Method Article

طريقة عالية الإنتاجية وقوية ومرنة للغاية للوقت للتعقيم السطحي لبذور Arabidopsis

DOI:

10.3791/62893

⸱

October 4th, 2021

 ,  ,  , 
1Department of Biodiversity and Molecular Ecology, Research and Innovation Centre, Fondazione Edmund Mach

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يتم توفير بروتوكول عالي الإنتاجية للتعقيم السطحي لبذور Arabidopsisthaliana (Arabidopsis) ، وتحسين خطوات التعامل مع السائل باستخدام جهاز شفط بسيط تم بناؤه بمضخة فراغ. يمكن تعقيم مئات عينات البذور في يوم واحد.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أربيدوبسيس هو إلى حد بعيد الأنواع نموذج النبات الأكثر استخداما على نطاق واسع للدراسات الوظيفية. التعقيم السطحي لبذور أربيدوبسيس هو خطوة أساسية مطلوبة لتحقيق هذه الغاية. وبالتالي، من الأهمية بمكان إنشاء طرق عالية الإنتاجية لتعقيم سطح بذور أربيدوبسيس للتعامل مع عشرات إلى مئات العينات (على سبيل المثال، الخطوط المعدلة وراثيا، أو الأنماط الإيكولوجية، أو المسوخ) في وقت واحد. يتم تقديم طريقة التعقيم السطحي للبذور على أساس القضاء الفعال على السائل في الأنابيب مع جهاز شفط محلي الصنع تم بناؤه من مضخة فراغ مشتركة في هذه الدراسة. من خلال الحد بشكل كبير من العمل الكثيف التدريب العملي على الوقت مع هذه الطريقة التعامل مع عدة مئات من العينات في يوم واحد ممكن مع القليل من الجهد. كما أشارت تحليلات الدورة الزمنية السلسلية إلى نطاق زمني مرن للغاية للتعقيم السطحي من خلال الحفاظ على معدلات إنبات عالية. يمكن تكييف هذه الطريقة بسهولة للتعقيم السطحي لأنواع أخرى من البذور الصغيرة مع تخصيص بسيط لجهاز الشفط وفقا لحجم البذور ، والسرعة المطلوبة للقضاء على السائل.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أربيدوبسيس هو نوع نباتي ثنائي الفصي ينتمي إلى عائلة براسيكاي. دورة حياتها قصيرة نسبيا (شهرين لكل جيل في ظل ظروف النمو ليوم طويل)، وحجم النبات الصغير، والتلقيح الذاتي مع إنتاج مئات البذور لكل نبات جعلت من أول نوع نموذج نباتي أساسي1،2. وبالإضافة إلى ذلك، كان تسلسل الجينوم لها تماما3،واسعة أدوات علم الوراثة العكسي (المشبعة T-DNA، transposon، والسكان المعدلة كيميائيا) متوفرة4،5،6، وفعالة Agrobacterium-بوساطة التحول راسخة للحصول على خطوط معدلة وراثيا كافية لمزيد من العمل المصب

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. الكواشف وإعداد وسائل الإعلام

  1. إعداد محلول الإيثانول بنسبة 70٪: أضف 737 مل من الإيثانول التقني بنسبة 95٪ إلى 263 مل من الماء المقطر. تخلط جيدا.
    ملاحظة: إعداد محلول الإيثانول 70٪ على مقاعد البدلاء العمل غير عقيمة.
    تنبيه: الإيثانول شديد الاشتعال ويمكن أن يسبب تهيجا خطيرا في العينين. الابتعاد عن النيران ومصادر الحرارة. في حالة ملامسة العينين، اشطفي بالماء الوفير.
  2. إعداد محلول التبييض بنسبة 5٪: أضف 5 مل من التبييض المنزلي (يحتوي على ~ 3.5٪ من هيبوكلوريت الصوديوم، NaClO) إلى 95 مل من الماء المقطر العقيم. أضف بضع قطرات من المنظفات غير الأيونية (على سبيل المثال، توين 20) واخلطها جيدا.
    ملاحظة: إعداد محلول التبييض 5٪ داخل غطاء محرك السيارة صفح.
    ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

من أجل تقييم الوقت اللازم لإجراء تعقيم البذور بأكمله ، تم حساب الاختلافات الزمنية للتعامل مع السائل 96 عينة في البروتوكول الحالي ومقارنتها مع طرق الأنابيب التقليدية. وتشير النتيجة إلى أن البروتوكول الحالي يوفر الوقت، مما يقلل من وقت المناولة السائلة إلى ربع ذلك مع البروتوكولات التقليدية(الجدول 1). ويسلط الجدول الضوء كذلك على أن وقت إزالة السائل في البروتوكول الحالي يوفر وقتا أطول من الوقت الذي توفره الأساليب التقليدية، مع تخفيض إجمالي قدره ثمانية أضعاف.

اختيار النطاق ا.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تعقيم البذور هو الخطوة الأساسية للدراسات الوظيفية في Arabidopsis. على الرغم من أنه كثيرا ما يتم تنفيذها لأغراض مختلفة كثيرة، تتوفر دراسات محدودة على التعقيم السطحي للبذور عالية الإنتاجية في Arabidopsis.

حتى الآن، واحدة من الطرق ذات الإنتاجية العالية هي استخدام غاز الكلور الناتج عن خلط التبييض مع HCl المركزة. على الرغم من أن هذه الطريقة تتطلب التدريب العملي محدودة على الوقت، فإنه يستخدم غاز شديد السمية للبشر27. وبالإضافة إلى ذلك، يجب أن يتم التحكم بعناية في عدد البذور ال.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

جميع المؤلفين لا يعلنون عن أي تضارب في المصالح.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تمويل هذا البحث من قبل مقاطعة ترينتو المستقلة من خلال التمويل الأساسي لمجموعة الاقتصاد البيئي التابعة لمنظمة فوندازيون ماخ.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
طقم B074CYC5SD صمام حوضالسمك بمافي ذلك 2 صمامات وأنابيب رقيقة الجدران. يمنع الصمام السوائل من العودة إلى الطرف المعقم
أرابيدوبسيس كول-0 بذور من النوع البرينوتنغهام أرابيدوبسيسمركز مخزون N1093بذور من النوع البري (حساسة للكاناميسين) خط
نبات الأرابيدوبسيس المعدل وراثيا بذور AdoIspS-79NANAخط معدل وراثيا يفرط في التعبير عن جين سينسيز الأيزوبرين من Arundo donax الذي تحول في خلفية Col-0 ، مقاوم للكاناميسين (Li et al. (2017) Mol. Biol. Evol. ، 34 ، 2583 &ndash ؛ 2599). متاح بناء على طلب من المؤلفين
الطرد المركزي الدقيقEppendorfEP022628188الطرد المركزي الدقيقة Benchtop المستخدمة في غزل البذور
Murashige & وسط Skoog بما في ذلك الفيتاميناتDuchefaM0222وسيط قياسي لثقافة النبات معقمة
وحدة تحكم الماصةالعلامة التجارية26300تستخدم لتشغيل الماصة المصلية
أنبوب البولي إيثيلين 1Roth9591.1أنبوب للتوصيل من مضخة التفريغ إلى زجاجة الصب (القطر الداخلي: 7 مم ؛ القطر الخارجي: 9 مم)
أنبوب البولي إيثيلين 2Roth9587.1أنبوب للاتصال من زجاجة الصب إلى صمام حوض السمك   ؛ (القطر الداخلي: 5 مم ؛ القطر الخارجي: 7 مم)
غطاء لولبي مع موصلاتRothPY86.1غطاء لولبي موزع ثنائي الاتجاه GL45 في مادة البولي بروبيلين لصب الزجاجة
ماصة مصليةالعلامة التجارية27823ماصة مصلية زجاجية متدرجة (قابلة لإعادة الاستخدام). يمكن استخدام الماصات التي تستخدم لمرة واحدة بدلا من
Shakeret al.Qiagen85300TissueLyser II تستخدم عادة لتجانس الأنسجة. بدون إضافة الخرز إلى الأنابيب ، فإنه يعمل كشاكر.
التقنية للإيثانولITW (Nova Chimica Srl)212800الإيثانول 96٪ v / v مشوه جزئيا من الدرجة التقنية
Tween 20Merck Millipore655205منظف غير أيوني يعمل كخافض للتوتر السطحي
موصلات أنابيب عالميةRothY523.1يمكن استخدامها لتحسين / تبسيط اتصالات الأنابيب
مضخة تفريغMerck MilliporeWP6222050المستخدمة ل صنع جهاز الشفط
بذور جهاز أجهزة مطحنة حبة الكواشف

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Somerville, C., Koornneef, M. A fortunate choice: The history of Arabidopsis as a model plant. Nature Reviews Genetics. 3 (11), 883-889 (2002).
  2. Koornneef, M., Meinke, D. The development of Arabidopsis as a model plant. Plant Journal. 61 (6), 909-921 (2010).
    3. ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Arabidopsis Seed SterilizationSurface SterilizationHigh Throughput MethodFunctional GenomicsSeed GerminationLaminar Flow HoodBleach TreatmentEthanol SterilizationVacuum Pump AspiratorMurashige Skoog Medium

Related Articles