مقالة منهجية

تصوير 3D لمصفوفة الكبد خارج الخلية في نموذج فأر لالتهاب الكبد الدهني غير الكحولي

2.3K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/63106

⸱

فبراير 25, 2022

 ,  ,  , 
1Gastroenterology and Hepatology, Stanford University

في هذه المقالة

ملخص

يعمل البروتوكول الحالي على تحسين طرق التروية / إزالة الخلايا في الكبد في الموقع وطرق الفحص المجهري ثنائي الفوتون لإنشاء منصة موثوقة لتصور ديناميكيات إعادة تشكيل المصفوفة خارج الخلية (ECM) أثناء التهاب الكبد الدهني غير الكحولي (NASH).

الملخص

التهاب الكبد الدهني غير الكحولي (NASH) هو أكثر أمراض الكبد المزمنة شيوعا في الولايات المتحدة ، حيث يصيب أكثر من 70 مليون أمريكي. يمكن أن يتطور التهاب الكبد الدهني غير الكحولي إلى التليف وفي النهاية إلى تليف الكبد ، وهو عامل خطر كبير لسرطان الخلايا الكبدية. توفر المصفوفة خارج الخلية (ECM) الدعم الهيكلي وتحافظ على توازن الكبد عبر إشارات الخلايا الأمومية. ينتج تليف الكبد عن خلل في عملية إعادة تشكيل ECM الديناميكية ويتميز بالتراكم المفرط للعناصر الهيكلية والتغيرات المرتبطة بها في الجليكوزامينوجليكان. يطلق على نمط التليف النموذجي ل NASH اسم "سلك الدجاج" ، والذي يتكون عادة من تليف المنطقة 3 حول الجيوب الأنفية / حول الخلايا ، بناء على الميزات التي لاحظتها صبغة ماسون ثلاثية الألوان وبقع بيكروسيروس الحمراء. ومع ذلك ، فإن تقنيات التصوير التقليدية القائمة على شرائح الأنسجة الرقيقة ثنائية الأبعاد (2D) لا يمكنها إظهار التغييرات الهيكلية التفصيلية ثلاثية الأبعاد (3D) ECM ، مما يحد من فهم إعادة تشكيل ECM الديناميكي في تليف الكبد.

قام العمل الحالي بتحسين بروتوكول سريع وفعال لتصوير بنية ECM الأصلية في الكبد عن طريق إزالة الخلايا لمواجهة التحديات المذكورة أعلاه. تم تغذية الفئران إما بحمية تشاو أو الوجبات السريعة لمدة 14 أسبوعا. تم إجراء إزالة الخلايا بعد نضح الوريد البابي في الموقع ، وتم تطبيق تقنيات الفحص المجهري ثنائي الفوتون على الصورة وتحليل التغيرات في ECM الأصلي. تم إعادة تشكيل وتحليل صور 3D للكبد الطبيعي و NASH. قدم إجراء إزالة التروية الخلوية في الموقع وتحليل السقالة بواسطة المجهر ثنائي الفوتون منصة عملية وموثوقة لتصور إعادة تشكيل ECM الديناميكي في الكبد.

المقدمة

مرض الكبد الدهني غير الكحولي (NAFLD) هو أكثر أمراض الكبد شيوعا ، حيث يصيب 20٪ -25٪ من السكان البالغين. يتقدم 25٪ من مرضى NAFLD إلى التهاب الكبد الدهني غير الكحولي (NASH) ، حيث يزداد خطر الإصابة بتليف الكبد وفشل الكبدوسرطان الخلايا الكبدية 1. في السنوات العشرين المقبلة ، تشير التقديرات إلى أن NASH ستمثل 2 مليون حالة وفاة مرتبطة بالكبد في الولايات المتحدة2. نظرا لعدم وجود علاجات معتمدة ، هناك حاجة ملحة لفك رموز الآليات التي تسبب تليف الكبد لدى مرضى التهاب الكبد الدهني غير الكحولي وتطوير علاج مستهدف3.

المصفوفة خارج الخلية (ECM) هي بيئة دقيقة ديناميكية ومعقدة تمارس اتصالا ثنائي الاتجاه مع الخلايا لتنظيم توازن الأنسجة4. يتكون ECM للكبد من عناصر هيكلية مثل البروتيوغليكان والكولاجين والفبرونيكتين والإيلاستين والبروتينات غير الهيكلية الأخرى (مثل olfactomedin و thrombospondin) لتوفير الدعم المادي والهيكلي4.

تليف الكبد هو استجابة مزمنة لالتئام الجروح لتلف الكبد من مسببات مختلفة ، بما في ذلك NASH3. ينتج عن خلل في عملية إعادة تشكيل مصفوفة ECM الديناميكية ويتميز بالبروتينات الهيكلية المفرطة في الكبد المصاب4. يعتمد تكوين الألياف على الاتصال الديناميكي بين الخلايا الخلوية بين أنواع الخلايا الكبدية المختلفة. تتمايز الخلايا النجمية الكبدية (HSCs) ، عند تنشيطها ، إلى خلايا تشبه الخلايا الشبيهة بالخلايا الليفية الليفية العضلية التي تعبر عن Smooth Muscle Alpha 2 وتهاجر وتتكاثر وتوليف بروتينات ECM كإجراء لإغلاق الجرح. HSCs المنشطة هي الخلايا المركزية المنتجة للكولاجين في الكبد1.

الآلية الجزيئية لإعادة تشكيل ECM ، وأنماط التليف ، وعلاقتها بالأحداث الخلوية ليست واضحة. لا تزال هناك حاجة إلى فهم أفضل لهيكل ECM ثلاثي الأبعاد (3D) ، على الرغم من أن تقنيات قياس الطيف الكتلي ساعدت في تحليل تكوين بروتين ECM4. تقليديا ، تم إجراء صبغة ماسون ثلاثية الألوان ، وبقع Picro Sirius Red ، وتصوير الجيل التوافقي الثاني (SHG) على أقسام الكبد الرقيقة ثنائية الأبعاد (2D). يسمى نمط التليف النموذجي ل NASH "سلك الدجاج" ، والذي يمتد إلى المنطقة 3 وهو تليف حول الجيوب الأنفية / حول الخلايا 5,6. ومع ذلك ، كان هناك نقص في الدراسات التي تركز على بنية 3D للكبد الأصلي ، وخاصة تلك التي لا تنطوي على تقسيم الأنسجة. من شأن أساليب التصوير القوية لتحديد أنماط وخصائص التليف من خلال إعادة تشكيل ECM الديناميكي في تليف الكبد أن يعزز بشكل كبير فهم آليات NASH وتحديد أهداف علاجية جديدة.

لمواجهة هذه التحديات ، تم تحسين بروتوكول سريع وفعال لتصوير ECM للكبد الأصلي عبر إزالة الخلايا7. إزالة الخلايا من الكبد الكامل هو نهج لإزالة المحتوى الخلوي الكبدي مع الحفاظ على شبكة 3D ECM الأصلية من خلال نضح المنظفات. تم تغذية الفئران إما تشاو أو حمية الوجبات السريعة (FFD) لمدة 14 أسبوعا. تم إجراء إزالة الخلايا بعد نضح الوريد البابي في الموقع بمنظف معتدل ومعدلات تدفق منخفضة للحفاظ على هياكل الكولاجين الليفي الحلزوني الثلاثي والأصلي. تم تطبيق الفحص المجهري ثنائي الفوتون لتحليل التغيرات في هياكل الكولاجين في ECM. تم إعادة تشكيل وتحليل صور 3D لهيكل ECM الأصلي في الكبد الطبيعي و NASH. يوفر إجراء إزالة التروية الخلوية في الموقع وتحليل السقالة بواسطة المجهر ثنائي الفوتون منصة عملية وبأسعار معقولة لتصور إعادة تشكيل ECM الديناميكي في الكبد.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

يتم إجراء التجارب على الحيوانات وفقا للإجراءات التجريبية المعتمدة من قبل لجان رعاية واستخدام الحيوانات المؤسسية (IACUCs) بجامعة ستانفورد ومستشفى شؤون المحاربين القدامى في بالو ألتو. تم تغذية ذكور الفئران C57BL / 6J البالغة من العمر 6-8 أسابيع إما بالطعام أو نظام غذائي للوجبات السريعة مكمل ب 4.2٪ شراب الذرة عالي الفركتوز (انظر جدول المواد) في مياه الشرب لمدة 14 أسبوعا5. تم الاحتفاظ بالفئران في أقفاص قياسية في دورة مظلمة / فاتحة مدتها 12 ساعة.

1. التحضير الجراحي وإجراءات نضح الكبد

  1. وزن الماوس قبل العملية.
  2. تخدير الفأر عن طريق إعطاء الكيتامين (90 ملغم / كغم) والزيلازين (10 ملغم / كغم) (انظر جدول المواد) عن طريق الحقن داخل الصفاق. تأكد من تخدير الماوس بالكامل عن طريق قرص إصبع القدم قبل المتابعة إلى الخطوة التالية.
    ملاحظة: ليست هناك حاجة إلى إيزوفلوران هنا لأن هذه جراحة عدم البقاء على قيد الحياة.
  3. حلق المنطقة البطنية باستخدام ماكينة قص الشعر وتطهير الجلد بنسبة 70٪ من الإيثانول. ضع الماوس على ظهره ، وشل حركة الساقين على اللوحة الجراحية بشريط.
  4. بعد إعادة تأكيد عمق التخدير عن طريق قرصة إصبع القدم، استخدم مقص Mayo وملقط Adson (انظر جدول المواد) لعمل شق 3 سم بشكل جانبي في أسفل البطن ثم شق 5 سم عموديا من أسفل البطن إلى عملية الخنجري. احرص على عدم فتح تجويف الصدر.
  5. بعد فتح الصفاق ، ضع الأمعاء برفق على يسار الحيوان ، وارفع الفص الأيمن من الكبد باستخدام قضيب مائل من الحرير الصناعي (انظر جدول المواد) لكشف الوريد البابي.
  6. قسطرة الوريد البابي باستخدام قسطرة 24 G IV. أدخل القسطرة في الطرف البعيد من الوريد البابي. ضع طرف القسطرة قبل أن يتفرع الوريد البابي إلى الفص الكبدي.
  7. اسحب الإبرة فورا عندما تدخل القسطرة الوريد. تأكد من وضع القسطرة بشكل صحيح داخل الوريد عن طريق تعطير الكبد باستخدام PBS باستخدام حقنة 1 مل عبر القسطرة.
    ملاحظة: عند تروية PBS ، يجب أن تبيض جميع الفصوص على الفور. إذا تم وضع القسطرة بشكل صحيح ، فسوف يتدفق الدم الوريدي بسرعة عبر القسطرة.
  8. استخدم ملقط Dumont الدقيق ، وحامل إبرة Castroviejo الدقيقة ، وخياطة 4-0 (انظر جدول المواد) لوضع غرزة أسفل تفرع الوريد البابي وغرزة ثانية 1 سم أدناه لتأمين القسطرة.

2. إزالة الخلايا من الأنسجة

  1. قم بتوصيل القسطرة بأنبوب سيليكون (~ 1 متر طول وقطر داخلي 3 مم وقطر خارجي 4.1 مم) باستخدام موصل Luer. قم بتوصيل أنبوب السيليكون بمضخة تمعجية وخزان يحتوي على ماء منزوع الأيونات (انظر جدول المواد).
  2. قم بإزالة فقاعات الهواء داخل الأنبوب بعناية وتجنب توليد فقاعات جديدة أثناء التروية. اضبط المضخة التمعجية على خرج تدفق يبلغ 0.2 مل / دقيقة (أي 288 مل / 24 ساعة).
  3. Perfuse أولا بالماء منزوع الأيونات (~ 50 مل / ماوس) لمدة 2 ساعة. سيتغير لون الكبد من الأحمر إلى الأصفر أثناء التروية.
    ملاحظة: ستنتهي صلاحية الحيوان بعد 10 دقائق من التروية.
  4. قم بتبديل محلول التروية إلى 0.5٪ (بالوزن / الحجم) ديوكسي كولات الصوديوم (DOC ، انظر جدول المواد) واستمر طوال الليل (18 ساعة ، ~ 250 مل / ماوس). سيصبح الكبد أبيض في نهاية التروية (الشكل 1).
  5. قم بتبديل محلول التروية إلى ماء منزوع الأيونات (~ 50 مل / ماوس) و perfuse لمدة 2 ساعة.
  6. استخدم ملقط Dumont الصغير ومقص الزنبرك الصغير (انظر جدول المواد) لجمع الكبد منزوع الخلايا وغسله بعناية في طبق بتري مع برنامج تلفزيوني.
  7. قطع الأنسجة منزوعة الخلايا إلى قطع صغيرة للتصوير الفوري أو تجميدها عند -80 درجة مئوية لمزيد من التحليل الكيميائي الحيوي مثل قياس الطيف الكتلي الترادفي أو ELISA أو اللطخة الغربية.

3. إعداد الشرائح للتصوير (باستخدام مجهر مضان متعدد الفوتون / متحد البؤر)

  1. انقل قطعة صغيرة من الكبد منزوع الخلايا (<3 × 3 × 3 مم) إلى شريحة مجهرية وضع الأنسجة في المنتصف.
  2. أضف 10 ميكرولتر من وسط تركيب مانع التلاشي (انظر جدول المواد) إلى الأنسجة باستخدام ماصة لتجنب جفاف الأنسجة.
  3. قم بتغطية المنديل بغطاء زجاجي واستخدم قوة صغيرة لتسطيح العينة. أغلق حواف زجاج الغطاء بطلاء أظافر شفاف عديم اللون (الشكل 2).
    ملاحظة: نظرا لوضع الفوتون الثنائي المستقيم من خلال المجهر ، تم استخدام غطاء زجاجي على العينة. ومع ذلك ، يمكن وضع العينات بشكل مختلف إذا تم استخدام مجهر مقلوب.

4. الحصول على الصور

  1. ضع قطرة من زيت الغمر في الجزء العلوي من زجاج الغطاء وضع الشريحة على حامل شريحة المجهر. اخفض العدسة الشيئية بالزيت 20x حتى تلامس زيت الغمر.
  2. قم بالتبديل إلى القناة البنفسجية (405 نانومتر) ، وقم بتشغيل الغالق ، وركز على العينة. التنقل وتحديد موضع منطقة الاهتمام للتصوير. قم بإيقاف تشغيل الغالق قبل الانتقال إلى التقاط الصور باستخدام ضوء الليزر.
  3. قم بالتبديل إلى عنصر تحكم الكمبيوتر وابدأ تشغيل ليزر الفوتون. قم بتشغيل الليزر ثنائي الفوتون أولا (الشكل 3A) ، ثم قم بتشغيل وحدة التحكم بالليزر ثنائية الفوتون (انظر جدول المواد) والمصراع (الشكل 3B ، C). تأكد من أن طاقة الخرج أعلى من 2.5 وات.
    تقليل طاقة الليزر لمنع التبريد الفلوري. حدد واضبط أجهزة الكشف (كل من المضاعفات الضوئية والهجينة) لاستيعاب الفلوروفورات المختارة.
    ملاحظة: تم إجراء التصوير ثنائي الفوتون بطول موجة إثارة يبلغ 860 نانومتر. تم اختيار قناتين لصور الكولاجين SHG ومضان مثار ثنائي الفوتون (TPEF) ، على التوالي. اكتشفت قناة واحدة تتوافق مع نطاق الطول الموجي 415-445 نانومتر البنية التفصيلية للكولاجين من إشارات SHG. غطت قناة أخرى نطاق 465-669 نانومتر لجمع إشارات TPEF.
  4. اختر عمليات الاستحواذ على الصور المتزامنة أو المتسلسلة. اضبط الثقب على أعلى قيمة. اضبط الأطوال الموجية لليزر والكسب والطاقة والإزاحة. اضبط وقت بقاء البكسل وحجم البكسل والمتوسط والتكبير / التصغير (الشكل 4 أ).
  5. قم بتمرير وحدة تحكم z للكمبيوتر وقم بتعيين أبعاد z ، وحدد نقطتي البداية والنهاية ، واختر عدد الصور الواردة داخل وحدة التخزين (z-stack). الحصول على الصور.
    ملاحظة: هنا ، تم اختيار حجم 20 ميكرومتر Z وحجم خطوة Z 1 ميكرومتر (الشكل 4B).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تم الكشف عن ألياف الكولاجين مع الجيل التوافقي الثاني والمجهر ثنائي الفوتون. الإشارة هي من هياكل الكولاجين الثلاثي الحلزوني والأصلي القابل للكسر. لم يتم استخدام أجسام مضادة محددة لتحليل الأنواع الفرعية للكولاجين. ومع ذلك ، يمكن إضافة هذا إلى تقنية التصوير.

عندما تتم دراسة أنسجة الكبد دون إزالة الخلايا ، يكون من الصعب الحصول على صور عالية الدقة لشبكة الكولاجين (الشكل 5 أ). في ECM منزوع الخلايا ، تظهر ألياف الكولاجين (الخضراء) متوازية أو متشابكة

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

يوضح البروتوكول الحالي أن إزالة الخلايا من خلال معدل تدفق منخفض DOC في التروية في الموقع تحافظ على هياكل الكولاجين الليفي الثلاثي الحلزوني والأصلي القابلة للكسر ، مما يوفر منصة موثوقة وفعالة من حيث التكلفة لالتقاط إعادة تشكيل ECM الديناميكي في تليف الكبد NASH. على الرغم من إجراء إزالة الخلايا في الكبد الطبيعي والليفي قبل تحديد مكونات ECM أو توليد سقالات بيولوجية لزراعة الخلايا ، إلا أن ديناميكيات إعادة تشكيل ECM في تليف الكبد لم تتم دراستها جيدا8،9،...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يعلن المؤلفون أنه لا يوجد تضارب في المصالح فيما يتعلق بهذه المقالة.

شكر وتقدير

نشكر حديقة Hyesuk على المساعدة الفنية. تم دعم هذا البحث بتمويل من المعهد الوطني للسكري وأمراض الجهاز الهضمي والكلى (NIDDK) ، والمعاهد الوطنية للصحة (R01 2DK083283 ، إلى NJT) ، والمعهد الوطني للشيخوخة (NIA) ، والمعاهد الوطنية للصحة (1R01AG060726 ، إلى NJT). نحن نقدر بامتنان جون مولهولاند وكيتي لي من مرفق تصوير علوم الخلية في مركز بيكمان للمساعدة الفنية في التصوير المجهري ثنائي الفوتون.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
4-0 MONOCRYL غير مصبوغ 1 × 18 "P-3MONOCRYLY494G
4-0 خياطةفيشر علمي10-000-649https://www.fishersci.com/shop/products/monomid-nylon-non-absorbable-sutures-7/10000649?keyword=true
حقن AnaSed (زيلازين)AnaSedNDC 59399-110-20هذا الدواء للاستخدام من قبل أو بناء على طلب طبيب بيطري مرخص.
قسطرة BD INSYTE AUTOGUARD I.V. مع BC TECHNOLOGYBD
Chow DIETEnvigo# 2918Control Diet. تركيبة ثابتة ، نظام غذائي غير قابل للتعقيم مصنوع من مكونات عالية الجودة ومصمم لدعم الحمل والرضاعة ونمو القوارض.
نظام غذائي للوجبات السريعة (AIN76A Western Diet)اختبارالنظام الغذائي1810060 https://www.testdiet.com/cs/groups/lolweb/@testdiet/documents/web_content/mdrf/mdux/~edisp/ducm04_051601.pdf
Hematoxylin و Eosin Stain KitvectorlabsH-3502https://vectorlabs.com/hematoxylin-and-eosin-stain-kit.html
Kent Scientific Rat SurgicalFisher Scientific13-005-205https://www.fishersci.com/shop/products/rat-surgical-kit/13005205#?keyword=mouse%20surgery%20kit
حقن هيدروكلوريد الكيتامينفيدكوNDC 50989-996-06 - 10 مل - قارورة.تمت دراسة KetaVed سريريا في الرئيسيات دون البشرية بالإضافة إلى تلك الأنواع المدرجة تحت الإدارة والجرعة.
موصل Leica SP5 Confocal المستقيم متعدد الفوتونLeicaSP5
Luer (محبس ثلاثي الاتجاهات مع SPIN-LOCK & reg;)bbraunD300https://www.bbraunusa.com/en/products/b0/three-way-stopcockwithspin-lock.html
Picrosirius Red Stain KitPolysciences، Inc.24901https://www.polysciences.com/default/picrosirius-red-stain-kit-40771
قضيب رايون مائلبيوريتان25-806 1PR
شراب ديوكسيكولات الصوديومسيجمادريتشD6750-100G
www.target.com24 أونصة سائلةhttps://www.target.com/p/pancake-syrup-24-fl-oz-market-pantry-8482/-/A-13007801
مضخة تمعجية متغيرة السرعةINTLLABBT100https://www.amazon.com/gp/product/B082K97W5W/ref=ox_sc_saved_title_2?smid=A12NUUP87ZRRAR&psc=1
VECTASHIELD مضاد للتلاشي تصاعد متوسطvectorlabsH-1000-10https://vectorlabs.com/vectashield-mounting-medium.html
382612 Kit

المراجع

  1. Friedman, S. L., Pinzani, M. Hepatic fibrosis: 2022 unmet needs and a blueprint for the future. Hepatology. 75 (2), 473-488 (2021).
  2. Ye, Q., et al. Global prevalence, incidence, and outcomes of non-obese or lean non-alcoholic fatty liver disease: A systematic review and meta-analysis. The Lancet Gastroenterology and Hepatology. 5 (8), 739-752 (2020).
  3. Schwabe, R. F., Tabas, I., Pajvani, U. B. Mechanisms of fibrosis development in non-alcoholic steatohepatitis. Gastroenterology. 158 (7), 1913-1928 (2020).
  4. Arteel, G. E., Naba, A. The liver matrisome - looking beyond collagens. JHEP Reports. 2 (4), 100115(2020).
  5. Jiang, J. X., et al. Nonphagocytic activation of NOX2 is implicated in progressive non-alcoholic steatohepatitis during aging. Hepatology. 72 (4), 1204-1218 (2020).
  6. Dehnad, A., et al. AGER1 downregulation associates with fibrosis in non-alcoholic steatohepatitis and type 2 diabetes. Journal of Clinical Investigation. 130 (8), 4320-4330 (2020).
  7. Mayorca-Guiliani, A. E., et al. Decellularization and antibody staining of mouse tissues to map native extracellular matrix structures in 3D. Nature Protocols. 14 (12), 3395-3425 (2019).
  8. Mazza, G., et al. Cirrhotic human liver extracellular matrix 3D scaffolds promote smad-dependent tgf-beta1 epithelial mesenchymal transition. Cells. 9 (1), 83(2019).
  9. Klaas, M., et al. The alterations in the extracellular matrix composition guide the repair of damaged liver tissue. Scientific Reports. 6, 27398(2016).
  10. Mattei, G., et al. Mechanostructure and composition of highly reproducible decellularized liver matrices. Acta Biomaterialia. 10 (2), 875-882 (2014).
  11. Ren, H., et al. Evaluation of two decellularization methods in the development of a whole-organ decellularized rat liver scaffold. Liver International. 33 (3), 448-458 (2013).
  12. Piersma, B., Hayward, M. K., Weaver, V. M. Fibrosis and cancer: A strained relationship. Biochimica et Biophysica Acta - Reviews on Cancer. 1873 (2), 188356(2020).
  13. Cox, T. R. The matrix in cancer. Nature Reviews Cancer. 21 (4), 217-238 (2021).
  14. Mirdamadi, E. S., Kalhori, D., Zakeri, N., Azarpira, N., Solati-Hashjin, M. Liver tissue engineering as an emerging alternative for liver disease treatment. Tissue Engineering Part B: Reviews. 26 (2), 145-163 (2020).
  15. Mazza, G., et al. Decellularized human liver as a natural 3D-scaffold for liver bioengineering and transplantation. Scientific Reports. 5, 13079(2015).
  16. Jia, Z., et al. 3D culture system for liver tissue mimicking hepatic plates for improvement of human hepatocyte (C3A) function and polarity. BioMed Research International. 2020, 6354183(2020).
  17. Shimoda, H., et al. Decellularized liver scaffolds promote liver regeneration after partial hepatectomy. Scientific Reports. 9 (1), 12543(2019).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة