Method Article

تحليل تمايز الخلايا ، والتشكل ، والتنميط أثناء التكوين الجنيني للدجاج باستخدام فحص الخرز المنقوع

DOI:

10.3791/63187

⸱

January 12th, 2022

 , 
1Departamento de Medicina Genómica y Toxicología Ambiental, Instituto de Investigaciones Biomédicas, Universidad Nacional Autónoma de México

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تتضمن مقايسة الخرزة المنقوعة التسليم المستهدف لكاشف الاختبار في أي نقطة زمنية تنموية لدراسة تنظيم تمايز الخلايا وتكوين المورفوجينيا. يتم تقديم بروتوكول مفصل ، ينطبق على أي نموذج حيواني تجريبي ، لإعداد ثلاثة أنواع مختلفة من الخرز المنقوع وزرعها في الأرقام الداخلية لجنين الدجاج.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يتم تنشيط العديد من البرامج الجينية أثناء التطور الجنيني الذي ينسق تمايز الخلايا لتوليد تنوع مذهل من الخلايا الجسدية والأنسجة والأعضاء. يتم تنظيم التنشيط الدقيق لهذه البرامج الجينية بواسطة مورفوجينات ، وهي جزيئات قابلة للانتشار توجه مصير الخلية عند عتبات مختلفة. يتطلب فهم كيفية تنسيق التنشيط الجيني للمورفوجينيا دراسة التفاعلات المحلية التي تسببها المورفوجينات أثناء التطور. يتيح استخدام الخرز المنقوع في البروتينات أو الأدوية المزروعة في مناطق متميزة من الجنين دراسة دور جزيئات معينة في إنشاء الأرقام والعمليات التنموية الأخرى. توفر هذه التقنية التجريبية معلومات عن التحكم في تحريض الخلايا ومصير الخلية وتكوين الأنماط. وبالتالي ، فإن اختبار الخرز المنقوع هذا هو أداة تجريبية قوية وقيمة للغاية تنطبق على النماذج الجنينية الأخرى.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

سمحت لنا الاختراقات في الآليات الجزيئية التي تتحكم في التعبير الجيني أثناء التطور الجنيني بفهم كيفية تحديد مصير الخلية. يحدث الالتزام بسلالات الخلايا المختلفة بمجرد أن تبدأ الخلايا التعبير الجزيئي لعوامل النسخ1. يتم تنسيق نمط التعبير هذا بشكل كبير في المكان والزمان ، وبالتالي يوجه تشكيل وتحديد المواقع ونمط الخلايا والأنسجة والأعضاء1،2،3،4،5. الحث الجنيني هو العملية التي تلتزم بها الخلايا بسلالات محددة من خلال إنشاء تسلسلات هرمية تقيد إمكانات الخلايا ، والتي تشمل حتى توليد خطة الجسم ا....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة هذا البحث والموافقة عليه من قبل مجلس المراجعة المؤسسية لرعاية واستخدام المختبر التابع لمعهد التحقيقات الطبية الحيوية ، الجامعة الوطنية المستقلة في المكسيك (UNAM ، مكسيكو سيتي ، المكسيك).

1. حضانة البيض وتدريج الأجنة

ملاحظة: يمكن الحصول على بيض الدجاج المخصب من المزارع المحلية. يتم استخدام بيض الدجاج الأبيض المخصب Leghorn الأكثر استخداما. تخزين بيض الدجاج المخصب الطازج في 15 درجة مئوية لمدة تصل إلى أسبوع واحد قبل الحضانة.

  1. احتضن بيض الدجاج المخصب عموديا مع الجانب المدبب لأسفل في حاضنة رطبة عند 38 درجة مئوية ورطوبة نسبية 70٪ حتى تصل إلى مرحلة 28 HH (حوالي 5.5 أيام وفقا لهاميلتون....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

استخدام الخرز المنقوع لتقييم سلوك الخلية في طرف الفرخ الجنيني
لضمان فعالية هذا الفحص ، يجب وضع الخرزة باستمرار وبدقة في الموقع الصحيح ؛ في هذه الحالة ، فإن الجزء البعيد من الرقم البيني الثالث تحت التلال القمية للجلد الخارجي AER (الشكل 1A). يسمح هذا الوضع للجزيء المعني بالانتشار بالتساوي في جميع أنحاء الأنسجة الرقمية. علاوة على ذلك ، تحتوي المنطقة الموجودة أسفل AER على خلايا غير متمايزة تستجيب بسهولة للعلاج. لتقييم التأثيرات على تمايز الخلايا ، يمكن تلطيخ الأجنة باللون الأ.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الميزة الرئيسية للأداة التجريبية المفصلة في هذا البروتوكول هي القدرة على التحكم في وقت وموقع التعرض للخرز المنقوع في جزيء تجريبي معين. يوفر الجمع بين تحديد المواقع الصحيح والتوقيت التنموي الدقيق إمكانيات هائلة لدراسة عمليات تمايز الخلايا. يتيح إجراء هذه التجارب في الأنسجة غير المتمايزة التحقيق في الأحداث الحاسمة الأولى في النسب الخلوي. على سبيل المثال ، يؤدي وضع حبة غارقة في TGFß في الأنسجة الرقمية للأطراف الجنينية 28 HH إلى تكوين رقم خارج الرحم يتم فيه تشغيل شلال جزيئي يحفز التعبير الجيني للجيل الرئيسي Sox9

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد دعم هذا العمل المديرية العامة للأكاديمية الشخصية (DGAPA) - الجامعة الوطنية المستقلة في المكسيك [أرقام المنح IN211117 و IN213314] والمجلس الوطني للعلوم والتكنولوجيا (CONACyT) [رقم المنحة 1887 CONACyT-Fronteras de la Ciencia] الممنوحة ل JC-M. حصل JC M-L على زمالة ما بعد الدكتوراه من المجلس الوطني للعلوم والتكنولوجيا (CONACyT-Fronteras de la Ciencia-1887). يقدر المؤلفون مساعدة Lic. لوسيا بريتو من معهد التحقيقات الطبية الحيوية، UNAM في إعداد مراجع هذه المخطوطة.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Affi-Gel Blue Gel BeadsBio-Rad153-7302
AG1-X2 حباتBio-Rad1400123
حاضنة البيضIncumatic de MexicoIncumatic 1000
ملقط جراحي دقيقأدوات العلومالدقيقة 9115-10
حبات الهيبارين سيفاروزAbcamab193268
عش طبق بتري705001
مجهر مجهر مجسمZeissStemi DV4
الشريطNANA
إبرة التنغستنGoodFellowE74-15096 / 01

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Stapornwongkul, K. S., Vincent, J. P. Generation of extracellular morphogen gradients: the case for diffusion. Nature Reviews Genetics. 22 (6), 393-411 (2021).
  2. Rogers, K. W., Schier, A. F. Morphogen gradients: from generation to interpretatio....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Chicken EmbryogenesisSoaked Bead AssayCell DifferentiationEmbryonic MorphogenesisPattern FormationMorphogen SignalingBead ImplantationLimb DevelopmentStereo MicroscopyGene Regulation

Related Articles