السابقين فيفو التروية الكبدية من خلال الوريد البابي في الماوس

ملخص

يصف البروتوكول طريقة مباشرة لاستئصال كبد الفأر السليم للدراسات الأيضية من خلال تروية الوريد البابي.

الملخص

أصبحت الأمراض الأيضية مثل مرض السكري ، وما قبل السكري ، ومرض الكبد الدهني غير الكحولي (NAFLD) ، والتهاب الكبد الدهني غير الكحولي (NASH) شائعة بشكل متزايد. تسمح عمليات تروية الكبد خارج الجسم الحي بإجراء تحليل شامل لعملية التمثيل الغذائي للكبد باستخدام الرنين المغناطيسي النووي (NMR) ، في الظروف الغذائية التي يمكن التحكم فيها بدقة. كما هو الحال في محاكاة سيليكو لا تزال وسيلة نظرية في المقام الأول لتقييم الإجراءات الهرمونية وآثار التدخل الصيدلاني، والكبد perfed لا تزال واحدة من أسرة الاختبار الأكثر قيمة لفهم التمثيل الغذائي الكبدي. نظرا لأن هذه الدراسات توجه الأفكار الأساسية في فسيولوجيا الكبد ، يجب أن تكون النتائج دقيقة وقابلة للتكرار. أكبر عامل في تكرار التروية الكبدية خارج الجسم الحي هو جودة الجراحة. لذلك ، أدخلنا طريقة منظمة ومبسطة لإجراء عمليات تروية كبد الفئران خارج الجسم الحي في سياق تجارب الرنين المغناطيسي النووي في الموقع . كما نصف تطبيقا فريدا ونناقش المشكلات الشائعة التي تمت مواجهتها في هذه الدراسات. الغرض العام هو توفير دليل غير معقد لتقنية قمنا بتحسينها على مدى عدة سنوات والتي نعتبرها المعيار الذهبي للحصول على نتائج قابلة للتكرار في عمليات استئصال الكبد والتروية في سياق تجارب الرنين المغناطيسي النووي في الموقع . المسافة إلى مركز المجال للمغناطيس وكذلك عدم إمكانية وصول الأنسجة إلى التدخل أثناء تجربة الرنين المغناطيسي النووي تجعل أساليبنا جديدة.

المقدمة

تعتبر التروية خارج الجسم الحي حاسمة في دراسة التمثيل الغذائي الكبدي ، والتروية من خلال الوريد البابي هو المعيار لهذه الدراسات. من أجل دراسة التمثيل الغذائي الكبدي بمعزل عن الآخرين ، يجب استئصال الكبد من الجسم لتجنب المضاعفات الناشئة عن التمثيل الغذائي في الأعضاء الأخرى (أي التمثيل الغذائي للجسم كله) وممارسة السيطرة على توافر الهرمونات (الأنسولين ، الجلوكاجون ، إلخ). يمكن أن يكون هذا النهج ضروريا لفهم آثار أمراض مثل السكري و NAFLD و NASH على التمثيل الغذائي الكبدي وكذلك آليات عمل الدواء. هذه المقالة بمثابة دليل لاستئصال الكبد والتروية. لقد طورنا إجراء مبسطا لإجراء دراسات الكبد الأيضية هذه بدقة كافية وقابلية للتكرار. إذا لم يتم إجراء الجراحة بشكل صحيح ، فهناك ت....

البروتوكول

تم التعامل مع التجارب التي شملت الفئران وفقا للجنة جامعة فلوريدا المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها (رقم البروتوكول #201909320). كانت سلالة الماوس المستخدمة هي C57BL/6J. جميع الفئران كانت من الذكور. تنطبق هذه الطريقة بشكل عام على الدراسات التي تستخدم سلالات الماوس القياسية الأخرى أيضا. يتم إجراء هذه الجراحة على النحو الأمثل من قبل شخصين يعملان معا.

1. الإعداد الأولي

1. تنصهر الأكباد مع الفوسات التي تحتوي على الإلكتروليتات كريبس-هينسليت 6 (25 ملليمتر NaHCO₃ ، 112 ملليمتر كلوريد الصوديوم ، 4.7 ملم KCl ، 1.2 ملم لكل من MgSO 4 ، KH 2 PO₄ ، و 0.5 ملم الصوديوم-EDTA ، 1.25 ملم كاكل 2) ، 6 ....

النتائج

يتم تقييم وظائف الكبد في المقام الأول من خلال استهلاك الأكسجين ومعدل التدفق. معدل التدفق من 4-8 مل / دقيقة واستهلاك الأكسجين من 1 ميكرومول / min.g نموذجي. وستختلف هذه التدابير تبعا لظروف تجريبية محددة واختلافات بيولوجية.

تعتمد الكمية الدقيقة من الأيزوفلوران المستخدمة على نوع نظام التخدير المستخدم وكذلك البيئة وعمر / وزن الماوس. أثناء الجراحة، لا يتغير الإيسوفلوران وغاز الولادة، على الرغم من أن بعض التغييرات قد تكون ضرورية اعتمادا على تفاصيل المنطقة الجراحية (على سبيل المثال، ضوضاء الخلفية)

المناقشة

هذا الإجراء الجراحي صعب ويتطلب ممارسة واسعة النطاق لتحقيق نتائج قابلة للتكرار. يجب تعديل الإيسوفلوران والغاز الناقل حسب الحاجة للحفاظ على صلاحية الحيوان من خلال أكبر قدر ممكن من الإجراء الجراحي. البيئة والوقت من اليوم والعمر والوزن والعديد من العوامل الأخرى ستؤثر على التخدير. يمكن أن يؤثر الوزن والنظام الغذائي وسلالة الفئران والعمر على الجراحة لأن تراكم الدهون يمكن أن يتداخل مع تصور الوريد البابي. عند تسجيل الكفوف لأسفل ، يجب توخي الحذر لعدم تطبيق أي ضغط على الرقبة قد يؤدي إلى الاختناق. علاوة على ذلك ، كلما كان الفأر أكث.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
1 مل Luer-Lock تستخدم مرة واحدة معقمة حقنة يمكن التخلص	منها N / A	N / A	علامة تجارية غير محددة
100 سم عمود زجاجي مغلف بالماء	N / A	N /	A حسب الطلب
2-0 خياطة حريرية	Braintree Scientific	N / A
22 مقياس كاثيرتر 1 بوصة. بدون أمان	Terumo	SRFF2225
23 جم 0.75 بوصة. إبر تحت الخف	Exel International	26407
27 G 1.5 بوصة. إبر تحت الدمك	Exel International	26426
4x4 بوصة. منصة جراحية	N / A	N / A	حسب الطلب
70٪ كحول مسح	N / A	N / A	محدد العلامة التجارية
المتداولة حمام مائي	MS Lauda	N / A	لم يعد نموذج يتم تصنيعه
قضيب طرف قطني	N / A	N / A	دقيق للعلامة التجارية
غير محددة ؛ مستقيم; حاد حاد. طول الشفرة 30 مم ؛ 4 3/4 "	Roboz	RS-6702
Dumont # 5/45 ملقط	أدوات علمية دقيقة	11251-35
Dumont # 7 - ملقط دقيق	أدوات علمية دقيقة	11274-20
Hemostats	أدوات علمية دقيقة	13015-14
هيبارين صوديوم قابل للحقن 1000 وحدة / مل	RX Generics	71288-0402-02
Isoflurane	باترسون بيطري	14043-0704-06
ليدوكائين هيدروكلوريد 2٪	فيدكو إنك.	50989-0417-12
مقص الأكسجين ذو الطبقة الرقيقة الغشائية	Radnoti	N / A
Metzenbaum. منحني; بلانت; طول الشفرة 27 مم ؛ 5 "	Roboz	RS-6013
نظام مقياس الأكسجين	Hanstech Instruments Ltd.	N / A
محلول ملحي 0.9٪	N / A	N / A	محلول ملحي مصنوع في مقياس المختبر
	N / A	N / A	علامة تجارية غير محددة
؛ أنظمة مضخات وحدة التحكم التناظرية متغيرة السرعة	نماذج Cole Palmer	N / A	مخصصة لكل تطبيق
وزن القوارب	N / A	N / A	علامة تجارية غير محددة

غير مقص تشغيل