يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

حقن الساركوما العظمية داخل الظنبوب لتوليد الساركوما العظمية العظمية ونماذج الفئران الخبيثة الرئوية

11.2K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/63072

⸱

أكتوبر 28, 2021

 ,  ,  ,  ,  , 
1Longhua Hospital, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 2Key Laboratory of theory and therapy of muscles and bones, Ministry of Education

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

يصف البروتوكول الحالي حقن الساركوما العظمية داخل الظنبوب لتوليد نماذج الفئران التي تحمل الساركوما العظمية العظمية وآفات الانبثاث الرئوي.

الملخص

الساركوما العظمية هي سرطان العظام الأولي الأكثر شيوعا لدى الأطفال والمراهقين، مع الرئتين باعتبارها الموقع النقيلي الأكثر شيوعا. معدل البقاء على قيد الحياة لمدة خمس سنوات لمرضى الساركوما العظمية الذين يعانون من ورم خبيث رئوي أقل من 30٪. لذلك ، فإن استخدام نماذج الفئران التي تحاكي تطور الساركوما العظمية في البشر له أهمية كبيرة لفهم الآلية الأساسية لسرطان الساركوما العظمية والانبثاث الرئوي لتطوير علاجات جديدة. هنا ، يتم الإبلاغ عن إجراءات مفصلة لتوليد نماذج الساركوما العظمية الأولية والفئران الخبيثة الرئوية عن طريق الحقن داخل الظنبوب لخلايا الساركوما العظمية. جنبا إلى جنب مع التلألؤ الحيوي أو نظام التصوير الحي بالأشعة السينية ، يتم استخدام نماذج الفئران الحية هذه لمراقبة وقياس نمو الساركوما العظمية والانبثاث. لإنشاء هذا النموذج ، تم تحميل مصفوفة غشاء سفلي تحتوي على خلايا الساركوما العظمية في حقنة صغيرة الحجم وحقنها في ساق واحد من كل فأر أثيميك بعد تخديرها. تم التضحية بالفئران عندما وصلت الساركوما العظمية الأولية إلى الحد الأقصى للحجم في البروتوكول المعتمد من IACUC. تم فصل الساقين اللتين تحملان الساركوما العظمية والرئتين المصابتين بآفات الانبثاث. تتميز هذه النماذج بفترة حضانة قصيرة ، ونمو سريع ، وآفات حادة ، وحساسية في مراقبة تطور الآفات النقيلية الأولية والرئوية. لذلك ، هذه نماذج مثالية لاستكشاف وظائف وآليات عوامل محددة في تسرطن الساركوما العظمية والانبثاث الرئوي ، والبيئة الدقيقة للورم ، وتقييم الفعالية العلاجية في الجسم الحي.

المقدمة

الساركوما العظمية هي سرطان العظام الأولي الأكثر شيوعا لدى الأطفال والمراهقين 1,2 ، والذي يتسلل بشكل رئيسي إلى الأنسجة المحيطة ، وحتى ينتقل إلى الرئتين عند تشخيص المرضى. الانبثاث الرئوي هو التحدي الرئيسي لعلاج الساركوما العظمية ، ومعدل البقاء على قيد الحياة لمدة خمس سنوات لمرضى الساركوما العظمية الذين يعانون من ورم خبيث رئوي لا يزال منخفضا يصل إلى 20٪ -30٪ 3،4،5. ومع ذلك ، فقد زاد معدل البقاء على قيد الحياة لمدة خمس سنوات من الساركوما العظمية الأولية إلى حوالي 70 ٪ منذ 1970s بسبب إدخال العلاج الكيميائي6. لذلك ، هناك حاجة ماسة لفهم الآلية الأساسية لسرطان الساركوما العظمية والانبثاث الرئوي لتطوير علاجات جديدة. تطبيق نماذج الفئران التي تحاكي أفضل تطور الساركوما العظمية في البشر له أهمية كبيرة7.

يتم إنشاء النماذج الحيوانية للساركوما العظمية عن طريق الهندسة الوراثية التلقائية المستحثة ، والزرع ، وغيرها من التقنيات. نادرا ما يستخدم نموذج الساركوما العظمية التلقائي بسبب وقت تكوين الورم الطويل ، ومعدل حدوث الورم غير المتناسق ، وانخفاض المراضة ، وضعف الاستقرار 8,9. على الرغم من أن نموذج الساركوما العظمية المستحثة يمكن الحصول عليه أكثر سهولة من الساركوما العظمية التلقائية ، إلا أن تطبيق نموذج الساركوما العظمية المستحثة محدود لأن العامل المحث سيؤثر على البيئة الدقيقة ، والتسبب في الأمراض ، والخصائص المرضية للساركوما العظمية10. تساعد النماذج المعدلة وراثيا على فهم التسبب في السرطانات لأنها يمكن أن تحاكي بشكل أفضل البيئات الفسيولوجية والمرضية البشرية. ومع ذلك ، فإن النماذج الحيوانية المعدلة وراثيا لها أيضا حدودها بسبب صعوبة التعديل المعدل وراثيا على المدى الطويل والتكلفة العالية. علاوة على ذلك ، حتى في النماذج الحيوانية المعدلة وراثيا الأكثر قبولا على نطاق واسع الناتجة عن تعديل الجينات p53 و Rb ، حدث 13.6٪ فقط من الساركوما في عظام الأطراف الأربعة11,12.

زرع هي واحدة من أكثر الطرق شيوعا لإنتاج نموذج السرطان النقيلي الأولي والبعيد في السنوات الأخيرة بسبب المناورة البسيطة ، ومعدل تكوين الورم المستقر ، والتجانس الأفضل13. يشمل الزرع زراعة غير متجانسة وزرع العظام وفقا لمواقع الزرع. في زرع الساركوما العظمية غير المتجانسة، يتم حقن خلايا الساركوما العظمية خارج مواقع الساركوما العظمية الأولية (العظام) للحيوانات، عادة تحت الجلد، تحت الجلد14. على الرغم من أن عملية زرع الساركوما غير المتجانسة واضحة دون الحاجة إلى إجراء عملية جراحية في الحيوانات ، إلا أن المواقع التي يتم فيها حقن خلايا الساركوما العظمية لا تمثل البيئة الدقيقة الفعلية للساركوما العظمية البشرية. زرع الساركوما العظمية هو عندما يتم حقن خلايا الساركوما العظمية في عظام الحيوانات، مثل الساق15،16. بالمقارنة مع الطعوم غير المتجانسة ، تتميز الطعوم العظمية العظمية بفترة حضانة قصيرة ، ونمو سريع ، وطبيعة تآكل قوية. لذلك ، فهي نماذج حيوانية مثالية للدراسات المتعلقة بالساركوما العظمية17.

الحيوانات الأكثر استخداما هي الفئران والكلاب وأسماك الزرد18,19. عادة ما يستخدم النموذج التلقائي للساركوما العظمية في الأنياب لأن الساركوما العظمية هي واحدة من أكثر الأورام شيوعا في الأنياب. ومع ذلك ، فإن تطبيق هذا النموذج محدود بسبب وقت تكوين الورم الطويل ، وانخفاض معدل تكوين الورم ، وضعف التجانس ، والاستقرار. غالبا ما تستخدم أسماك الزرد لبناء نماذج الورم المعدلة وراثيا أو بالضربة القاضية بسبب تكاثرها السريع20. لكن جينات الزرد تختلف عن الجينات البشرية ، لذلك فإن تطبيقاتها محدودة.

يصف هذا العمل الإجراءات التفصيلية والاحتياطات والصور التمثيلية لإنتاج الساركوما العظمية الأولية في الساق مع ورم خبيث رئوي عن طريق الحقن داخل الساق لخلايا الساركوما العظمية في الفئران الأثيمية. تم تطبيق هذه الطريقة لإنشاء الساركوما العظمية الأولية في ساق الفئران لتقييم الفعالية العلاجية ، والتي أظهرت قابلية عالية للتكاثر21,22.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة على جميع التجارب على الحيوانات من قبل لجنة رعاية الحيوان بجامعة شنغهاي للطب الصيني التقليدي. تأقلمت الفئران الأثيمية الذكور BALB / c البالغة من العمر أربعة أسابيع لمدة أسبوع قبل الجراحة للحقن التقويمي لخلايا الساركوما العظمية. تم إيواء الفئران في أقفاص الفئران ذات التهوية الفردية مع خمسة فئران لكل قفص في دورة ضوئية / مظلمة مدتها 12 ساعة مع إمكانية الوصول إلى تغذية SPF والمياه المعقمة.

1. إعداد الخلايا

  1. في يوم حقن الخلايا العظمية الساركوما (143B-Luciferase) ، اغسل 80٪ -90٪ من الخلايا المتقاربة المزروعة في طبق زراعة خلايا 10 سم مرتين باستخدام PBS (الرقم الهيدروجيني 7.4) والتريبسينيز مع 1.5 مل من 0.25٪ من التربسين لمدة 3 دقائق. ثم ، أضف 6 مل من وسائط MEM المحتوية على مصل بنسبة 10٪ لإخماد التربسين ، وجمع الخلايا في أنبوب طرد مركزي 15 مل.
    ملاحظة: يتم الحصول على خط خلية 143B-Luciferase من خط الخلية 143B transfect مع متجه pLV-luciferase23.
  2. استنشاق 20 ميكرولتر من تعليق الخلية إلى غرفة لوحة عد الخلايا وحساب تركيز الخلية باستخدام عداد خلية تلقائي (انظر جدول المواد).
  3. الطرد المركزي للخلايا في 800 × غرام لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
  4. استنشاق السوبرناتانت باستخدام ماصة وأعد تعليق حبيبات الخلية في مصفوفة غشاء سفلي 8.5 ملغم / مل (انظر جدول المواد) إلى تركيز نهائي قدره 2 × 107 خلايا / مل.
  5. الحفاظ على الخلايا على الجليد ، وإحضارها إلى غرفة الجراحة. يجب استخدام الخلايا في غضون 2 ساعة.
    ملاحظة: لتجنب جرعات الحقن غير الدقيقة (على سبيل المثال ، بسبب المساحة الميتة في المحاقن) ، يتم إعداد تعليق خلوي إضافي (عادة ما يكون ضعف الحجم المطلوب لتعليق الخلية). يتم الاحتفاظ بمصفوفة الغشاء السفلي على الجليد طوال الوقت لأنها تحتوي على خاصية التخثر فوق درجة حرارة الغرفة24.

2. جراحة الحقن التقويمي لخلايا الساركوما العظمية

ملاحظة: يتم عرض أدوات الجراحة في الشكل 1.

  1. تم تربية الفئران في ظروف محددة خالية من مسببات الأمراض. تم تنفيذ جميع الإجراءات في خزانة معقمة بأدوات معقمة.
  2. تخدير الفئران عن طريق تعريضها ل 2٪ من الإيسوفلوران و 98٪ من الأكسجين (معدل تدفق الأكسجين ، 2 لتر / دقيقة).
  3. ضع كمية صغيرة من مرهم العيون على العينين لمنع الجفاف أثناء التخدير.
    ملاحظة: نفذ الإجراء بأكمله في منطقة جيدة التهوية. قبل حقن خلايا الساركوما العظمية ، تأكد من أن كل فأر يخضع للتخدير العميق بواسطة قرصة إصبع القدم ؛ إذا كان الماوس لا يزال لديه استجابات ، مثل الارتعاش أو الرعشة ، فانتظر لفترة طويلة حتى تختفي الاستجابات المذكورة أعلاه.
  4. حافظ على كل ماوس في وضع ضعيف. امسك كاحل الماوس باستخدام الإبهام والسبابة وقم بتطهير موقع حقن الساق باستخدام مسحة إيثانول بنسبة 70٪.
    ملاحظة: لتثبيت كاحل الماوس بإحكام، فإن كلا من أطراف أصابع الإبهام والسبابة لهما أهمية كبيرة للإجراءات اللاحقة.
  5. قم بتدوير مفصل الكاحل لكل ماوس إلى الخارج لتحريك الساق والشظية ، وثني مفصل الركبة إلى وضع مناسب حتى تكون هضبة الساق القريبة (الجزء العلوي من الساق) مرئية بوضوح من خلال الجلد (الشكل 2A).
  6. قم بتوصيل الإبرة بحقنة 1 مل ووجه طرف الإبرة نحو موقع الحقن. تأكد من أن إبرة المحقنة موازية للمحور الطويل للساق.
    1. أدخل الإبرة عن طريق الجلد من خلال الرباط الرضفي أو المجاور له أثناء مروره عبر كبسولة الجلد / المفصل ؛ th0en ، قم بتدوير المحقنة (1/2 إلى 3/4-دائرة) لحفر ثقب من خلال منصة الساق نحو الطرف البعيد من الساق (التجويف النخاعي) لحقن خلية الساركوما العظمية باستخدام حقنة صغيرة الحجم (الشكل 2B ، C).
      ملاحظة: يمكن الشعور بالدوران المتزامن للساق أثناء الحفر إذا كان طرف الإبرة دقيقا. تأكد من أن الإبر تتحرك إلى الأمام مع دوران المحقنة بدلا من دفعها مباشرة إلى الأمام حتى يكون حوالي نصف الإبرة في الساق.
  7. تحقق مما إذا كانت إبرة المحقنة قد قامت بحركة بارزة في القناة النخاعية لضمان نجاح الحفر.
    ملاحظة: قم بإجراء فحص بالأشعة السينية (انظر جدول المواد) للتأكد من الموضع المناسب للإبرة وجمع الصور.
  8. قم بتحميل تعليق خلية الساركوما العظمية 143B (من الخطوة 1.5) في حقنة صغيرة الحجم واستبدل حقنة 1 مل في الساق بحقنة صغيرة الحجم محملة بالخلايا 143B (الشكل 2D). حقن ببطء ~ 10 ميكرولتر (تجاهل الحل الموجود مسبقا في الإبرة) من تعليق الخلايا 143B في الساق كل ماوس أثيميك (حوالي 2 × 105 خلايا) دون تطبيق ضغط عال.
  9. اضغط على موقع الحقن بقطعة قطن لمدة 20-30 ثانية عند إزالة المحقنة صغيرة الحجم.
  10. ضع كل ماوس مرة أخرى في قفص نظيف وراقب عن كثب حتى يتم استرداد الماوس تماما من التخدير (حوالي 10 دقائق).
  11. راقب نمو الورم في الجسم الحي باستخدام نظام التصوير بالأشعة السينية. قم بقياس القطر الأطول (a) والقطر القصير (b) لكتلة السرطان كل أسبوع باستخدام فرجار لحساب حجم الورم (V): V = 1/2 × a x b2.
    ملاحظة: تخدير الفئران عن طريق تعريضها ل 2٪ من الأيزوفلوران و 98٪ من الأكسجين. تم تخدير الفئران للتصوير بالأشعة السينية. يتيح حقن داخل الظنبوب من لوسيفيراز أو بروتين الفلورسنت المسمى خلايا الساركوما العظمية تتبع آفات الساركوما العظمية الأولية والنقيلية.
    ملاحظة: استندت نقاط النهاية الإنسانية للفئران المصابة بالساركوما العظمية بسبب نمو الورم في الركبة وورم خبيث في الرئة إلى المعايير التالية: (1) درجة حالة الجسم ، (2) عتبة فقدان الوزن بنسبة 20٪ ، (3) متوسط القطر الأقصى للأورام البالغ 2 سم ، أو (4) سلوك حيواني محدود للغاية.

3. الفحص المرضي (جمع عينة الساركوما العظمية النقيلية الأولية والرئوية للتحليل)

  1. بعد ستة أسابيع من حقن خلايا الساركوما العظمية ، ضحى بالفئران عن طريق خلع عنق الرحم بعد تعريضها لاستنشاق CO2 .
  2. حافظ على الماوس في وضع ضعيف وقم بتمديد كل من الأطراف الخلفية.
  3. افصل الساقين بالكامل اللتين تحملان الساركوما العظمية عن المنطقة الأربية.
    ملاحظة: تأكد من فصل جميع الأرجل عن نفس الموقع التشريحي.
  4. قم بإعداد العينة النسيجية للأرجل التي تحمل الساركوما العظمية عن طريق إزالة الجلد والعضلات والقدمين ، ثم قم بإصلاح عينة كل فأر في أنبوب 50 مل مع محلول الفورمالين 20 مل (10٪) لمدة 24 ساعة ، يليه إزالة الكلس في محلول EDTA بنسبة 10٪ لمدة 14 يوما مع تغيير المخزن المؤقت من حين لآخر.
  5. تضمين العينة في البارافين وإعداد أقسام للفحص النسيجي بعد العمل المنشور سابقا25.
  6. افصل الرئتين بلطف وضعهما في أنبوب سعة 50 مل مملوء بمحلول فورمالين سعة 20 مل (10٪). بعد 24 ساعة ، انقل رئتي كل فأر إلى أنبوب 15 مل مع 70٪ من الإيثانول. تضمين الرئتين في البارافين لتلطيخ الهيماتوكسيلين والإيوسين (H & E) والكيمياء النسيجية المناعية25.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تعتمد الساركوما العظمية الناجحة (الأولية) والنماذج الرئوية النقيلية على الحقن التقويمي الدقيق لخلايا الساركوما العظمية. هنا ، تم تطوير نموذج الساركوما العظمية (الأولية) عن طريق حقن خلايا الساركوما العظمية داخل الظنبوب بنجاح. يوضح الشكل 3A ساركوما عظمية تمثيلية تحمل الساركوما العظمية (الأولية)، ويبين الشكل 3B ساركوما عظمية معزولة (أولية) تمثيلية. تم قياس حجم الورم مرة واحدة في الأسبوع باستخدام الفرجار وحسابه كما هو موضح في الخطوة 2.11 (

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

الحقن التقويمي لخلايا الساركوما العظمية هو نموذج مثالي لدراسة وظيفة وآلية عوامل محددة في تسرطن الساركوما العظمية وتطويرها لتقييم الفعالية العلاجية. لتجنب الاختلافات في نمو الورم ، يتم حقن معظم خلايا الساركوما العظمية النشطة بنسبة 80٪ -90٪ تلتقي بنفس العدد بعناية في ساق كل فأر ، ويتم التحكم بدقة في وقت التربسين الخلوي دون التأثير على بقاء الخلية. نظرا لأن كتل الخلايا تؤثر على عد الخلايا مما يؤدي إلى حقن أعداد خلايا غير دقيقة في ساق كل فأر ، يجب خلط تعليق الخلية بشكل مناسب لأعلى ولأسفل مع ماصة لتجنب تكوين كتل الخلايا.

...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ويعلن صاحبا البلاغ أنه ليس لديهما مصالح مالية منافسة.

شكر وتقدير

تم دعم هذه الدراسة من خلال منح من (1) البرنامج الوطني الرئيسي للبحث والتطوير في الصين (2018YFC1704300 و 2020YFE0201600) ، (2) المؤسسة الوطنية لعلوم الطبيعة (81973877 و 82174408).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
عداد الخلايا الأوتوماتيكيةشنغهاي Simo Biological Technology Co.، LtdIC1000عد الخلايا
آلة التخديرشنتشن RWD Life Technology Co.، LtdR500IPمعدات الفئران التخدير
BALB / c الفئران الرياضيةشنغهاي SLAC مختبر المحدودة./
مصفوفة غشاء الطابقالحيوانية شنغهاي Uning Bioscience Technology Co.، Ltd356234 ، BD ، MatrigelRe-sopende الخلايا
التصوير BioluminescenceShanghai Baitai Technology Co.، LtdVieworksتتبع نمو الورم والورم الخبيث الرئوي ، إذا تم تصنيف خلية الحقن بواسطة أنبوب الطرد المركزي لوسيفيراز
(15 مل)شنغهاي YueNian التكنولوجيا الحيوية المحدودة  430790 ، جهاز الطرد المركزي Corningالخلايا
isofluraneShenzhen RWD Life Technology Co.، LtdVETEASYAnesthesia الفئران
MEM وسائل الإعلامشنغهاي YueNian التكنولوجيا الحيوية المحدودةLM-E1141زراعة الخلية المتوسطة
حقنة الحجم الصغيرشنغهاي عالية الحمام صناعة والتجارة المحدودة0-50 & Lحقن خلايا دقيقة في الظنبوب
محلول ملحي مخزن بالفوسفاتBeyotime BiotechnologyST447اغسل خلايا الساركوما العظمية البشرية
1 مل محاقنShandong Weigao Group Medical Polymer Co.، Ltd20200411حفر
خط خلية 143BATCCCRL-8303خلية الساركوما العظمية
Trypsin (0.25٪)Shanghai YueNian Biotechnology Co.، Ltd25200056 ، علاج التربسين جيبكوللخلايا
Trypan blueBeyotime BiotechnologyST798تلطيخ الخلايا لتقييم
ناقلات النشاط (pLV-luciferase)شنغهاي YueNian التكنولوجيا الحيوية المحدودةVL3613البلازميد
ليبوفيكتامين 2000شنغهاي YueNian التكنولوجيا الحيوية المحدودة11668027 ،كاشف
تمBrook (Beijing) Technology Co.، LtdFX PROللكشف عن نمو الورم
السفلي نظام خط التصوير بالأشعة السينية التعداء بلازميد ثيرمو فيشر الحصول على صور الأشعة السينية لنظام

المراجع

  1. Bielack, S. S., et al. Prognostic factors in high-grade osteosarcoma of the extremities or trunk: an analysis of 1,702 patients treated on neoadjuvant cooperative osteosarcoma study group protocols. Journal of Clinical Oncology. 20 (3), 776-790 (2002).
  2. Yang, C., et al. Bone microenvironment and osteosarcoma metastasis. International Journal of Molecular Sciences. 21 (19), (2020).
  3. Mirabello, L., Troisi, R. J., Savage, S. A. Osteosarcoma incidence and survival rates from 1973 to 2004: data from the Surveillance, Epidemiology, and End Results Program. Cancer. 115 (7), 1531-1543 (2009).
  4. Zhang, B., et al. The efficacy and safety comparison of first-line chemotherapeutic agents (high-dose methotrexate, doxorubicin, cisplatin, and ifosfamide) for osteosarcoma: a network meta-analysis. Journal of Orthopaedic Surgery and Research. 15 (1), 51(2020).
  5. Tsukamoto, S., Errani, C., Angelini, A., Mavrogenis, A. F. Current treatment considerations for osteosarcoma metastatic at presentation. Orthopedics. 43 (5), 345-358 (2020).
  6. Aljubran, A. H., Griffin, A., Pintilie, M., Blackstein, M. Osteosarcoma in adolescents and adults: survival analysis with and without lung metastases. Annals of Oncology. 20 (6), 1136-1141 (2009).
  7. Ek, E. T., Dass, C. R., Choong, P. F. Commonly used mouse models of osteosarcoma. Critical Reviews in Oncology/Hematology. 60 (1), 1-8 (2006).
  8. Castillo-Tandazo, W., Mutsaers, A. J., Walkley, C. R. Osteosarcoma in the post genome era: Preclinical models and approaches to identify tractable therapeutic targets. Current Osteoporosis Reports. 17 (5), 343-352 (2019).
  9. Mason, N. J. Comparative immunology and immunotherapy of canine osteosarcoma. Advances in Experimental Medicine and Biology. 1258, 199-221 (2020).
  10. Cobb, L. M. Radiation-induced osteosarcoma in the rat as a model for osteosarcoma in man. British Journal of Cancer. 24 (2), 294-299 (1970).
  11. Walkley, C. R., et al. Conditional mouse osteosarcoma, dependent on p53 loss and potentiated by loss of Rb, mimics the human disease. Genes & Development. 22 (12), 1662-1676 (2008).
  12. Entz-Werlé, N., et al. Targeted apc;twist double-mutant mice: a new model of spontaneous osteosarcoma that mimics the human disease. Translational Oncology. 3 (6), 344-353 (2010).
  13. Erstad, D. J., et al. Orthotopic and heterotopic murine models of pancreatic cancer and their different responses to FOLFIRINOX chemotherapy. Disease Models & Mechanisms. 11 (7), (2018).
  14. Chang, J., et al. MicroRNAs for osteosarcoma in the mouse: a meta-analysis. Oncotarget. 7 (51), 85650-85674 (2016).
  15. Maloney, C., et al. Intratibial injection causes direct pulmonary seeding of osteosarcoma cells and is not a spontaneous model of metastasis: A mouse osteosarcoma model. Clinical Orthopaedics and Related Research. 476 (7), 1514-1522 (2018).
  16. Yu, Z., et al. Establishment of reproducible osteosarcoma rat model using orthotopic implantation technique. Oncology Reports. 21 (5), 1175-1180 (2009).
  17. Fidler, I. J., Naito, S., Pathak, S. Orthotopic implantation is essential for the selection, growth and metastasis of human renal cell cancer in nude mice [corrected]. Cancer Metastasis Reviews. 9 (2), 149-165 (1990).
  18. Leacock, S. W., et al. A zebrafish transgenic model of Ewing's sarcoma reveals conserved mediators of EWS-FLI1 tumorigenesis. Disease Models & Mechanisms. 5 (1), 95-106 (2012).
  19. Sharma, S., Boston, S. E., Riddle, D., Isakow, K. Osteosarcoma of the proximal tibia in a dog 6 years after tibial tuberosity advancement. The Canadian Veterinary Journal. 61 (9), 946-950 (2020).
  20. Mohseny, A. B., Hogendoorn, P. C. Zebrafish as a model for human osteosarcoma. Advances in Experimental Medicine and Biology. 804, 221-236 (2014).
  21. Hu, S., et al. Cantharidin inhibits osteosarcoma proliferation and metastasis by directly targeting miR-214-3p/DKK3 axis to inactivate β-catenin nuclear translocation and LEF1 translation. International Journal of Biological Sciences. 17 (10), 2504-2522 (2021).
  22. Chang, J., et al. Polyphyllin I suppresses human osteosarcoma growth by inactivation of Wnt/β-catenin pathway in vitro and in vivo. Scientific Reports. 7 (1), 7605(2017).
  23. Lamar, J. M., et al. SRC tyrosine kinase activates the YAP/TAZ axis and thereby drives tumor growth and metastasis. The Journal of Biological Chemistry. 294 (7), 2302-2317 (2019).
  24. Benton, G., Arnaoutova, I., George, J., Kleinman, H. K., Koblinski, J. Matrigel: from discovery and ECM mimicry to assays and models for cancer research. Advanced Drug Delivery Reviews. , 3-18 (2014).
  25. Chang, J., et al. Matrine inhibits prostate cancer via activation of the unfolded protein response/endoplasmic reticulum stress signaling and reversal of epithelial to mesenchymal transition. Molecular Medicine Reports. 18 (1), 945-957 (2018).
  26. Fridman, R., et al. Enhanced tumor growth of both primary and established human and murine tumor cells in athymic mice after coinjection with Matrigel. Journal of the National Cancer Institute. 83 (11), 769-774 (1991).
  27. Kocatürk, B., Versteeg, H. H. Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth. Journal of Visualized Experiments. (96), e51967(2015).
  28. Paschall, A. V., Liu, K. An orthotopic mouse model of spontaneous breast cancer metastasis. Journal of Visualized Experiments. (114), e54040(2016).
  29. Hildreth, B. E., Palmer, C., Allen, M. J. Modeling primary bone tumors and bone metastasis with solid tumor graft implantation into bone. Journal of Visualized Experiments. (163), e61313(2020).
  30. Campbell, J. P., Merkel, A. R., Masood-Campbell, S. K., Elefteriou, F., Sterling, J. A. Models of bone metastasis. Journal of Visualized Experiments. (67), e4260(2012).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

حقن الساركوما العظمية داخل الظنبوب لتوليد الساركوما العظمية العظمية ونماذج الفئران الخبيثة الرئوية
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.