يصف البروتوكول الحالي تحريض التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي في نموذج فأر باستخدام بروتين سكري قليل التغصن المايلين ومراقبة عملية المرض باستخدام نظام تسجيل سريري. يتم تحليل الأعراض التجريبية المرتبطة بالتهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي باستخدام تحليل التصوير المقطعي المحوسب الدقيق لعظم الفخذ واختبار المجال المفتوح لتقييم عملية المرض بشكل شامل.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
مؤشرات الحث والتقييم المتنوعة لالتهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
التصلب المتعدد (MS) هو مرض مناعي ذاتي نموذجي يصيب الجهاز العصبي المركزي (CNS) ويتميز بالتسلل الالتهابي وإزالة الميالين وتلف المحور العصبي. في الوقت الحالي، لا توجد تدابير لعلاج مرض التصلب العصبي المتعدد تماما، ولكن تتوفر علاجات متعددة معدلة للمرض (DMT) للسيطرة على تطور المرض والتخفيف من حدته. هناك أوجه تشابه كبيرة بين السمات المرضية للجهاز العصبي المركزي لمرضى التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي (EAE) ومرضى التصلب العصبي المتعدد. تم استخدام EAE على نطاق واسع كنموذج تمثيلي لتحديد فعالية أدوية التصلب المتعدد واستكشاف تطوير علاجات جديدة لمرض التصلب العصبي المتعدد. الحث النشط ل EAE في الفئران له تأثير مستقر وقابل للتكرار وهو مناسب بشكل خاص لدراسة آثار الأدوية أو الجينات على التهاب الأعصاب المناعي الذاتي. تتم مشاركة طريقة تحصين الفئران C57BL / 6J ببروتين سكري قليل التغصن المايلين (MOG35-55) والتقييم اليومي لأعراض المرض باستخدام نظام التسجيل السريري بشكل أساسي. نظرا للمسببات المعقدة لمرض التصلب العصبي المتعدد مع المظاهر السريرية المتنوعة ، فإن نظام التسجيل السريري الحالي لا يمكن أن يفي بتقييم علاج المرض. لتجنب أوجه القصور في تدخل واحد ، يتم إنشاء مؤشرات جديدة لتقييم EAE بناء على المظاهر السريرية للمزاج الشبيه بالقلق وهشاشة العظام لدى مرضى التصلب العصبي المتعدد لتوفير تقييم أكثر شمولا لعلاج مرض التصلب العصبي المتعدد.
المقدمة
أمراض المناعة الذاتية هي مجموعة من الاضطرابات التي تسببها الاستجابة المناعية للجهاز المناعي لمستضدات خاصة به مما يؤدي إلى تلف الأنسجة أو اختلال وظيفي1. التصلب المتعدد (MS) هو مرض مناعي ذاتي مزمن من اعتلال الأعصاب في الجهاز العصبي المركزي (CNS) ، ويتميز بالتسلل الالتهابي ، وإزالة الميالين ، والتنكس العصبيالمحوري 2,3. في الوقت الحاضر، أثر مرض التصلب العصبي المتعدد على ما يصل إلى 2.5 مليون شخص في جميع أنحاء العالم، معظمهم من الشباب ومتوسطي العمر الذين تتراوح أعمارهم بين 20 و 40 عاما، والذين غالبا ما يكونون العمود الفقري لأسرهم ومجتمعهم. وقد تسبب هذا في تأثير كبير وضرر للأسر والمجتمع
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وافقت لجنة رعاية الحيوان بجامعة تونغجي على العمل الحالي ، وتم اتباع جميع إرشادات رعاية الحيوان. تم استخدام ذكور أو إناث الفئران C57BL / 6J بين 8-12 أسبوعا من العمر للتجارب. تم التأكد من أن العمر والجنس متماثلان في المجموعات التجريبية. خلاف ذلك ، تأثرت القابلية للمرض. تم إيواء الفئران في بيئة محددة خالية من مسببات الأمراض مع تناوب دورات الضوء والظلام لمدة 12 ساعة في ظل ظروف ثابتة (درجة حرارة الغرفة 23 ± 1 درجة مئوية ، الرطوبة 50٪ ± 10٪) ، مع حرية الوصول إلى طعام وماء الفئران.
1. إعداد مستحلب MOG35-55
- أضف المتفطرة السلية المجففة بالتجميد المعطلة بالحرارة (MTB ، H37Ra) لإكمال مساعد فرويند (يحتوي نفسه على 1....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
بعد تحصين الفئران ، يتم تسجيل وزن جسم الفئران يوميا ، ويتم تقييم أعراضها السريرية وفقا للبروتوكول الموضح أعلاه (الخطوة 4). في الفئران C57BL / 6J المحصنة بببتيد MOG ، لأن موقع الآفة يقتصر بشكل أساسي على الحبل الشوكي ، ينتشر التسبب في فئران EAE من نهاية الذيل إلى الرأس. في بداية المرض ، تظهر فئران EAE ضعفا وتدليا في الذيل ، يليه ضعف في الأطراف الخلفية ، وحركة غير منسقة ، وشلل. مع تفاقم المرض ، يتطور تدريجيا إلى ضعف الأطراف الأمامية ، والشلل ، وفي الحالات الشديدة ، يسبب صعوبة في تحريك الفئران وحتى بالقرب من الموت. كما هو مو.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
مرض التصلب العصبي المتعدد هو مرض التهابي مزيل للميالين في الجهاز العصبي المركزي وهو أحد أكثر الاضطرابات العصبية شيوعا التي تسبب إعاقة مزمنة لدى الشباب ، مما يفرض عبئا كبيرا على العائلات والمجتمع 3,4. لطالما تم تصنيف مرض التصلب العصبي المتعدد على أنه مرض مناعي ذاتي خاص بالخلايا التائية ، مما يحفز جهاز المناعة الذاتية على تآكل الجهاز العصبي المركزي ببطء ، والذي سيشمل أنظمة متعددة في جميع أنحاء الجسم27. تشمل الأعراض السريرية النموذجية ضعف الب.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
يقر المؤلفون بالدعم المقدم من المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (32070768 ، 31871404 ، 31900658 ، 32270754) ومختبر الدولة الرئيسي لأبحاث الأدوية.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| حقنة 1 مل (مع إبرة 26 جم) | شنغهاي تفضل الأدوات الطبية المحدودة | 60017031 | |
| 2 مل أنبوب الطرد المركزي | الصغير HAIKELASI | KY-LXG2A | |
| 22 جرام إبرة | شنغهاي اللطيفة الأدوات الطبية المحدودة | 60017208 | |
| فرايند الكامل s مساعد | سيجما | F5881 | مخزنة في 4 درجة ؛ C ، 1 مجم من MTB المعطلة بالحرارة (H37Ra) لكل مل |
| نظام تفضيل المكان المكيف | شنغهاي Jiliang Software Technology Co.، Ltd | سلوك | |
| الإيثانول | Sinopharm Chemical Reagent Co.، Ltd | 10009218 | المخزنة في RT |
| نشاط الحركة (المجال المفتوح) نظام تحليل الفيديو | شنغهاي Jiliang Software Technology Co.، Ltd | DigBehv-002 | سلوك |
| MOG35-55< / sub> الببتيد | جيل الكيمياء الحيوية المحدودة | GLS-Y-M-03590 | المخزنة في -20 درجة ؛ C |
| المتفطرة السلية H37Ra | BD | 231141 | مخزنة في 4 & درجة; ج |
| غرفة رد فعل المجال المفتوح | Shanghai Jiliang Software Technology Co.، Ltd | سلوك | |
| سمع السعال الديكي | Calbiochem | 516560 | مخزنة في 4 درجة ؛ C |
| فوسفات مخزن محلول | ملحي مصنوع في مختبرنا | ||
| مقص | شنغهاي للأداة الطبية (مجموعة) المحدودة | J21010 | |
| فيلم الختم | هيثرو العلمي | HS 234526B | |
| سورفال ليجند مايكرو 21R الطرد المركزي | الحراري العلمي | 75002447 | |
| الكرة الفولاذية | QIAGEN | 69975 | |
| TissueLyser II | QIAGEN | 85300 | |
| ملاقط | شنغهاي أداة طبية (مجموعة) المحدودة | JD1060 | |
| & mu ؛ CT 35 الماسح الضوئي microCT لسطح المكتب | Scanco Medical AG ، Bassersdorf ، سويسرا |
المراجع
- Zhernakova, A., Withoff, S., Wijmenga, C. Clinical implications of shared genetics and pathogenesis in autoimmune diseases. Nature Reviews Endocrinology. 9 (11), 646-659 (2013).
- Filippi, M., et al. Multiple sclerosis. Nature Reviews Disease Primers. 4
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
