يصف هذا البروتوكول جهاز اختبار الاحتكاك الذي يطبق الانزلاق المتبادل المتزامن والحمل العادي على وجهين بيولوجيين متلامسين.
مقالة منهجية
* These authors contributed equally
يصف هذا البروتوكول جهاز اختبار الاحتكاك الذي يطبق الانزلاق المتبادل المتزامن والحمل العادي على وجهين بيولوجيين متلامسين.
في هشاشة العظام الأولية (OA) ، يمنع "البلى والتمزق" الطبيعي المرتبط بالشيخوخة قدرة الغضروف على الحفاظ على وظائفه الحاملة والتزييت ، مما يعزز بيئة مادية ضارة. قد تؤثر التفاعلات الاحتكاكية للغضروف المفصلي والغشاء الزليلي على توازن المفاصل من خلال تآكل مستوى الأنسجة والنقل الميكانيكي الخلوي. لدراسة هذه العمليات الميكانيكية والميكانيكية البيولوجية ، يتم وصف جهاز قادر على تكرار حركة المفصل. يتحكم جهاز اختبار الاحتكاك في توصيل حركة الترجمة المتبادلة والحمل العادي إلى وجهين بيولوجيين متلامسين. تعتمد هذه الدراسة تكوين الغشاء الزليلي على الغضروف ، ويتم تقديم قياسات معامل الاحتكاك للاختبارات التي يتم إجراؤها في حمام ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) أو السائل الزليلي (SF). تم إجراء الاختبار لمجموعة من ضغوط التلامس ، مما يسلط الضوء على خصائص التشحيم ل SF تحت الأحمال العالية. يمكن استخدام جهاز اختبار الاحتكاك هذا كمفاعل حيوي للمحاكاة الحيوية لدراسة التنظيم الفيزيائي لأنسجة المفاصل الحية استجابة للتحميل الفسيولوجي التطبيقي المرتبط بمفصل المفصل ثنائي المفصل.
هشاشة العظام (OA) هو مرض المفاصل التنكسية الموهنة التي تؤثر على أكثر من 32 مليون بالغ أمريكي ، مع الرعاية الصحية والتكلفة الاجتماعية والاقتصادية لأكثر من 16.5 مليار دولار1. وقد تميز المرض بشكل كلاسيكي بتدهور الغضروف المفصلي والعظام تحت الغضروفية. ومع ذلك ، فقد اكتسبت التغييرات في الغشاء الزليلي مؤخرا تقديرا حيث تم ربط التهاب الغشاء الزليلي بأعراض OA والتقدم2،3،4. في OA الأولي (مجهول السبب) ، يمنع "البلى والتمزق" الطبيعي المرتبط بالشيخوخة قدرة الغضروف على الحفاظ على وظائفه الحاملة والتزييت. وقد ثبت أن الضغوط الناتجة عن التلامس المنزلق لفترات طويلة لطبقات الغضروف المفصلي أو التلامس المنزلق للغضروف ضد المواد المزروعة تسهل تآكل التفكيك من خلال فشل التعب تحت السطح 5,6. نظرا لوجود بيئة ميكانيكية ديناميكية داخل المفصل 7,8 ، فإن التفاعلات الاحتكاكية للغضروف المفصلي والغشاء الزليلي قد تؤثر على توازن المفاصل من خلال تآكل مستوى الأنسجة والنقل الميكانيكي الخلوي. لدراسة هذه العمليات الميكانيكية والميكانيكية البيولوجية ، تم تصميم جهاز لتكرار حركة المفصل مع تحكم محكم في التحميل الانضغاطي والاحتكاكي5،6،9،10،11،12،13.
يصف هذا البروتوكول جهاز اختبار الاحتكاك الذي يوفر حركة متبادلة ومترجمة وحمل ضاغط إلى ملامسة أسطح الأنسجة الحية. يسمح الجهاز الذي يتم التحكم فيه بواسطة الكمبيوتر للمستخدم بالتحكم في مدة كل اختبار ، والحمل المطبق ، ونطاق حركة مرحلة الترجمة ، وسرعة الترجمة. الجهاز معياري ، مما يسمح باختبار الوجوه المضادة المختلفة ، مثل الأنسجة على الأنسجة (الغضروف على الغضروف والغشاء الزليلي على الغضروف) والأنسجة على الزجاج. بالإضافة إلى القياسات الوظيفية التي حصل عليها المختبر ، يمكن تقييم مكونات حمام التشحيم والأنسجة قبل الاختبار وبعده لتقييم التغيرات البيولوجية التي ينقلها نظام تجريبي معين.
تم إجراء دراسات لثلاثية الغضاريف منذ عقود ، وتم تطوير العديد من التقنيات لقياس معاملات الاحتكاك بين الغضروف والزجاج والغضروف على الغضروف14,15. يتم تحفيز النهج المختلفة من خلال المفصل و / أو آلية التشحيم ذات الاهتمام. غالبا ما تكون هناك مفاضلة بين التحكم في المتغيرات التجريبية وتلخيص المعلمات الفسيولوجية. تستخدم الأجهزة على غرار البندول المفاصل السليمة كنقطة ارتكاز للبندول البسيط حيث يترجم سطح مفصل واحد بحرية على السطح الثاني14،16،17،18. بدلا من استخدام المفاصل السليمة ، يمكن الحصول على قياسات الاحتكاك عن طريق تحريك الغضروف على الأسطح المطلوبة14،19،20،21،22،23،24،25. وقد تفاوتت معاملات الاحتكاك المبلغ عنها للغضروف المفصلي على نطاق واسع (من 0.002 إلى 0.5) اعتمادا على ظروف التشغيل14,26. تم إنشاء أجهزة لتكرار الحركة الدوارة23،27،28. طور Gleghorn et al.26 مقياس ثلاثي مخصص متعدد الآبار لمراقبة ملامح تشحيم الغضروف باستخدام تحليل منحنى Stribeck ، وتم تطبيق حركة انزلاق متذبذبة خطية بين الغضروف مقابل وجه زجاجي مسطح.
يهدف هذا الجهاز إلى عزل الاستجابات الاحتكاكية واستكشاف البيولوجيا الميكانيكية للأنسجة الحية في ظل ظروف التحميل المختلفة. يستخدم الجهاز إعداد اختبار مبسط يحاكي مفصل المفاصل من خلال الانزلاق الانضغاطي ، والذي يمكن أن يقرب كل من حركة التدحرج والانزلاق مع فهم أن المقاومة في حركة التدحرج النقية لا تذكر بالنسبة لمعامل الاحتكاك المقاس للغضروف المفصلي29. تم تصميم المختبر في الأصل لدراسة آثار ضغط السائل الخلالي على الاستجابة الاحتكاكية للغضروف المفصلي9 ، ومنذ ذلك الحين تم استخدام الاختبار لاستكشاف مواضيع مثل التأثيرات الاحتكاكية لإزالة المنطقة السطحية من الغضروف 10 ، وتأثيرات التشحيم للسائل الزليلي11 ، وفرضيات ارتداء الغضروف5،6،30 ، وقياسات الاحتكاك الغليلي على الأنسجة13 . يمكن للمفاعل الحيوي لاختبار الاحتكاك إجراء تجارب الاحتكاك في ظل ظروف معقمة ، مما يوفر آلية جديدة لاستكشاف كيفية تأثير قوى الاحتكاك على الاستجابات الميكانيكية البيولوجية للغضروف الحي والغشاء الزليلي. يمكن استخدام هذا التصميم كمفاعل حيوي للمحاكاة الحيوية لدراسة التنظيم الفيزيائي لأنسجة المفاصل الحية استجابة للتحميل الفسيولوجي التطبيقي المرتبط بمفصل المفصل ثنائي المفصل.
تقدم هذه الدراسة تكوينا لاختبار احتكاك الغشاء الزليلي على الغضروف عبر مجموعة من ضغوط التلامس وفي حمامات التشحيم المختلفة. مساحة السطح المفصلية لمعظم المفاصل هي ، إلى حد كبير ، الأنسجة الزلالية31. في حين أن انزلاق الغشاء الزليلي على الغضروف لا يحدث على الأسطح الحاملة الأولية ، إلا أن التفاعلات الاحتكاكية بين النسيجين قد لا تزال لها آثار مهمة على إصلاح مستوى الأنسجة والنقل الميكانيكي للخلايا. وقد تبين سابقا أن الخلايا الزليلي الشبيهة بالخلايا الليفية (FLS) الموجودة على الطبقة الداخلية من الغشاء الزليلي حساسة ميكانيكيا ، وتستجيب لإجهاد القص الناجم عن السوائل32. وقد ثبت أيضا أن تمدد33,34 وإجهاد القص الناجم عن السوائل35 يعدل إنتاج زيوت التشحيم FLS. على هذا النحو ، قد يوفر الاتصال المنزلق المباشر بين الغشاء الزليلي والغضروف حافزا ميكانيكيا آخر للخلايا المقيمة في الغشاء الزليلي.
تم نشر عدد قليل فقط من التقارير حول معاملات احتكاك الغشاء الزليلي31,36. وسعى Estell et al.13 إلى التوسع في التوصيف السابق باستخدام الوجوه المضادة ذات الصلة بيولوجيا. مع قدرة جهاز اختبار الاحتكاك على اختبار الأنسجة الحية ، من الممكن محاكاة تفاعلات الأنسجة الفسيولوجية أثناء مفصل المفصل لتوضيح دور إجهاد القص على الاتصال على وظيفة الخلايا الزليلي ومساهمته في التداخل بين الغشاء الزليلي والغضروف. وقد تورط هذا الأخير في التوسط في التهاب المفاصل الزليلي في التهاب المفاصل وما بعد الإصابة. نظرا للقرب المادي للغضروف من الغضروف الزليلي والسائل الزليلي ، الذي يحتوي على خلايا زليلية تظهر قدرة متعددة القدرات ، بما في ذلك تكوين الغضروف ، فمن المفترض أن الخلايا الزليلي تلعب دورا في توازن الغضروف وإصلاحه عن طريق الالتفاف على السطح المفصلي. في هذا السياق ، قد يؤدي الاتصال الجسدي والقص المتبادل للغضروف - الغشاء الزليلي و synovium إلى زيادة إمكانية وصول الخلايا الزلالية إلى مناطق تلف الغضروف37،38،39،40. لن توفر الدراسات التي تستخدم تكوينات الغشاء الزليلي على الغضروف رؤى ثاقبة حول ميكانيكا الأنسجة الإجمالية المشتركة وعلم التريبولوجيا فحسب ، بل قد تؤدي أيضا إلى استراتيجيات جديدة للحفاظ على صحة المفاصل.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تم استخدام مفاصل الركبة البقرية اليافعة ، التي تم الحصول عليها من مسلخ محلي ، لهذه الدراسة. يتم إعفاء الدراسات التي أجريت على عينات العينات البقرية هذه من لجنة كولومبيا المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها (IACUC).
1. تصميم جهاز اختبار الاحتكاك
ملاحظة: يظهر تمثيل تخطيطي لجهاز اختبار الاحتكاك في الشكل 1. تم بناء الجهاز على لوحة قاعدة صلبة (غير معروضة) ، والتي تعمل كمنصة للدعم الهيكلي.
2. إعداد العينات وتركيبها
3. اختبار الاحتكاك
ملاحظة: يتم استخدام برنامج LabVIEW مخصص والأجهزة المرتبطة به (راجع ملفات الترميز التكميلية) لهذه الاختبارات. يرجى ملاحظة أن الرمز المخصص تم إنشاؤه على LabVIEW 2010 وتم الاحتفاظ به على نفس الإصدار القديم. ونتيجة لذلك، قد لا تكون التعليمة البرمجية متوافقة مع أحدث إصدار من البرنامج. ستكون ضربات الأزرار التالية ومراجع واجهة المستخدم ذات صلة فقط بالتعليمات البرمجية المخصصة. إذا كنت تعمل مع إصدار برنامج مختلف ، فيمكن كتابة برنامج مخصص مماثل عن طريق تعديل الرمز.
4. معالجة البيانات
ملاحظة: يتم استخدام برنامج MATLAB مخصص لمعالجة البيانات (راجع ملفات الترميز التكميلية). تستدعي التعليمة البرمجية ملفات الإخراج المحددة بواسطة التعليمة البرمجية LabVIEW المخصصة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تم استخدام تكوين الغشاء الزليلي على الغضروف لاختبار الاحتكاك للنبتات البقرية اليافعة. تم تركيب الغشاء الزليلي على صفيحة تحميل أكريليك قطرها 10 مم بحيث تكون الطبقة الداخلية على اتصال بالغضروف الأساسي. تم استخدام شريط الظنبوب كوجه مضاد للغضروف (الشكل 6A). تم قطع شرائط الظنبوب بعمق حوالي 1.4 مم وحجم 10 مم × 30 مم. تم اختبار العينات لمدة 1 ساعة عند 37 درجة مئوية في حمام ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) أو حمام السائل الزليلي البقري (SF). يتكون حمام SF من مزيج 50/50 من PBS و SF البقري. كان تسارع المرحلة...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
توجد بيئة ميكانيكية ديناميكية داخل المفصل حيث يتعرض الغضروف لقوى الضغط والشد والقص ، والضغوط الهيدروستاتيكية والتناضحية44,45. على الرغم من أن الغضروف هو النسيج الحامل الرئيسي للمفصل ، إلا أن الغشاء الزليلي يخضع أيضا لتفاعلات احتكاكية مع سطح الغضروف ومع نفسه في المناطق التي تطوي فيها الأنسجة. من المحتمل أن تكون التفاعلات الفيزيائية بين الغضروف والغشاء الزليلي مسؤولة عن نقل الخلايا وإطلاق الخلايا الجذعية الوسيطة إلى بيئة المفصل ، مما يوفر مصدرا محتملا للخلية للمساه...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
تم دعم هذا العمل من قبل مؤسسة البحث العلمي لجراحة العظام ، NIH 5R01 AR068133 ، NIH TERC 5P41EB027062 ، و NIGMS R01 692 GM083925 (معرف الممول: 10.13039 / 100000057).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| رقائق الألومنيوم | رينولدز جروب القابضة | رينولدز التفاف | حصاد الأنسجة المعقمة |
| حاوية أكريليك | مكون اختبار الاحتكاك | ||
| التعقيم الفوري القابلة للتعقيم | فيشربراند | 01-812-54 | تعقيم الأدوات |
| الأوتوكلاف | بوكستون | تعقيم | |
| دورق (250 مل) | بيركس فيستا | 70000 | حصاد الأنسجة |
| بيتادين (محلول بوفيدون اليود الإعدادي) Medline | Industries ، LP | MDS093906 | حصاد الأنسجة المعقمة |
| خزانة السلامة البيولوجية | Labconco | Purifier Logic + الفئة الثانية ، النوع A2 BSC | حصاد الأنسجة المعقمة |
| لكمة التجسس الحيوي | Steritool Inc. | 50162 | قاطع صندوق حصاد الأنسجة |
| ماكينة حلاقة السلامة الأمريكية | 94-120-71 | حصاد الأنسجة | |
| عمود أكريليك سيليكون دائري (الغشاء الزليلي) | حسب الطلب | وسائط ثقافة تركيب الأنسجة | |
| مصنوعة حسب الطلب | DMEM (القط رقم 11-965-118 ؛ Gibco) مكمل ب 50 & mu ؛ جم / مل ل-برولين (Cat. رقم P5607 ؛ سيجما) ، 100 مو ؛ جم / مل بيروفات الصوديوم (Cat. رقم S8636 ؛ سيجما) ، 1٪ ITS (القط. رقم 354350 ؛ Corning) ، و 1٪ مضاد حيوي &ndash ؛ antimycotic (Cat. رقم 15-240-062 ، جيبكو) | ||
| سيانواكريليت (لوكتايت 420 واضح) | هنكل | 135455 | تركيب الأنسجة |
| الأوزان الميتة OHAUS | تحميل عادي | ||
| الإيثانول 200 دليل | على Decon Labs، Inc. | 2701 | تمييع إلى 70٪ |
| قاعدة ثابتة | ThorLabs، Inc. | SB1T مكون اختبار الاحتكاك | |
| ملقط (حصاد الغشاء الزليلي) | أدوات العلوم الدقيقة | 11019-12 | حصاد الأنسجة |
| (تركيب الغشاء الزليلي) | Excelta | 3C-S-PI | الأنسجة |
| التشفير الخطي الأفقي (لمرحلة الترجمة) RSF | Electronics، Inc. | MSA 670.63 | مكون اختبار الاحتكاك ؛ دقة النظام 1 & micro ؛ م |
| مسدس الغراء الساخن والغراء | FPC Corporation | Surebonder Pro 4000A | تصاعد الأنسجة |
| LabVIEW | National Instruments Corporation | LabVIEW 2010 | برنامج اختبار الاحتكاك |
| Load cell | JR3 Inc. | 20E12A-M25B | مكون اختبار الاحتكاك ؛ دقة 0.0019 رطل في x & y ، دقة 0.0038 رطل في z |
| تحميل الصوانى | مخصص | تركيب الأنسجة | |
| الدائري O الدائري | باركر | S1138AS568-009 | بتري لتركيب |
| الأنسجة (60 مم) | Falcon | 351007 | تركيب الأنسجة |
| PivotLok Work Positioner (حامل الظنبوب) | مستودع الصناعة ، Pivot Lok | PL325 | Tissue |
| Harvest قاعدة قابلة للإزالة | ThorLabs، Inc. | SB1B | مكون اختبار الاحتكاك |
| حامل الحلقة | حصاد الأنسجة | ||
| شفرات مشرط | شركة هافيل | FSC22 | حصاد الأنسجة |
| مقبض مشرط | FEATHER السلامة الحلاقة المحدودة | رقم 4 | مفك براغي حصاد الأنسجة |
| Wera | 3334 | مرحلة حصاد الأنسجة | |
| JMAR | مكون اختبار الاحتكاك | ||
| محرك السائر | Oriental Motor Co.، Ltd. | PK266-03B | مكون اختبار الاحتكاك |
| أداة الشفط | Virtual Industries، Inc. | PEN-VAC فراغ القلم | تركيب |
| الأنسجة قضيب دعم | مخصص | تركيب الأنسجة | |
| مقص جراحي | أدوات العلوم الدقيقة | 14061-09 | تركيب الأنسجة |
| السائل الزليلي (الأبقار) | Animal Technologies، Inc. | حمام اختبار الاحتكاك | |
| حمام | ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) مخصص مع مثبطات البروتياز: 0.04٪ مبيد حيوي ذو قاعدة إيزوثيازولون (Proclin 950 Cat. رقم 46878-U ؛ سيجما) ومثبط البروتياز 0.1٪ - 0.05 م حمض الإيثيلين ديامين تترا أسيتيك ، EDTA (Cat. رقم 0369 ؛ Sigma) | ||
| حاضنة زراعة الأنسجة | فيشر Scientific | Isotemp | ثقافة معقمة |
| التشفير الخطي العمودي (لمرحلة التحميل) مكون | اختبار الاحتكاك Renishaw | T1031-30A | ؛ دقة 20 نانومتر |
| مشغل ملف الصوت | H2W Technologies | NCC20-15-027-1RC | اختبار الاحتكاك |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه
طلب إذن