يصف البروتوكول الحالي إجراء بسيطا لاكتساب وتحليل تضاريس الإمكانات البصرية فوق الجمجمة باستخدام 32 قطبا كهربائيا متعدد القنوات في الماوس.
Method Article
يصف البروتوكول الحالي إجراء بسيطا لاكتساب وتحليل تضاريس الإمكانات البصرية فوق الجمجمة باستخدام 32 قطبا كهربائيا متعدد القنوات في الماوس.
تسمح الإمكانات البصرية المستحثة (VEP) بتوصيف الوظيفة البصرية في نماذج الفئران قبل السريرية. توجد طرق مختلفة لقياس VEPs في الفئران ، من مخطط كهربية الدماغ غير الغازي ، والأقطاب الكهربائية المفردة تحت الجلد ، و ECoG إلى تسجيلات القشرة البصرية متعددة القنوات داخل القشرة الغازية بالكامل. قد يكون من المفيد الحصول على توصيف عالمي طبوغرافي على مستوى مخطط كهربية الدماغ للاستجابات البصرية السابقة لقياسات الأقطاب الكهربائية الدقيقة داخل القشرة المحلية في البيئات التجريبية الحادة. على سبيل المثال ، تتمثل إحدى حالات الاستخدام في تقييم التغيرات العالمية متعددة الوسائط في تضاريس VEP في نماذج الصمم قبل دراسة آثارها على المستوى المحلي داخل القشرة. يعد مخطط كهربية الدماغ فوق الجمجمة متعدد القنوات طريقة قوية للحصول على مثل هذا المقياس العام للنشاط البصري القشري. يوفر مخطط كهربية الدماغ فوق الجمجمة متعدد القنوات نتائج قابلة للمقارنة من خلال نهج موحد ومتسق ، على سبيل المثال ، تحديد التغيرات متعددة الوسائط أو المرضية أو المرتبطة بالعمر في الوظيفة البصرية القشرية. تقدم الدراسة الحالية طريقة للحصول على التوزيع الطبوغرافي ل VEPs التي يتم استثارتها بالفلاش مع مصفوفة قطب كهربية الدماغ ذات الأغشية الرقيقة المكونة من 32 قناة في الفئران المخدرة. إلى جانب التحليل في مجال الوقت والتردد ، يسمح هذا النهج بالتوصيف السريع وفحص التضاريس والخصائص البصرية الأساسية للوظيفة البصرية القشرية للفأر ، والتي يمكن دمجها مع العديد من الإعدادات التجريبية الحادة.
الفئران هي نموذج ما قبل السريري للعمليات التنكسية للرؤية وأمراض العيون1،2،3،4. تستخدم الإمكانات المرئية المستحثة (VEPs) بشكل شائع لقياس الوظيفة البصرية القشرية ، وعلى سبيل المثال ، لتقييم التنكس البصري في النماذج المرضية5،6. يوفر زمن انتقال VEP ، أو وقت التوصيل ، أو السعة ، أو الخصائص متعددة البؤر ، أو الحدة المكانية للإمكانات البصرية القشرية معلومات تشخيصية حول السلامة الوظيفية للنظام البصري7،8،9.
في الفئران ، يمكن قياس الإمكانات المرئية القشرية عبر مقاييس مكانية مختلفة بطرق مختلفة التعقيد من مخطط كهربية الدماغ غير الغازية ، وأقطاب الإبرة تحت الجلد ، والبراغي المزروعة بالجمجمة ، إلى الأساليب الغازية بالكامل داخل الجمجمة مع ECoG فوق القشرة ، إلى تسجيلات القطب داخل القشرة10،11،12،13،14،15،16،17. هذه الأساليب لها نقاط قوة وضعف مختلفة. على سبيل المثال ، يوفر العدد المنخفض من الأقطاب الكهربائية معلومات محدودة فقط عن توزيع VEP القشري ، في حين أن أقطاب الإبرة تحت الجلد غالبا ما تفشل في ضمان مواقع التسجيل المتسقة. علاوة على ذلك ، تتطلب البراغي المزروعة أو الطرق الغازية بالكامل إتلاف الجمجمة أو اختراقها أو إزالتها وغالبا ما توفر معلومات محلية فقط.
في التجارب الحادة ، غالبا ما تكون النظرة العامة العالمية الأولى مطلوبة للوظيفة البصرية القشرية ، والتي تتبعها في النهاية خطوات تجريبية أخرى ومقارنتها بالتسجيلات المحلية داخل القشرة. على سبيل المثال ، يتم استخدام حالة استخدام محتملة واحدة أولا للتحقيق في تأثيرات مستوى مخطط كهربية الدماغ لإعادة التنظيم البصري متعدد الوسائط للصمم أو فقدان السمع على تضاريس VEP والنشاط البصري القشري18،19 قبل دراسة التأثيرات على المستوى المحلي داخل القشرة.
يمكن أن توفر تسجيلات EEG متعددة القنوات مع مصفوفات متعددة الأقطاب الكهربائية ذات الأغشية الرقيقة تضاريس VEP منهجية من جمجمة الفأر20،21،22،23،24. يمكن أن يكون لمثل هذه التسجيلات فوق الجمجمة مزايا مقارنة بتسجيلات ECoG من خلال ترك سلامة الجمجمة سليمة وتجنب التلاعب المباشر بالسطح القشري. بالإضافة إلى ذلك ، توفر الأقطاب الكهربائية المتعددة ذات الأغشية الرقيقة تكوينا قياسيا للقطب الكهربائي ، مما يسمح بمقارنة نشاط الدماغ المكاني والزماني البصري بين التجارب المشابهة لنظام مخطط كهربية الدماغ القياسي في البشر25. يسهل الإطار القياسي أيضا استخدام صناديق أدوات تحليل مخطط كهربية الدماغ الشائعة (على سبيل المثال ، Fieldtrip و Chronux و EEGLAB و ERPLAB) لتحليل مخطط كهربية الدماغ الماوس في مجال الوقت والتردد أو من حيث الاتصال26،27،28،29،30،31.
يصف البروتوكول الحالي إجراء لتسجيلات VEP الطبوغرافية في الفئران باستخدام قطب كهربائي من 32 قناة رقيقة. يمكن استخدام هذا كجزء من التجارب الحادة متبوعة بخطوات تجريبية إضافية ، مثل تسجيلات الأقطاب الكهربائية الدقيقة داخل القشرة من مناطق معينة في الدماغ. يتضح هنا كيفية تسجيل VEPs المستحثة في الفلاش فوق الجمجمة بشكل موثوق باستخدام أقطاب كهربائية ذات أغشية رقيقة من 32 قناة من الماوس. بالإضافة إلى ذلك ، يتم تقديم تحليل نموذجي لتسجيلات VEP الطبوغرافية في مجال الوقت والتردد.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
تم التعامل مع جميع وإيواءها وفقا للغة الألمانية (TierSchG، BGBl. I S. 1206، 1313) والاتحاد الأوروبي (ETS 123; التوجيه 2010/63 / EU) إرشادات للبحوث على. تمت الموافقة على التجارب على من قبل سلطات الدولة الألمانية (مكتب ولاية سكسونيا السفلى لحماية المستهلك وسلامة الأغذية ، LAVES) وتمت مراقبتها من قبل مسؤول رعاية بالجامعة. تم استخدام فأر ذكر C57BL / 6J يبلغ من العمر 3 أشهر في هذه الدراسة.
1. تفاصيل
2. تحريض التخدير العام
3. المراقبة الفسيولوجية والحفاظ على التخدير العام
4. وضع القطب الكهربائي وإعداد التسجيل
5. تسجيل مخطط كهربية الدماغ وقياس VEP
6. الانتهاء من التجربة وإزالة القطب الكهربائي وتنظيف القطب الكهربائي
7. معالجة إشارة VEP الأساسية: مجال الوقت والتردد
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
يسمح تسجيل الإمكانات المرئية المستحثة باستخدام مخطط كهربية الدماغ متعدد القنوات بتقييم تضاريس سعة VEP أو زمن الانتقال أو مكونات التردد في الفئران. يوضح الشكل 2 أ مثالا على تضاريس VEP التي تم تسجيلها باستخدام مخطط كهربية الدماغ فوق الجمجمة 32 قناة من فأر ذكر C57BL / 6J يبلغ من العمر 3 أشهر. يحدث أقوى نشاط بصري في المنطقة القذالية فوق القشرة البصرية.
يوضح الشكل 2 ب توزيع الجهد على الجمجمة في نقاط زمنية مختلفة قبل وبعد بداية الفلاش. يحدث...
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
توضح هذه المقالة طريقة لتسجيل مخطط كهربية الدماغ متعدد القنوات باستخدام أقطاب كهربائية ذات أغشية رقيقة وكيفية الحصول على تمثيل طبوغرافي متسق للإمكانات المرئية المستحثة في الماوس. هنا ، أظهرنا بشكل مثالي تحفيز الفلاش المجهر ، ولكن يمكن أيضا تطبيق هذا النهج مع أنواع أخرى من المحفزات البصرية (مثل أحادية العين ، حواجز شبكية مكانية ، مجال بصري بؤري) باستخدام ، على سبيل المثال ، شاشة أكبر.
خطوة حاسمة في البروتوكول هي وضع القطب. يجب ضمان تحديد موقع القطب الدقيق والمت...
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
ويعلن أصحاب البلاغ عدم وجود مصالح مالية متنافسة أو أي تضارب في المصالح.
تم دعم هذا العمل من قبل مؤسسة الأبحاث الألمانية (Deutsche Forschungsgemeinschaft ، مجموعة التميز 2177 "Hearing4all" ، المشروع رقم 390895286).
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
|---|---|---|---|
| Bepanthen 5٪ Dexpantheol | Bayer | Ophtamic gel | |
| Cheetah Software 5.11 | Neuralnyx | الإصدار 5.11 | برنامج تسجيل للإشارات الفيزيولوجية العصبية |
| Digital Lynx SX | Neuralynx | Digital Lynx 16SX | نظام التسجيل |
| مضخم الصوت التفاضلي ECG | Otoconsult | WDA2 V1.0 | |
| ماكينة حلاقة كهربائية | Aesculap | GT420 | |
| حامل القطب الكهربائي | TSE Systems | 430005-HE | |
| ضوء الفحص | Heine | HL 5000 | مصباح مصدر الضوء البارد |
| وسادة تسخين + نظام التحكم في درجة الحرارة | CWE | TC-1000 ماوس | |
| هيستواكريل 0.5 مل | B.Braun | لاصق الأنسجة | |
| مصباح حراري بالأشعة تحت الحمراء | سانيتاس | SIL 06 | |
| الكيتامين 10٪ | WDT | Ketaminhydrochlorid | |
| LED ستروبوسكوب | Monarch | Nova Strobe PBL | التحفيز البصري |
| Matlab 2021a | The Mathworks | 2021a | التحكم في التحفيز وتحليله |
| Moria Vessel Clamp | أدوات العلوم الدقيقة | 18320-11 | |
| قطب مخطط كهربية الدماغ للماوس | NeuroNexus | H32 (شبكي) | قطب كهربية الدماغ 32 قناة. السماكة: 20 مو ؛ m; الطول: 8.6 مم ؛ العرض 6.8 مم. المواقع البلاتينية: 500 & mu م قطر |
| إطار الماوس | معلومات مخصصة | متاحة عند الطلب | |
| إدخال / إخراج متعدد الوظائف | National Instruments | PCIe-6353 مع BNC 2090A | توليد التحفيز التناظري والإخراج والزناد |
| كلوريد الصوديوم 0.9٪ | B.Braun | متساوي التوتر ، معقم ، غير حراري | |
| Neuralynx HS36 ؛ | Neuralynx | HS-36 | |
| موصل مسبار الارتباط العصبي | Headstage Neuralynx | ADPT-HS36-N2T-32A | موصل القطب الكهربائي |
| راسم الذبذبات | Tektronix | TDS 2014B | |
| Progent منظف مكثف | مزيل البروتين Menicon ومحلول مطهر للعدسات الصلبة المنفذة للغاز | ||
| إتش بي | إتش بي Z800 | تسجيل PC | |
| ريماديل (كاربروفين) | زويتيس | كاربروفين | |
| زيت السيليكون M 1000 | كارل روث | 4045.1 | |
| سلك فضي | المنتجات العلمية | AG-8W | القطر 203 & مايكرو ؛ m; تخطيط القلب والقطب المرجعي |
| غرفة عازلة للصوت | IAC صوتيات | ||
| مناور مجسم | أنظمة TSE | 430005-M / P | لوضع القطب الكهربائي EEG |
| تحفيز الكمبيوتر الشخصي | Dell | Dell Precision T5810 | تحفيز الكمبيوتر |
| المجهر الجراحي | Zeiss | Op-Mi Focus | |
| الشريط الجراحي | 3M | 1527-0 | 1.25 سم × 9.1 م |
| Thilo-Tears 3 مجم / جم | Alcon Pharma GmbH | Ophtamic gel | |
| Vaselin Lichtenstein | Winthrop | مرهم فاسيلين أبيض | |
| Xylazin 2٪ ؛ | برنبورغ | زيلازين هيدروكلوريد | |
| زيلوكائين بخاخ (10 مجم / نفخة) | أسبن | ليدوكائين |
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request Permission