مقالة منهجية

تصور تطور الندبة باستخدام فحص SCAD - فحص تندب الجلد خارج الموقع الطبيعي

DOI:

10.3791/63808

⸱

أبريل 28, 2022

 ,  ,  ,  , 
1Institute of Regenerative Biology and Medicine, Helmholtz Zentrum München, 2School of Medicine, Klinikum Rechts der Isar, Department of Plastic and Hand Surgery, Technical University of Munich

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف هذا البروتوكول توليد نبات اللفافة الجلدية المسمى "SCar مثل الأنسجة في طبق" أو SCAD. يسمح هذا النموذج بتصور غير مسبوق للخلايا الليفية المفردة أثناء تكوين الندبة.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

إن استجابة الثدييات العالمية لسد جروح الأنسجة العميقة هي من خلال تكوين الندبات وتقلص الأنسجة ، بوساطة الخلايا الليفية المتخصصة في اللفافة. على الرغم من الأهمية السريرية لتشكيل الندوب وضعف التئام الجروح ، فإن فهمنا لديناميكيات الخلايا الليفية اللفافة في التئام الجروح سريع بسبب عدم وجود فحوصات ذات صلة تمكن من التصور المباشر لتصميم رقصات الخلايا الليفية والديناميكيات في البيئات المعقدة مثل جروح الجلد. تقدم هذه الورقة بروتوكولا لتوليد ندوب جلدية خارج الموقع باستخدام SCAD أو "أنسجة تشبه SCar في طبق" تحاكي البيئة المعقدة للجروح الجلدية. في هذا الفحص ، يتم استئصال الجلد كامل السماكة 2 مم وزراعته رأسا على عقب في الوسائط لمدة 5 أيام ، تتطور خلالها الندوب وتقلصات الجلد بشكل موحد. تتيح هذه المنهجية، إلى جانب نماذج الفئران المعدلة وراثيا الخاصة بسلالة الخلايا الليفية، تصور سلالات الخلايا الليفية الفردية عبر عملية إصلاح الجرح بأكملها. بشكل عام ، يساعد هذا البروتوكول الباحثين في فهم العمليات والآليات الأساسية لإصلاح الجروح ، واستكشاف آثار المعدلات مباشرة على نتائج التئام الجروح.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التئام الجروح هو عملية لاستعادة الجروح المخترقة. تؤدي إصابات الأنسجة في اللافقاريات إلى تجديد جزئي أو كامل. في المقابل، تستجيب الثدييات للإصابات العميقة عن طريق التندب، وهي عملية مصممة خصيصا لإغلاق الجروح بسرعة باستخدام سدادات كثيفة من ألياف المصفوفة التي تقلل من المنطقة المخترقة وفي الوقت نفسه تشوه الموقع المصاب بشكل دائم1،2،3. حروق الجلد الكبيرة أو الجروح المفتوحة العميقة في الثدييات تؤدي إلى أنماط ظاهرية مرضية مثل الندوب الضخامية أو الجدرة 4,5. هذه الندوب الوفيرة تسبب عبئا هائلا على أنظمة الرعاية الصحية السريرية وا....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يقدم النموذج المعروض أدناه وصفا مفصلا خطوة بخطوة لجيل فحص SCAD كما هو موضح بإيجاز في Jiang et al.، 202013. تم إجراء تحضيرات عينة SCAD بعد التضحية بالحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية الدولية وحكومة بافاريا العليا. تم إيواء الحيوانات في منشأة الحيوانات في مركز هيلمهولتز في ميونيخ. تم الحفاظ على الغرف مع الرطوبة المثلى ودرجة حرارة ثابتة مع دورة ضوء 12 ساعة. تم تزويد الحيوانات بالطعام والماء المجاني.

1. إعداد أنسجة SCAD

  1. التضحية الجراء حديثي الولادة في يوم ما بعد الولادة 0 أو اليوم 1 (P0 أو P1).
  2. قم باستئصال الجلد الظهري الظهري كامل السماكة بعناية 1.5 سم على الأقل 1.5 سم حتى طبقة....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يمكن فصل توليد SCADs إلى ثلاث خطوات أساسية: حصاد الجلد مرة أخرى من الفئران P0-P1 ، وتوليد لكمات خزعة كاملة السماكة ، وزراعة لاحقة من السكادس الفردية تصل إلى 5 أيام في 96 لوحة بئر. كقراءة ، يمكن تطبيق هذا الفحص بشكل أكبر لتحليل الجوانب المكانية والزمنية للتندب. يستخدم التحليل المكاني 2D و 3D وضع العلامات المناعية للأنسجة لدراسة التوطين المكاني للمكونات الخلوية والمصفوفة داخل الأنسجة الندبية النامية. تسمح الدراسات المكانية الزمانية بتصور هذه الندوب خارج الموقع باستخدام بروتينات الفلورسنت الجوهرية أو الخارجية للأنس.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم بالفعل تطوير العديد من النماذج لفهم تكوين الندبات بعد الإصابة. وفي حين أحرز الكثير من أوجه التقدم في هذا الصدد، فإن الآليات الفعلية لا تزال غير واضحة. على النقيض من التقنية السابقة ، يتضمن نموذج SCAD جميع أنواع الخلايا والطبقات الجلدية ، وبالتالي الحفاظ على تعقيد الجلد الأصلي18,19. هذه المنهجية قادرة على توليد مجموعات البيانات الأساسية المهمة في فهم الآليات الجزيئية التي تدفع تكوين الندبة. تم تصميم الفحص بطريقة بسيطة ، أضيق الحدود ، ولكنها قادرة على إنتاج قراء.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

جميع المؤلفين يعلنون عدم وجود مصالح متنافسة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نحن نقدر جميع المؤلفين المشاركين في Jiang et al. 2020 للمساهمة في تطوير منهجية SCAD13. نشكر الدكتور ستيفن ديتزل ومرفق التصوير الحيوي الأساسي في جامعة لودفيغ ماكسيميلان على الوصول إلى نظام الفوتون المتعدد. تم دعم Y.R. من قبل مؤسسة Else-Kröner-Fresenius-Stiftung (2016_A21) ، ومنحة مجلس البحوث الأوروبي الموحد (ERC-CoG 819933) ، ومؤسسة LEO (LF-OC-21-000835).

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
10٪ توين 20 ، منظفات غير أيونيةمختبرات بيوراد1610781
ألبومين مصل البقر ، الإيثانول البارد فراكتسيجماA4503-50G
DMEM / F-12 ، HEPES ، بدون فينول أحمر -500 ملتقنيات LIFE11039021
DPBS ، بدون كالسيوم ، خال من المغنيسيومجيبكو14190169
إبريديا كريوستار NX70 CryostatThermo Scientific
Epredia SuperFrost Plus التصاق الشرائحفيشر العلميةJ1800AMNZالتصاق الشرائح
مصل الأبقار الجنينية ، مؤهل ، معطل بالحرارة ، معتمد من الاتحاد الأوروبي ، أمريكا الجنوبية Origin-500 mLLIFE Technologies  ؛ 10500064
Fluoromount-G مع DAPILife Technologies00 4959 52وسط تركيب مع ملقط DAPI
منحني بنقاط دقيقة مع دبوس توجيهي من الفولاذ المقاوم للصدأ (ملاقط) بطول 125 ممفيشر Scientific12381369
الجيلاتين من جلد الخنازيرSigmaG2500-100G
GlutaMAX Supplement-100 ملتقنيات LIFE35050038
HBSS ، الكالسيوم ، المغنيسيوم ، لا الفينول الأحمر 500 ملLIFE Technologies14025092
حضانة غاز Ibidi لنظام حضانة غاز Ibidi ل CO2< / sub> و O2< / sub>Ibidi11922
Ibidi نظام التدفئةIbidi10915
Leica SP8 مجهر عمودي - إثارة متعددة الفوتون 680 & ndash ؛ 1300 نانومترLeicaمجهزة بهدف غمس الماء 25x (HC IRAPO L 25x / 1.00 & thinsp ؛ W) بالاشتراك مع ليزر قابل للضبط (Spectra-Physics, InSight DS +  أحادي) أحادي
الأحماض الأمينية غير الأساسيةLIFE Technologies11140035
NuSieve GTG Agarose ، 25 جمBiozym / Lonza859081
OCT تضمين مصفوفةCarlroth6478.1
بارافورمالدهيد ، 16٪ وزن / حجم AQ. 10 × 10 ملVWR International43368.9M
Pen-StrepGibco15140122
Stiefel Biopsy-Punch 2 ممStiefel270130
مقص تشريح حاد / حاد مستقيم 11.4 سمفيشر ساينتفيك15654444
ثيميروسال بيوكسترا ، 97٪ & 101٪سيجما ألدريتشT8784-1G
Zeiss Axioimager M2 مجهر مستقيمزايس
نظام

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Longaker, M. T., et al. Adult skin wounds in the fetal environment heal with scar formation. Annals of Surgery. 219 (1), 65-72 (1994).
  2. desJardins-Park, H. E., Foster, D. S., Longaker, M. T. Fibroblasts and wound healing: an update. Regenerative Medicine. 13

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة