السابع من الإنبات في أي لوحات زرعت مع النمط الجيني كول-0(الشكل 5). وبالتوازي مع ذلك، أظهرت بذور Col-0 المزروعة في لوحات MS حوالي 94٪ من الإنبات، وكانت جميع ال كوتيلودون خضراء بعد الإنبات لمدة 7 أيام. تشير هذه النتائج إلى عدم ترحيل التلوث بين العينات على الرغم من استخدام طرف ماصة واحد لإزالة المحلول العقيم.

الشكل 3: نسبةإنبات البذور بعد 2-, 3-, 4- و 7 أيام بذور Arabidopsis البذر مع أوقات التعقيم المختلفة المشار إليها بأحرف مختلفة. أ: 3 دقائق من الإيثانول 70٪ و 3 دقائق من 5٪ التبييض، ب: 10 دقيقة من الإيثانول 70٪ و 7.5 دقيقة من 5٪ تبييض، ج: 20 دقيقة من الإيثانول 70٪ و 15 دقيقة من 5٪ التبييض، د: 30 دقيقة من الإيثانول 70٪ و 22.5 دقيقة من 5٪ التبييض، ه: 40 دقيقة من الإيثانول 70٪ و 30 دقيقة من 5٪ التبييض، و: 50 دقيقة من الإيثانول 70٪ و 37.5 دقيقة من 5٪ التبييض، ز: 70 دقيقة من الإيثانول 70٪ و 52.5 دقيقة من 5٪ التبييض. يشير نجمان إلى اختلافات كبيرة وفقا لاختبار توكي الثنائي (p < 0.01). يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 4: نسبة كوتيلون الخضراء بعد 7 أيام بذور Arabidopsis البذر مع أوقات التعقيم المختلفة المشار إليها مع رسائل مختلفة. أ: 3 دقائق من الإيثانول 70٪ و 3 دقائق من 5٪ التبييض، ب: 10 دقيقة من الإيثانول 70٪ و 7.5 دقيقة من 5٪ تبييض، ج: 20 دقيقة من الإيثانول 70٪ و 15 دقيقة من 5٪ التبييض، د: 30 دقيقة من الإيثانول 70٪ و 22.5 دقيقة من 5٪ التبييض، ه: 40 دقيقة من الإيثانول 70٪ و 30 دقيقة من 5٪ التبييض، و: 50 دقيقة من الإيثانول 70٪ و 37.5 دقيقة من 5٪ التبييض، ز: 70 دقيقة من الإيثانول 70٪ و 52.5 دقيقة من 5٪ التبييض. يشير نجمان إلى اختلافات كبيرة وفقا لاختبار توكي الثنائي (p < 0.01). يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 5:المقايسة عبر التلوث بين كول-0 البرية من نوع وبذور AdoIspS-79. كول-0 الإنبات في لوحات MS نصف قوة (يسار)، كول-0 في لوحة MS نصف قوة تكملها مع 50 ملغ / ل كاناميسين (وسط) و AdoIspS-79 في لوحة MS نصف قوة تكملها مع 50 ملغ / ل كاناميسين (يمين)، scalebar = 1 سم. تظهر في الشكل صورة تمثيلية لأحد النسخ المتماثلة الخمس. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الجدول 1: موجز عن الحد الأدنى من الوقت اللازم للتعامل مع السوائل أثناء تعقيم 96 عينة من عينات البذور. يسرد الجدول الوقت الإجمالي (دقيقة) المطلوبة لإضافة وإزالة السائل في جميع أنحاء الخطوات الرئيسية للتعقيم سطح البذور باستخدام البروتوكول الحالي وبروتوكول حيث يتم استخدام pipetting التقليدية.

الشكل التكميلي 1: الكشف عن التلوث بعد زرع بذور أرابيدوسيس لمدة 7 أيام. تظهر الصورة درجة تلوث البذور غير المعقمة (المشطفة بالماء؛ إلى اليسار) والبذور العقيمة (التي تخضع للتعقيم السطحي كما هو موضح في النص الرئيسي؛ إلى اليمين). Scalebar = 1 سم. الرجاء الضغط هنا لتحميل هذا الملف.

جميع المؤلفين لا يعلنون عن أي تضارب في المصالح.