تمت الموافقة على جميع تطبيقات هذا النظام على التجارب على الحيوانات من قبل اللجنة الأخلاقية بجامعة أنتويرب وأجريت وفقا للقوانين البلجيكية والفلمنكية. التزمت المنهجية بالمبادئ التوجيهية ASAB / ABS لاستخدام الحيوانات في البحوث السلوكية. المعهد الملكي البلجيكي للعلوم الطبيعية (Koninklijk Belgisch Instituut voor Natuurwetenschappen; KBIN) قدمت تراخيص لجميع الباحثين والموظفين.
1. إنشاء النظام التجريبي
- احصل على مصباح (ق) LED واسع الطيف لاستخدامه في إنشاء ALAN. خذ مصباح (مصابيح) LED من مصباح LED أمامي. استخدم إما مصباح LED واحد أو مصابيح LED متعددة (على سبيل المثال ، 4) واسعة الطيف للحصول على إضاءة أكثر انتشارا (الشكل 1).
ملاحظة: كتعديل، يمكن استخدام مصابيح LED ذات الخصائص الطيفية المختلفة (على سبيل المثال، الأحمر مقابل الأزرق) ولكن يجب الحصول عليها من مصدر مختلف (انظر المادة التكميلية ل Grunst et al. 201915 للاطلاع على الخصائص الطيفية لمصابيح LED المستخدمة في الدراسات السابقة باستخدام هذا النظام).
- تصميم نظام لتركيب مصابيح LED جنبا إلى جنب مع كاميرا الأشعة تحت الحمراء للسماح بالمراقبة السلوكية. يمكن للباحثين تحقيق هذه الغاية بعدة طرق.
- الخيار 1. أدخل مصباح LED واحد واسع الطيف في صندوق العش بشكل منفصل في أنبوب بلاستيكي مجاور لكاميرا الأشعة تحت الحمراء مثبتة بمادة لاصقة على لوحة بلاستيكية أو معدنية تتناسب مع صندوق العش (الشكل 1A ، B).
- الخيار 2. قم بتركيب كاميرا الأشعة تحت الحمراء في وضع مركزي على لوحة بلاستيكية أو معدنية ثم قم بتركيب مصابيح LED في مواضع ثابتة على اللوحة المحيطة بكاميرا الأشعة تحت الحمراء (الشكل 1C).
- تصميم وسيلة لتوصيل النظام بمصدر طاقة (بطارية) ومؤقت.
- استخدم سكينا أو مثقبا لصنع بساتين في جانب صندوق العش يمكن من خلالها تمديد موصلات الأسلاك لتوصيل النظام ببطارية Fe (12 فولت ؛ 120 واط في الساعة) ومؤقت محلي الصنع (12 فولت).
- تصميم حاوية خشبية خضراء داكنة تتطابق مع صندوق العش في التلوين والطول والعرض (على سبيل المثال ، كانت صناديق العش المستخدمة في الدراسات السابقة أبعادها: 120 مم × 155 مم × 250 مم) ، ومع فتح جانب واحد عبر مفصلة لإيواء البطارية ، ومسجل الفيديو ، ونظام مؤقت لمصابيح LED (الشكل 2 ؛ الشكل التكميلي 1 والشكل التكميلي 2).
- تصميم وسيلة يمكن من خلالها ضبط كثافة ALAN.
- احصل على مقاوم (تعتمد القيمة على جهد البطارية والإضاءة) وقم بتوصيله في سلسلة بمصباح LED (LED).
- تصميم صناديق "وهمية" بنفس أبعاد العبوات التي تضم المؤقت والبطارية لاستخدامها في تعويد الطيور على النظام (أي كما في الشكل 2A ، ولكن بدون الإلكترونيات الداخلية).
ملاحظة: يناقش القسمان 2 و 3 الطرق خطوة بخطوة المستخدمة لدراسة آثار ALAN على الكائن البؤري.

الشكل 1: نظامان يتألفان من كاميرات الأشعة تحت الحمراء وضوء (ضوء) LED المستخدم لمعالجة ALAN داخل صناديق العش . (أ) المنظر العلوي لصندوق العش مع لوحة تحمل النظام القديم في مكانه. (ب) نظام أقدم مع 1 LED واسع الطيف لمعالجة ALAN والكاميرا المركزية مع 10 مصابيح LED بالأشعة تحت الحمراء (ج) نظام أحدث مع 4 مصابيح LED واسعة الطيف وكاميرا الأشعة تحت الحمراء المركزية مع 4 مصابيح LED تعمل بالأشعة تحت الحمراء. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 2: البطارية محلية الصنع ووحدة المؤقت المستخدمة لمعالجة سلوك ALAN وتسجيل الفيديو . (أ) الوحدة محاطة داخل صندوق خشبي مثبت أعلى صندوق العش. (ب) عرض الإلكترونيات داخل الوحدة. تمتد الموصلات من داخل صندوق العش إلى العلبة الخشبية لتوصيل الإلكترونيات بكاميرا الأشعة تحت الحمراء ومصابيح LED واسعة الطيف. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
2. تخطيط التجربة وضبط كثافة وتوقيت آلان
- تحديد شدة الضوء المطلوبة التي تعرض لها الحيوانات.
- فكر بعناية في شدة الضوء التجريبية التي يجب استخدامها لإنتاج نتائج ذات مغزى تجيب على سؤال البحث. وبوجه عام، سيعني ذلك اختيار شدة الضوء ذات الصلة بالبيئة، والتي من المرجح أن تواجهها الحيوانات الحرة النطاق (انظر الجدول 1 للحصول على الإرشادات).
- اضبط مصابيح LED على شدة الضوء المطلوبة (على سبيل المثال ، 1-3 لوكس ، كما هو مستخدم في الدراسات السابقة ؛ الجدول 1 والجدول 2).
- قبل وضعه في الحقل ، ضع النظام على صندوق عش يؤخذ إلى المختبر لمعايرة شدة الضوء. قم بتوصيل مصابيح LED بمصدر الطاقة، كما هو موضح أدناه (قسم البروتوكول 3).
- اضبط الضوء المنبعث من مصابيح LED على الكثافة المطلوبة (lux) عن طريق وضع مقياس ضوء على مستوى الطائر داخل صندوق العش (~ 8 سم من الأسفل) وفي نفس الوقت ضبط المقاوم في سلسلة مع مصابيح LED.
ملاحظة: من الممكن تحقيق كثافة إضاءة منخفضة جدا (على سبيل المثال، مستويات توهج السماء الريفية؛ 0.01 لوكس).
- حدد الإطار الزمني لتعريض الحيوانات ل ALAN.
- تحديد طول وتوقيت التعرض طوال الليل. على سبيل المثال ، يمكن للمرء أن يعرض الحيوانات على ALAN طوال الليل ، لجزء فقط من الليل ، أو يترك فترة من الظلام في منتصف الليل لتقليل درجة الاضطراب.
- في الحالات التي يجب أن يدخل فيها إلى صندوق العش (أو منطقة محددة) ليتعرض ل ALAN ، فكر أيضا في ما إذا كان يجب تشغيل الضوء قبل أو بعد احتمال حدوث حدث الدخول.
- اضبط المؤقت للتحكم في فترة التعرض للضوء أثناء الليل.
- اضبط المؤقت المتصل بمصابيح LED واسعة الطيف بحيث يتم تشغيل الضوء وإيقافه في فترات محددة (على سبيل المثال ، في 2 ساعة على الأقل قبل غروب الشمس ؛ إيقاف 2 ساعة بعد شروق الشمس).
ملاحظة: تسمح كاميرا الأشعة تحت الحمراء بتسجيل سلوك الحيوان في وقت واحد طوال مدة التعرض للضوء وستكون قيد التشغيل طالما أنها متصلة ببطارية مشحونة.
- تحديد التصميم التجريبي المناسب للاستخدام في سؤال (أسئلة) البحث المستهدف.
ملاحظة: بالنسبة لبعض الأسئلة، سيكون التصميم التجريبي للمقاييس المتكررة هو الخيار الأقوى (على سبيل المثال، كيف يؤثر التعرض ل ALAN على سلوك النوم؟). بالنسبة للآخرين ، ستكون هناك حاجة إلى مجموعات ضابطة وتجريبية مقترنة (على سبيل المثال ، كيف يؤثر التعرض ل ALAN على فقدان التيلومير في الأعشاش النامية؟).
| المصدر/مستوى التعرض | الكثافة (لوكس) |
| ضوء الشمس الكامل | 103000 |
| ضوء القمر الكامل | 0.05–1 |
| توهج السماء الحضرية | 0.2–0.5 |
| التعرض للطيور الشحرور الأوروبية التي تعيش بحرية | 0.2 (0.07–2.2) |
| الدراسات التجريبية السابقة باستخدام النظام | 1–3 |
| أضواء الشوارع LED | ~ 10 |
| أضواء الشوارع الصوديوم منخفضة الضغط | ~ 10 |
| الصوديوم عالي الضغط | ~ 10 |
| الإضاءة الفلورسنت | 300 |
| هاليد معدني | 400–2000 |
الجدول 1: شدة الضوء المميزة في البيئة 3,9، ومستويات تعرض الطيور الحرة المدى41، والشدة المستخدمة في الدراسات السابقة باستخدام هذا النظام (المراجع في الجدول 2).
3. تنفيذ التعرض ل ALAN
- اعتاد الحيوانات على الإعداد التجريبي.
- إذا كان ذلك ممكنا في سياق التجربة ، اعتاد الحيوانات على الإعداد عن طريق وضع صناديق وهمية في الجزء العلوي من صناديق العش قبل يوم واحد على الأقل من التجربة لتقليل آثار النفور من الجدة.
- مسح الأفراد المنسقين.
- تناسب الحيوانات في مجتمع الدراسة مع علامات جهاز الإرسال والاستقبال التكاملي السلبي (PIT) للسماح بتحديد الهوية داخل صناديق العش دون إزعاج الطيور.
- في التجارب التي تنطوي على تأثير ALAN على سلوك النوم ، قم بزيارة صناديق العش في الليلة السابقة للتجربة ومسح الصناديق باستخدام قارئ تحديد الترددات اللاسلكية (RFID) لتحديد الطيور التي تجثم في الداخل.
- في التجارب خلال موسم التكاثر التي تنطوي على تعرض الأعشاش النامية ل ALAN ، راقب باستمرار (على سبيل المثال ، كل يومين) صناديق العش ، وتحقق من محتويات العش وهوية البالغين. اختر بعناية صناديق العش التي تحتوي على حضنات ذات خصائص معينة (أي حجم الحضنة المشروطة ، وكلا الوالدين الحاضرين والتغذية) لاستخدامها في التجربة.
- حدد التجربة ونفذها.
- بالنسبة للتجارب التي تنطوي على سلوك النوم ، قم بتنفيذ تصميم مقاييس متكررة عن طريق تسجيل الأفراد الذين ينامون في ظروف الظلام أولا لمدة ليلة واحدة على الأقل لتسجيل النوم دون إزعاج في غياب ALAN (العلاج الضابط) باتباع الخطوات 3.3.2-3.3.21.
- تحقيقا لهذه الغاية ، تأكد من مزامنة الوقت على كاميرات الأشعة تحت الحمراء مع التوقيت المحلي قبل نقلها إلى الميدان.
- أدخل بطاقة SD في فتحة SD في مسجل DVR الصغير المجاور للبطارية (الشكل 2B ؛ الشكل التكميلي 2). تحقق للتأكد من أن بطاقة SD فارغة، وإذا لم يكن الأمر كذلك، فقم بمسح البيانات التي تحتوي عليها.
- قبل 2 ساعة على الأقل من بداية الظلام ، قم بإزالة الصندوق الوهمي من أعلى صندوق العش.
- افتح غطاء صندوق العش.
- ضع اللوحة التي تحتوي على كاميرا الأشعة تحت الحمراء داخل صندوق العش مع توجيه هدف الكاميرا لأسفل.
- قم بتمديد الموصلات الإلكترونية خارج البستان في صندوق العش.
- أغلق غطاء صندوق العش.
- ضع العلبة التي تحتوي على البطارية والمسجل والمؤقت أعلى صندوق العش.
- قم بتوصيل موصلات طاقة البطارية. قم بتوصيل الموصل الأحمر من المسجل بالموصل الأبيض من الكاميرا (الصوت) ، والموصل الأصفر من المسجل إلى الموصل الأصفر من الكاميرا (الفيديو) ، والموصل الأسود من البطارية إلى الموصل الأحمر من الكاميرا (الطاقة) (الشكل التكميلي 1 والشكل التكميلي 2).
- اضغط على زر التسجيل لبدء تسجيل الكاميرا.
ملاحظة: لن يتم ضبط المؤقت و/أو لن يتم توصيل الطاقة بالمؤقت الذي يتحكم في مصابيح LED بحيث لا يتم إنتاج أي ALAN في ليالي التحكم.
- تحقق من شاشة TFT صغيرة للتأكد من بدء التسجيل وأن الصورة صحيحة. يوجد منفذ لتوصيل شاشة tft أسفل المسجل (الشكل التكميلي 2).
- بعد حوالي 1 ساعة من حلول الظلام ، ارجع إلى مربع العش وتحقق من هوية الطائر النائم في الداخل عن طريق تحريك قارئ جهاز الإرسال والاستقبال RFID حول الجزء السفلي والجانبين من مربع العش وتسجيل رقم التعريف الفريد الذي تم توصيله من علامة PIT.
- في صباح اليوم التالي لتسجيل التحكم ، بعد 2 ساعة على الأقل من شروق الشمس ، عد إلى صندوق العش وجمع نظام البطارية وكاميرا الأشعة تحت الحمراء.
- مرة أخرى ، ضع صندوقا وهميا أعلى صندوق العش.
- في المختبر أو المكتب ، اشحن البطارية وقم بإزالة بطاقة SD وتنزيلها من المسجل لجمع البيانات السلوكية.
ملاحظة: يبلغ عمر البطاريات حوالي 30 ساعة في الظروف الباردة لتمكين التسجيل طوال الليل، ولكن يجب إعادة شحنها بالكامل بين الليالي المتتالية من التسجيل.
- بعد تنزيل البيانات بنجاح ، امسح البيانات من بطاقة SD ثم أعد إدخالها في مسجل DVR الصغير.
- في الليلة التالية ، قم بتنفيذ علاج التعرض للضوء (على سبيل المثال ، 1-3 لوكس ، كما هو مستخدم في التجارب السابقة باستخدام النظام ؛ الجدول 1 والجدول 2).
- اضبط نظام المؤقت للفترة الزمنية المطلوبة من التعرض للضوء.
- اتبع نفس الخطوات (3.3.2-3.3.17) الموضحة أعلاه لتسجيل عنصر التحكم، ولكن قم أيضا بتوصيل المؤقت بالطاقة ومصابيح LED بالمؤقت (الشكل التكميلي 1 والشكل التكميلي 2).
- إذا رغبت في ذلك ، كرر تسجيل التحكم (لسلوك النوم في ظل ظروف الظلام ، أي غياب ALAN) في الليلة الثالثة.
- بالنسبة للتجارب التي تنطوي على تعرض الأعشاش ل ALAN ، استخدم الحضنات الضابطة والتجريبية كما هو موضح في الخطوات 3.3.23-3.3.25.
- ضع صناديق وهمية (تفتقر إلى الإلكترونيات) فوق صناديق العش من حضنات التحكم وتعامل مع كل من العشوش الضابطة والتجريبية بطرق مماثلة.
- تنفيذ التعرض التجريبي ل ALAN للصناديق التجريبية. خلال الفترة التجريبية ، قم بتركيب نظام LED وكاميرا الأشعة تحت الحمراء داخل صندوق العش ، كما هو موضح أعلاه ، واضبط المؤقت للتحكم في الفترة المطلوبة من التعرض للضوء.
- أعد شحن البطاريات. بالنسبة للتجارب التي تنطوي على ليال متعددة من التعرض للضوء وتسجيل الفيديو ، قم بجمع الأنظمة كل صباح لإعادة شحن البطاريات خلال النهار ثم استبدال النظام في المساء.
- جمع البيانات عن متغير (متغيرات) الاستجابة ذات الاهتمام.
- إذا كان السلوك داخل مربع العش هو متغير الاهتمام ، فستسمح كاميرا الأشعة تحت الحمراء بتوثيق السلوك في وقت واحد (على سبيل المثال ، سلوك النوم ؛ الشكل 3).
- جمع أي بيانات أخرى ذات أهمية عبر طرق مراقبة إضافية، مع أخذ العينات في نقاط زمنية متغيرة (على سبيل المثال، عينات الدم المأخوذة قبل وبعد التعرض للضوء15).

الشكل 3: صورة الأشعة تحت الحمراء لحلمة كبيرة داخل صندوق عش مكشوف ل ALAN . (A) النوم و (B) تنبيه حلمة كبيرة يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.