هنا ، نقدم محاكاة miRNA الخارجية المركبة صناعيا إلى الكلى عن طريق حقن الوريد الخلفي لناقل غير فيروسي وجسيمات نانوية بولي إيثيلينيمين في العديد من نماذج الفئران لأمراض الكلى. أدى ذلك إلى إفراط كبير في التعبير عن miRNA المستهدف في الكلى ، مما أدى إلى تثبيط تطور مرض الكلى في العديد من نماذج الفئران.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
توصيل miRNA الخارجي المركب صناعيا إلى الكلى باستخدام جسيمات البولي إيثيلينيمين النانوية في العديد من نماذج الفئران لأمراض الكلى
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الحمض النووي الريبي الصغير (miRNAs) ، الحمض النووي الريبي الصغير غير المشفر (21-25 قاعدة) التي لا تترجم إلى بروتينات ، تمنع الكثير من الحمض النووي الريبي المرسال المستهدف (mRNAs) عن طريق زعزعة استقرار وتثبيط ترجمتها في أمراض الكلى المختلفة. لذلك ، فإن تناوب تعبير miRNA عن طريق محاكاة miRNA الخارجية المركبة صناعيا هو خيار علاجي مفيد محتمل لتثبيط تطور العديد من أمراض الكلى. ومع ذلك ، نظرا لأن الحمض النووي الريبي في المصل يتحلل على الفور من محاكاة miRNA الخارجية التي يتم تناولها بشكل منهجي في الجسم الحي ، فإن توصيل miRNA إلى الكلى لا يزال يمثل تحديا. لذلك ، فإن النواقل التي يمكن أن تحمي محاكاة miRNA الخارجية من التدهور بواسطة RNAase وتوصيلها بشكل كبير إلى الكلى ضرورية. استخدمت العديد من الدراسات النواقل الفيروسية لتوصيل محاكيات أو مثبطات miRNA الخارجية إلى الكلى. ومع ذلك ، قد تسبب النواقل الفيروسية استجابة للإنترفيرون و / أو عدم الاستقرار الجيني. لذلك ، فإن تطوير النواقل الفيروسية هو أيضا عقبة أمام الاستخدام السريري لمحاكاة أو مثبطات miRNA الخارجية. للتغلب على هذه المخاوف المتعلقة بالنواقل الفيروسية ، قمنا بتطوير طريقة ناقل غير فيروسي لتوصيل محاكاة miRNA إلى الكلى باستخدام حقن الوريد الذيلي لجسيمات البولي إيثيلين النانوية (PEI-NPs) ، مما أدى إلى إفراط كبير في التعبير عن miRNAs المستهدفة في العديد من نماذج الفئران لأمراض الكلى.
المقدمة
miRNAs ، الحمض النووي الريبي الصغير غير المشفر (21-25 قاعدة) التي لا تترجم إلى بروتينات ، تمنع الكثير من الحمض النووي الريبي المرسال المستهدف (mRNAs) عن طريق زعزعة استقرارها وتثبيط ترجمتها في أمراض الكلى المختلفة 1,2. لذلك ، فإن العلاج الجيني الذي يستخدم مقلدات أو مثبطات miRNA الخارجية المركبة صناعيا هو خيار جديد محتمل لتثبيط تطور العديد من أمراض الكلى3،4،5.
على الرغم من الوعد بمحاكاة أو مثبطات miRNA للعلاج الجيني ، إلا أن توصيله إلى الأعضاء المستهدفة لا يزال يمثل عقبة كبيرة أمام التجارب في الجسم الحي لتطوير إمكاناتها السريرية. نظرا لأن محاكيات أو مثبطات miRNA المركبة صناعيا تخضع للتدهور الفوري بواسطة مصل RNase ، يتم تقصير عمر النصف عند الإدارة الجهازية في الجسم الحي6. بالإضافة إلى ذلك ، فإن كفاءة miRNA تحاكي أو مثبطات عبور غشاء البلازما والسيتوبلازم المنقول بشكل عام أقل بكثير بدون ناقلات مناسبة 7,8. تشير خطوط الأدلة هذه إلى أن تطوير نظام توصيل miRNA يحاكي أو مثبطات الكلى مطلوب ، لتمكين استخدامها في الإعدادات السريرية وجعلها خيارا علاجيا جديدا للمرضى الذين يعانون من أمراض الكلى المختلفة.
تم استخدام النواقل الفيروسية كناقلات لتوصيل محاكيات miRNA الخارجية أو مثبطات إلى الكلى 9,10. على الرغم من أنها قد تم تطويرها من أجل السلامة الأحيائية وفعالية النقل ، إلا أن النواقل الفيروسية قد تسبب استجابة للإنترفيرون و / أو عدم الاستقرار الجيني11,12. للتغلب على هذه المخاوف ، قمنا بتطوير miRNA يحاكي نظام توصيل الكلى باستخدام جسيمات البولي إيثيلين النانوية (PEI-NPs) ، وهو ناقل غير فيروسي ، في العديد من نماذج الفئران لأمراض الكلى13،14،15.
PEI-NPs هي NPs خطية قائمة على البوليمر يمكنها توصيل قليل النيوكليوتيدات بشكل فعال ، بما في ذلك محاكاة miRNA ، إلى الكلى ، وتعتبر مفضلة لإعداد النواقل غير الفيروسية بسبب سلامتها على المدى الطويل وتوافقها الحيوي13،16،17.
توضح هذه الدراسة آثار محاكاة miRNA الخارجية المنهجية للتوصيل باستخدام PEI-NPs عن طريق حقن الوريد الذيل في الفئران النموذجية للتليف الكلوي التي ينتجها انسداد الحالب أحادي الجانب (UUO). بالإضافة إلى ذلك ، نوضح آثار محاكاة miRNA الخارجية المنهجية للتوصيل باستخدام PEI-NPs عبر حقن الوريد الذيل في الفئران النموذجية لمرض الكلى السكري (الفئران db / db: C57BLBS / J Iar - + Leprdb / + Leprdb) والفئران النموذجية لإصابة الكلى الحادة التي تنتجها إصابة نقص التروية الكلوية (IRI).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت الموافقة على جميع بروتوكولات التجارب على الحيوانات من قبل لجنة أخلاقيات الحيوان بجامعة جيتشي الطبية وتم إجراؤها وفقا لإرشادات استخدام ورعاية التجارب من دليل جامعة جيتشي الطبية لحيوانات المختبر. هنا ، أظهرنا أن miRNA يحاكي التوصيل إلى الكلى مما أدى إلى الإفراط في التعبير باستخدام الفئران UUO. تمت الموافقة على هذه الدراسة من قبل لجنة الأخلاقيات بجامعة جيتشي الطبية [الموافقة رقم 19-12 للتليف الكلوي ، 17-024 لعدوى الكلى الحادة (AKI) ، و 19-11 لاعتلال الكلية السكري].
1. إعداد مركب تقليد PEI-NPs-miRNA
ملاحظة: هنا ، يتم وصف تحضير PEI-NPs-miRNA-mimic13،14،15 و PEI-NPs-control-miRNA (كعنصر تحكم سلبي) لفأر واحد.
- قم بإعداد العناصر التالية:
- تحضير 10 ميكرولتر من PEI-NPs الخطية.
- تحضير 50 ميكرولتر من miRNAs المركبة صناعيا المذابة في الماء الخالي من النيوكلياز بتركيز 100 ميكرومتر (5 نانومول miRNA مذاب في 50 ميكرولتر من الماء الخالي من النيوكلياز).
- تحضير 50 ميكرولتر من الرنا المصهر المركب صناعيا (غير المستهدف) المذاب في الماء الخالي من النيوكلياز بتركيز 100 ميكرومتر (5 نانومول miRNA مذاب في 50 ميكرولتر من الماء الخالي من النيوكلياز).
- تحضير 5 ٪ و 10 ٪ حلول الجلوكوز. تأكد من توفر أنابيب الطرد المركزي الدقيقة سعة 1.5 مل وخلاط دوامة.
- قم بإذابة 10 ميكرولتر من PEI-NPs في 90 ميكرولتر من محلول الجلوكوز 5٪ في أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 مل. ثم ، دوامة الأنبوب بلطف وتدور لأسفل.
- امزج 50 ميكرولتر من miRNAs المركبة صناعيا (5 نانومول) المذابة في ماء خال من النيوكلياز (تركيز 100 ميكرومتر) مع 50 ميكرومتر من محلول الجلوكوز 10٪ في أنابيب الطرد المركزي الدقيقة سعة 1.5 مل. ثم ، دوامة الأنبوب بلطف وتدور لأسفل. هذه العملية تنتج miRNA المذاب في محلول الجلوكوز 5 ٪.
- امزج 100 ميكرولتر من PEI-NPs في محلول جلوكوز 5٪ و 100 ميكرولتر من miRNA مقلد (5 نانومول) في محلول جلوكوز 5٪. ثم ، دوامة الأنبوب بلطف وتدور لأسفل.
- احتضان الخليط لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة (RT) لإعداد مركب مستقر من محاكاة PEI-NPs-miRNA. يحتوي هذا المحلول على PEI-NPs وتقليد miRNA (5 نانومول) بنسبة النيتروجين (N) في البوليمر إلى الفوسفات (P) في الأحماض النووية (نسبة N / P) = 6 (الشكل 1).
ملاحظة: يمكن تحضير مركب PEI-NPs-control-miRNA باستخدام نفس العملية الموضحة في الخطوات 1.1-1.5 لجميع نماذج الفئران المصابة بأمراض الكلى الموصوفة في هذه المخطوطة (UUO ، اعتلال الكلية السكري ، و AKI). حجم حقن واحد من محاكاة PEI-NP-miRNAs هو نفسه 5 نانومول من تقليد miRNAs المترافق مع PEI-NPs عند نسبة N / P = 6. تعتمد مدة الحقن وتواتر كل محاكاة ل PEI-NP-miRNAs على نموذج المرض الذي يتم تطبيقه فيه.
2. تأكيد التسليم الكبير لمحاكاة miRNA إلى الكلى في الفئران UUO بواسطة PEI-NP عن طريق حقن الوريد الذيل باستخدام المجهر الفلوري
ملاحظة: هنا ، يتم وضع طريقة توصيل miRNA المنقى صناعيا إلى الكلى ، مما يشير إلى إنشاء طرق علاجية لأمراض الكلى المختلفة. باختصار ، تم إعطاء الفئران UUO حمض الكربوكسيل السيانين 3 (Cy3) المسمى miRNA مقلد يضاف إلى 100 ميكرولتر من PEI-NPs عبر الوريد الذيل. تم تأكيد التسليم إلى الكلى باستخدام الفحص المجهري الفلوري. تم وصف حمض الكربوكسيل PEI-NPs-cyanine3 (Cy3) المسمى miRNA (قليل النيوكليوتيدات) لفأر واحد. يمكن لهذه الطريقة توصيل تقليد miRNA بشكل كبير إلى الكلى في العديد من نماذج الفئران ، مثل الفئران UUO ، والفئران المصابة بأمراض الكلى السكرية ، وفئران AKI التي تنتجها IRI. هنا ، استخدمنا نموذج ماوس UUO لعرض الفيديو. تم وصف طريقة تحريض UUO سابقا في مكان آخر13. اتبع هذه البروتوكولات في غضون ستة أيام بعد جراحة UUO.
- قم بإعداد العناصر التالية:
- تحضير 2 ميكرولتر من PEI-NPs و 100 ميكرولتر من قليل النيوكليوتيدات مزدوجة الخيوط المسمى Cy3 [تقليد miRNA المسمى Cy3 (1 نانومول ؛ 10 ميكرومتر)].
- تحضير 5 ٪ و 10 ٪ حلول الجلوكوز. تأكد من توفر أنابيب الطرد المركزي الدقيقة سعة 1.5 مل وخلاط دوامة.
- استخدم أنبوب طرد مركزي بلاستيكي سعة 50 مل مع وجود ثقب صغير في الغطاء لعزل أوردة الذيل لفئران UUO.
- بالنسبة للفحص المجهري الفلوري ، قم بإعداد مركب درجة حرارة القطع المثلى (OCT) ، و cryostat ، والنيتروجين السائل ، والمحلول الملحي المخزن بالفوسفات (PBS) ، ومحاقن 1.0 مل بإبرة 27 جم ، والزجاج المطلي بالسيلان.
ملاحظة: يمكن تحضير Lotus tetragonolobus lectin المسمى بالفلورسين (علامة النبيبات القريبة) و 4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) للتلطيخ الاختياري للأنابيب القريبة ونوى الخلية.
- قم بإذابة 2 ميكرولتر من PEI-NPs في 98 ميكرولتر من محلول الجلوكوز 10٪ في أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 مل. ثم ، دوامة الأنبوب بلطف وتدور لأسفل.
- أضف 100 ميكرولتر من محاكاة miRNA المسمى Cy3 إلى 100 ميكرولتر من PEI-NPs في محلول جلوكوز 10٪ (محضر في الخطوة 2.2). ثم ، دوامة الأنبوب بلطف وتدور لأسفل.
- احتضان الخليط لمدة 15 دقيقة في RT لإعداد مركب مستقر من PEI-NPs-Cy3-المسمى miRNA-miRNA-mimic.
- ضع رأس ماوس UUO أولا في أنبوب طرد مركزي سعة 50 مل بدون تخدير ، ثم ضع الذيل من خلال الفتحة المعدة في الغطاء.
- املأ حقنة سعة 1.0 مل بإبرة 27 جم مع 200 ميكرولتر من مركب تقليد PEI-NPs-Cy3-miRNA.
- حقن PEI-NPs-Cy3-miRNA-mimic (200 ميكرولتر) عبر الوريد الخلفي للفأر باستخدام حقنة 1.0 مل مع إبرة 27 جرام.
ملاحظة: امسح وريد الذيل بصوف قطني مشبع بالإيثانول (70٪ -80٪) لتوسيع وريد الذيل وتطهير منطقة الحقن. - بعد ساعة واحدة من 200 ميكرولتر من الحقن المركب PEI-NPs-Cy3-miRNA-mimic ، قم بتخدير الماوس باستخدام الأيزوفلوران (4٪ -5٪) باستخدام جهاز مخدر مناسب للحيوانات الصغيرة. تأكيد عمق التخدير مع عدم وجود منعكس قرصة إصبع القدم. الحفاظ على التخدير مع إيزوفلوران (3 ٪) طوال الجراحة.
- بعد ذلك ، قم بعمل شق في الجلد والعضلات والأضلاع بالمقص الجراحي والملقط لكشف القلب. بعد إجراء شق في الأذين الأيمن ، قم بحقن PBS في البطين الأيسر لسحب الدم في جميع أنحاء الجسم حتى يتغير لون الكلى إلى اللون الأصفر الباهت (مما يشير إلى أن جسم الفأر بالكامل يتخلل مع برنامج تلفزيوني).
ملاحظة: يتم إجراء التروية القلبية لإزالة الدم بكفاءة في جميع أنحاء الجسم . - وقف isoflurane وإزالة الكلى من الفئران وغسلها مع برنامج تلفزيوني. بعد ذلك ، قم بإزالة الكبسولات الكلوية من الكلى وغسل الكلى مرتين باستخدام برنامج تلفزيوني.
- قم بتضمين عينات أنسجة الكلى في مركب OCT وقم بتجميدها في النيتروجين السائل.
- استخدم جهاز التبريد لتحضير المقاطع (بسمك 5 ميكرومتر). قم بتركيب الأقسام على شرائح زجاجية مطلية بالسيلان وقم بتثبيتها بنسبة 4٪ بارافورمالدهيد.
ملاحظة: يمكن اختياريا تلطيخ أنسجة الكلى باستخدام Lotus tetragonolobus lectin المسمى بالفلوريسئين (2 مجم / مل) عند RT لمدة 2 ساعة للأنابيب القريبة ، يليه DAPI (30 نانومتر في PBS) في RT لمدة 15 دقيقة لنوى الخلية. - اغسل الشرائح برفق مرتين باستخدام برنامج تلفزيوني.
- تصور تلطيخ التألق بواسطة المجهر الفلوري عند تكبير 100x و 400x وبرنامج التصوير المناسب.
3. تأكيد تغيرات miRNA المستهدفة بعد تسليم تقليد miRNA إلى الكلى بواسطة PEI-NP عن طريق حقن الوريد الذيل
- إجراء تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الفعلي (qRT-PCR) لتأكيد تناوب miRNA المستهدف.
ملاحظة: راجع المقالة المنشورة مسبقا للحصول على تفاصيل qRT-PCR18،19،20. تم تغيير نظام qRT-PCR المستخدم لإنشاء النتائج التمثيلية الواردة أدناه من قبل الشركة المصنعة. يجب إجراء qRT-PCR وفقا لأحدث بروتوكول للشركة المصنعة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تم اختيار miRNAs المستهدفة للتليف الكلوي واعتلال الكلية السكري و AKI الموصوفة أدناه بناء على المصفوفة الدقيقة و qRT-PCR و / أو أبحاث قاعدة البيانات لتطبيقات العلاج الجيني. لمزيد من التفاصيل ، راجع المنشورات السابقة13،14،15.
توصيل وتأثيرات miRNA-146a-5p-mimic باستخدام PEI-NPs في فئران التليف الكلوي13
أظهر التحليل المجهري الفلوري أن حقن الوريد...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
باستخدام البروتوكول المقدم في هذه المخطوطة ، يمكن ل PEI-NPs توصيل محاكاة miRNA إلى الكلى للحث على الإفراط في التعبير عن miRNAs المستهدفة ، مما يؤدي إلى تأثيرات علاجية في نماذج الفئران في الجسم الحي للعديد من أمراض الكلى ، بما في ذلك التليف الكلوي ومرض الكلى السكري و AKI.
طريقة تحضير مجمع PEI-NPs وتقليد miRNA بسيطة للغاية. يحبس السطح الموجب الشحنة ل PEI-NPs محاكاة miRNA عندما يتم خلطها فقط13،14،15،16
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن أصحاب البلاغ أنه ليس لديهم تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
تم دعم هذا العمل جزئيا من قبل JSPS KAKENHI (المنحة رقم 21K08233). نشكر Edanz (https://jp.edanz.com/ac) على تحرير مسودات هذه المخطوطة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 4',6-diamidino-2-phenylindole لتلوين النواة | Thermo Fisher Scientific | D-1306 | |
| Buffer RPE | Qiagen | 79216 | Wash buffer 2 |
| Buffer RWT | Qiagen | 1067933 | Wash buffer 1 |
| Control-miRNA-mimic (miRNA مركب اصطناعيا) | Thermo Fisher Scientific | غير معين | 5 '- UUCUCCGAACGUCACGUTT- 3 ' (الإحساس) 5'-ACGUGACACGUUCGGAGAATT-3 & prime; (مضاد للحساسية) |
| النوكليوتيدات ذات الخيط المزدوج المسمى Cy3 | Takara Bio Inc. | MIR7900 | |
| Lotus tetragonolobus lectin | Vector Laboratories Inc | FL-1321 | |
| In vivo-jetPEI | Polyplus | 101000021 | |
| MicroAmp Optical 96-well لوحة تفاعل ل qRT-PCR | Thermo Fisher Scientific | 4316813 | 96 بئر لوحة تفاعل |
| MicroAmp بصرية لاصقة | Thermo Fisher Scientific | 4311971 | فيلم لاصق للوحة تفاعل 96 بئرا |
| miRNA-146a-5p تقليد (miRNA مركب اصطناعيا) Thermo | Fisher Scientific | لم يتم تعيينه | 5'-UGAGAACUGAAUUCCAUGGU UT-3 & prime; (الإحساس) 5'-CCCAUGGAAUUCAGUUCUCAUU -3 & prime; (مضاد للحساسية) |
| miRNA-146a-5p التمهيدي | Qiagen | MS00001638 | غير متوفر لأن Qiagen قد غيرت مجموعات qRT-PCR (من نظام miScript miRNA PCR إلى نظام miRCURY LNA miRNA PCR من مايو 2021) |
| miRNA-181b-5p تحاكي (miRNA مركب اصطناعيا) | تصميم الجين | غير مخصص | 5'-AACAUUCAUUGCUGUCGGUGG GUU-3' |
| miRNA-181b-5p التمهيدي | Qiagen | MS00006083 | غير متوفر لأن Qiagen قد غيرت مجموعات qRT-PCR (من نظام miScript miRNA PCR إلى نظام miRCURY LNA miRNA PCR من مايو 2021) |
| miRNA-5100-mimic (miRNA مركب اصطناعيا) | تصميم الجين | لم يتم تعيينه | 5'-UCGAAUCCCAGCGGUGCCUCU -3 & prime ؛ |
| miRNA-5100-primer | Qiagen | MS00042952 | غير متوفر لأن Qiagen قد غيرت مجموعات qRT-PCR (من نظام miScript miRNA PCR إلى نظام miRCURY LNA miRNA PCR اعتبارا من مايو 2021) |
| miRNeasy Mini kit | Qiagen | 217004 | عمود الدوران المثبت بالغشاء في أنبوب تجميع سعة 2.0 مل |
| miScript II RT kit | Qiagen | 218161 | غير متوفر لأن Qiagen قد قام بتغيير مجموعات qRT-PCR (من نظام miScript miRNA PCR إلى نظام miRCURY LNA miRNA PCR من مايو 2021) |
| miScript SYBR Green PCR kit | Qiagen | 218073 | غير متوفر لأن Qiagen قد غيرت مجموعات qRT-PCR (من نظام miScript miRNA PCR إلى نظام miRCURY LNA miRNA PCR من مايو 2021) |
| التقطيع | QIA أعمدة دوران البوليمر الحيوي Qiagen | 79654 | في أنبوب |
| تجميع سعة 2.0 ملكاشف تحلل QIAzol | Qiagen | 79306 | كاشف التحلل القائم على الفينول / الجوانيدين |
| QuantStudio 12K Flex نظام PCR في الوقت الحقيقي | Thermo Fisher Scientific | 4472380 | أداة PCR في الوقت الحقيقي |
| QuantStudio 12K Flex الإصدار 1.2.1. | Thermo Fisher Scientific | 4472380 | برنامج أداة PCR في الوقت الحقيقي |
| مائي خال من RNase | Qiagen | 129112 | |
| RNU6-2 التمهيدي | Qiagen | MS00033740 | غير متوفر لأن Qiagen قد غيرت مجموعات qRT-PCR (من نظام miScript miRNA PCR إلى نظام miRCURY LNA miRNA PCR من مايو 2021) |
| Tissue-Tek OCT (مركب درجة حرارة القطع الأمثل) | Sakura Finetek Japan Co.، Ltd. | غير معين |
المراجع
- Mohr, A. M., Mott, J. L. Overview of microRNA biology. Seminars in Liver Disease. 35 (1), 3-11 (2015).
- Bushati, N., Cohen, S. M. microRNA functions. Annual Review of Cell and Developmental Biology. 23, 175-205 (2007).
- Simpson, K., Wonnacott, A., Fraser, D. J., Bowen, T. microRNAs in diabetic nephropathy: From biomarkers to therapy. Current Diabetes Reports. 16 (3), 35(2016).
- Yheskel, M., Patel, V. Therapeutic microRNAs in polycystic kidney disease. Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 26 (4), 282-289 (2017).
- Lv, W., et al. Therapeutic potential of microRNAs for the treatment of renal fibrosis and CKD. Physiological Genomics. 50 (1), 20-34 (2018).
- Dykxhoorn, D. M., Lieberman, J. The silent revolution: RNA interference as basic biology, research tool, and therapeutic. Annual Review of Medicine. 56, 401-423 (2005).
- Dykxhoorn, D. M., Palliser, D., Lieberman, J. The silent treatment: siRNAs as small molecule drugs. Gene Therapy. 13 (6), 541-552 (2006).
- Stewart, S. A., et al. Lentivirus-delivered stable gene silencing by RNAi in primary cells. RNA. 9 (4), 493-501 (2003).
- Deng, M., et al. Klotho gene delivery ameliorates renal hypertrophy and fibrosis in streptozotocin-induced diabetic rats by suppressing the Rho-associated coiled-coil kinase signaling pathway. Molecular Medicine Reports. 12 (1), 45-54 (2015).
- Zhou, Y., et al. Suppressor of cytokine signaling (SOCS) 2 attenuates renal lesions in rats with diabetic nephropathy. Acta Histochemica. 116 (5), 981-988 (2014).
- Tenenbaum, L., Lehtonen, E., Monahan, P. E. Evaluation of risks related to the use of adeno-associated virus-based vectors. Current Gene Therapy. 3 (6), 545-565 (2003).
- Lukashev, A. N., Zamyatnin, A. A. Viral vectors for gene therapy: Current state and clinical perspectives. Biochemistry. Biokhimiia. 81 (7), 700-708 (2016).
- Morishita, Y., et al. Delivery of microRNA-146a with polyethylenimine nanoparticles inhibits renal fibrosis in vivo. International Journal of Nanomedicine. 10, 3475-3488 (2015).
- Ishii, H., et al. MicroRNA expression profiling in diabetic kidney disease. Translational Research: The Journal of Laboratory and Clinical. 237, 31-52 (2021).
- Aomatsu, A., et al. MicroRNA expression profiling in acute kidney injury. Translational Research: The Journal of Laboratory and Clinical. (21), 00283-00288 (2021).
- Lungwitz, U., Breunig, M., Blunk, T., Gopferich, A. Polyethylenimine-based non-viral gene delivery systems. European Journal of Pharmceutics and Biopharmaceutics. 60 (2), 247-266 (2005).
- Swami, A., et al. A unique and highly efficient nonviral DNA/siRNA delivery system based on PEI-bisepoxide nanoparticles. Biochemical and Biophysical Research Communications. 362 (4), 835-841 (2007).
- Kaneko, S., et al. Detection of microRNA expression in the kidneys of immunoglobulin a nephropathic mice. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (161), e61535(2020).
- Yanai, K., et al. Quantitative real-time PCR evaluation of microRNA expressions in mouse kidney with unilateral ureteral obstruction. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (162), e61383(2020).
- Aomatsu, A., et al. A quantitative detection method for microRNAs in the kidney of an ischemic kidney injury mouse model. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (163), e61378(2020).
- Kushibiki, T., Nagata-Nakajima, N., Sugai, M., Shimizu, A., Tabata, Y. Enhanced anti-fibrotic activity of plasmid DNA expressing small interference RNA for TGF-beta type II receptor for a mouse model of obstructive nephropathy by cationized gelatin prepared from different amine compounds. Journal of Controlled Release: Official Journal of the Controlled Release Society. 110 (3), 610-617 (2006).
- Xia, Z., et al. Suppression of renal tubulointerstitial fibrosis by small interfering RNA targeting heat shock protein 47. American Journal of Nephrology. 28 (1), 34-46 (2008).
- Tanaka, T., et al. In vivo gene transfer of hepatocyte growth factor to skeletal muscle prevents changes in rat kidneys after 5/6 nephrectomy. American Journal of Transplantation: Official Journal of the American Society of Transplantation and the American Society of Transplant Surgeons. 2 (9), 828-836 (2002).
- Hamar, P., et al. Small interfering RNA targeting Fas protects mice against renal ischemia-reperfusion injury. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101 (41), 14883-14888 (2004).
- Ma, D., et al. Xenon preconditioning protects against renal ischemic-reperfusion injury via HIF-1alpha activation. Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 20 (4), 713-720 (2009).
- Wei, S., et al. Short hairpin RNA knockdown of connective tissue growth factor by ultrasound-targeted microbubble destruction improves renal fibrosis. Ultrasound in Medicine and Biology. 42 (12), 2926-2937 (2016).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
