يتم عزل المستعمرات الفطرية المسببة للأمراض الحشرية من عينات التربة الاستوائية باستخدام طعم تينيبريو ، طعم غاليريا ، وكذلك الوسط الاصطناعي الانتقائي ، أي أجار سكر العنب البطاطس المخصب بمستخلص الخميرة المكمل بالكلورامفينيكول ، الثيابيندازول ، وسيكلوهيكسيميد (وسط CTC).
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
مقارنة طرق عزل الفطريات المسببة للأمراض الحشرية من عينات التربة
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الهدف من هذه الدراسة هو مقارنة فعالية استخدام الطعوم الحشرية مقابل الوسط الانتقائي الاصطناعي لعزل الفطريات المسببة للأمراض الحشرية (EPF) من عينات التربة. التربة هي موطن غني للكائنات الحية الدقيقة ، بما في ذلك EPF التي تنتمي بشكل خاص إلى الأجناس Metarhizium و Beauveria ، والتي يمكن أن تنظم آفات المفصليات. تتوفر المنتجات البيولوجية القائمة على الفطريات في السوق بشكل رئيسي لمكافحة الآفات المفصلية الزراعية. ومع ذلك، وعلى الرغم من التنوع البيولوجي المتوطن المرتفع، لا يستخدم سوى عدد قليل من السلالات في المنتجات الحيوية التجارية في جميع أنحاء العالم. في هذه الدراسة ، تم استزراع 524 عينة تربة على أجار سكر العنب المخصب بالبطاطس المخصب بمستخلص الخميرة المكمل بالكلورامفينيكول والثيابيندازول والسيكلوهيكسيميد (وسط CTC). لوحظ نمو المستعمرات الفطرية لمدة 3 أسابيع. تم تحديد جميع Metarhizium و Beauveria EPF مورفولوجيا على مستوى الجنس. بالإضافة إلى ذلك ، تم تحديد بعض العزلات جزيئيا على مستوى الأنواع. كما تم مسح 24 عينة من أصل 524 عينة من عينات التربة هذه بحثا عن حدوث EPF باستخدام طريقة طعم الحشرات (Galleria mellonella و Tenebrio molitor). تم عزل ما مجموعه 51 سلالة EPF (41 Metarhizium spp. و 10 Beauveria spp.) من عينات التربة 524. تم عزل جميع السلالات الفطرية إما عن الأراضي الزراعية أو الأراضي العشبية. ومن بين العينات ال 24 المختارة للمقارنة، كانت 91.7 في المائة إيجابية ل EPF باستخدام طعم غاليريا ، و 62.5 في المائة باستخدام طعم تينيبريو ، و 41.7 في المائة باستخدام CTC. أشارت نتائجنا إلى أن استخدام طعوم الحشرات لعزل EPF عن التربة أكثر كفاءة من استخدام وسط CTC. إن مقارنة طرق العزل بالإضافة إلى تحديد وحفظ EPF لها تأثير إيجابي على المعرفة حول التنوع البيولوجي. تحسين مجموعة EPF يدعم التطور العلمي والابتكار التكنولوجي.
المقدمة
التربة هي مصدر العديد من الكائنات الحية الدقيقة ، بما في ذلك الفطريات المسببة للأمراض الحشرية (EPF). يتم التعرف على هذه المجموعة الخاصة من الفطريات من خلال قدرتها على استعمار وغالبا ما تقتل مضيفات المفصليات ، وخاصة الحشرات1. بعد العزل والتوصيف واختيار السلالات الخبيثة والتسجيل ، يتم إنتاج EPF بكميات كبيرة لمكافحة الآفات المفصلية ، مما يدعم أهميتها الاقتصادية2. وفقا لذلك ، يعتبر عزل EPF الخطوة الأولى لتطوير مبيد حيوي. Beauveria spp. (Hypocreales: Cordycipitaceae) و Metarhizium spp. (Hypocreales: Clavicipitaceae) هي الفطريات الأكثر شيوعا المستخدمة لمكافحة الآفات المفصلية3. تم عزل E....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وبما أن هذه الدراسة قد توصلت إلى التراث الوراثي البرازيلي، فقد سجل البحث في النظام الوطني لإدارة التراث الوراثي والمعارف التقليدية المرتبطة به (Sisgen) تحت الرمز AA47CB6.
1. أخذ عينات التربة
- اجمع 800 غرام من التربة (مع أو بدون جذور نباتية ثانوية حادثة) على عمق 10 سم باستخدام مجرفة صغيرة. تخزينها في أكياس البولي بروبلين في درجة حرارة الغرفة حتى بداية التجربة.
ملاحظة: يمكن أيضا جمع الجذور الصغيرة حيث يتم الإبلاغ عن أن EPF لديها كفاءة ريزوسفير. كلما كانت معالجة العينات أسرع ، كان ذلك أفضل لأن الجراثيم الفطرية قد تكون أقل قابلية للتطبيق بمرور الوقت. في هذه الدراسة ، تم تحليل العينات بعد ما لا يزيد عن 7 أيام من الجم....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تم جمع ما مجموعه 524 عينة تربة من الأراضي العشبية: مراعي الماشية (165 عينة) ، والغابات الاستوائية الأصلية (90 عينة) ، وضفاف البحيرة (42 عينة) ، والأراضي المزروعة / الزراعية (227 عينة) بين عامي 2015 و 2018 في ولاية ريو دي جانيرو ، البرازيل. وترد في الجدول التكميلي 1 تفاصيل الإحداثيات الجغرافية للعينات الإيجابية ل EPF.
ومن بين 524 عينة من التربة، تم تحليل 500 عينة فقط باستخدام وسط CTC، وتم تحليل 24 عينة بالتزامن باستخدام ثلاثة أشكال من العزل (Galleria-bait، و Tenebr.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
موائل التربة الطبيعية والزراعية هي بيئات نموذجية ل EPF22 وخزان طبيعي ممتاز. في هذه الدراسة ، تم تناول طريقتين لعزل EPF باستخدام طعوم الحشرات مقابل الوسط الانتقائي. الخطوة الأولى للعزل هي جمع عينات التربة. التخزين السليم وتحديد عينات التربة أمر بالغ الأهمية. تعد المعلومات المتعلقة بخطوط الطول والعرض ونوع التربة والمنطقة الأحيائية ضرورية للدراسات التي تنطوي على مواضيع وبائية ونمذجة وجيومكانية23,24. بعد الجمع ، يوصى بمعالجة العينات في أقرب وق.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
وقد مولت هذه الدراسة جزئيا من قبل لجنة الدراسات العليا في البرازيل (CAPES) ورمز التمويل 001 ومؤسسة كارلوس شاغاس فيلهو لإنفاذ الحقوق الدستورية في منطقة الأعمال العليا في ريو دي جانيرو (FAPERJ) (رقم المشروع E-26/010.001993/2015)، والمجلس الوطني للتنمية العلمية والتكنولوجية (CNPq) من البرازيل.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| أوتوكلاف | فينيكس لوفيركو | 9451 | |
| خزانة السلامة الحيوية | Airstream ESCO | AC2-4E3 | |
| Chloramphenicol | Sigma-Aldrich | C0378 | |
| غرف المناخ | Eletrolab | EL212 / 3 | |
| Coverslip | RBR | 3871 | |
| Cycloheximide | Sigma-Aldrich | C7698 | |
| Drigalski spatula | Marienfeld | 1800024 | |
| تطبيق GPS | تطبيق تحديد الموقع الجغرافي | 2.1.2005 | |
| محلول لاكتوفينول الأزرق | سيجما ألدريتش | 61335 | |
| مجهر | زايس أكسيو ستار بلس | 1169 149 | |
| كاميرا مجهر | زايس أكسيوكام 105 لون | 426555-0000-000 | |
| مجهر softare | Zen lite Zeiss 3.0 | ||
| Microscope slide | Olen | k5-7105-1 | |
| Microtube | BRAND | Z336769-1PAK | |
| لوحات بتري | Kasvi | K30-6015 | |
| طرف ماصة | Vatten | VT-230-200C / VT-230-1000C | |
| ماصة | HTL - أواني بلاستيكية Labmatepro | LMP 200 / LMP 1000 | |
| Prafesta descart á أكياس البولي بروبلين Veis | 8314 | ||
| Extrusa | 38034273 / 5561 | ||
| أجار سكر العنب البطاطا | Kasvi | K25-1022 | |
| برنامج المنشور 9.1.2 | مجرفة وسادة | ||
| البياني Tramontina | 77907009 | ||
| Tenebrio mollitor< / em> | Safari | QP98DLZ36 | |
| Thiabendazole | Sigma-Aldrich | T8904 | |
| Tween 80 | Vetec | 60REAVET003662 | |
| Vortex | Biomixer | QL-901 | |
| مستخلص الخميرة | Kasvi | K25-1702 |
المراجع
- Roberts, D. W., St. Leger, R. J. Metarhizium spp., cosmopolitan insect-pathogenic fungi: Mycological aspects. Advances in Applied Microbiology. 54, 1-70 (2004).
- do Nascimento Silva, J., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
