يصف هذا البروتوكول حقنة من نقطتين من الليسوفوسفاتيديل كولين عبر إطار مجسمة لتوليد نموذج إزالة الميالين مستقر وقابل للتكرار في الفئران.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
حقنة ثابتة من نقطتين لنموذج إزالة الميالين البؤري الناجم عن الليسوفوسفاتيديل كولين في الفئران
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
تساهم إشارات الليزوفوسفوليبيد بوساطة المستقبلات في الفيزيولوجيا المرضية للأمراض العصبية المتنوعة ، وخاصة التصلب المتعدد (MS). Lysophosphatidylcholine (LPC) هو ليسوفوسفوليبيد داخلي المنشأ مرتبط بالالتهاب ، ويمكن أن يسبب ضررا سريعا مع سمية دهون المايلين ، مما يؤدي إلى إزالة الميالين البؤري. هنا ، يتم تقديم بروتوكول مفصل لحقن LPC التجسيمي المكون من نقطتين والذي يمكن أن يسبب مباشرة إزالة الميالين الشديدة ويكرر إصابة إزالة الميالين التجريبية بسرعة وثبات في الفئران عن طريق الإجراء الجراحي. وبالتالي ، فإن هذا النموذج وثيق الصلة بأمراض إزالة الميالين ، وخاصة مرض التصلب العصبي المتعدد ، ويمكن أن يساهم في الأبحاث ذات الصلة ذات الصلة ذات الصلة سريريا. أيضا ، تم استخدام طرق التلطيخ الأزرق السريع Luxol و Luxol لتصوير المسار الزمني لإزالة الميالين في الجسم الثفني للفئران التي تم حقنها باستخدام LPC. بالإضافة إلى ذلك ، تم استخدام الطريقة السلوكية لتقييم الوظيفة الإدراكية للفئران بعد النمذجة. بشكل عام ، يعد الحقن ثنائي النقطة للليسوفوسفاتيديل كولين عبر إطار مجسمة طريقة مستقرة وقابلة للتكرار لتوليد نموذج إزالة الميالين في الفئران لمزيد من الدراسة.
المقدمة
تتضمن إشارات الليزوفوسفوليبيد بوساطة المستقبلات عمليات فسيولوجية متنوعة لجميع أنظمة الأعضاء تقريبا1. في الجهاز العصبي المركزي (CNS) ، تلعب هذه الإشارات دورا حاسما في مسببات الأمراض العصبية المناعية الذاتية مثل التصلب المتعدد (MS). التصلب المتعدد هو اضطراب مزمن بوساطة المناعة يتميز بإزالة الميالين المرضية والاستجابة الالتهابية ، مما يسبب اختلالا وظيفيا عصبيا وضعفا إدراكيا 2,3. بعد الانتكاس المستمر والتحويل أثناء المرض المبكر ، يتقدم معظم المرضى في النهاية إلى المرحلة الثانوية التقدمية ، والتي يمكن أن تسبب ضررا لا رجعة فيه للدماغ والعجز الناتج4. ويعتقد أن السمة الم....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت الموافقة على جميع الإجراءات الحيوانية من قبل لجنة معهد رعاية الحيوان التابعة لكلية تونغجي الطبية ، جامعة هواتشونغ للعلوم والتكنولوجيا ، الصين. تم استخدام الفئران البالغة C57BL/6 من الذكور والإناث (النوع البري ، WT ؛ 20-25 جم ؛ 8-10 أسابيع من العمر) لهذه الدراسة. تم الحصول على الفئران من مصادر تجارية (انظر جدول المواد). تم إيواء الفئران في منشأة حيوانية محددة خالية من مسببات الأمراض (SPF) مع توفير المياه والغذاء بشكل مخصص. تم الاحتفاظ بها في فترة 12 ساعة بالتناوب من دورة الضوء والظلام في الظروف القياسية لدرجة حرارة 22 درجة مئوية والرطوبة النسبية من 55٪ -60٪.
1. إعداد حل LPC
- قم بإذابة 2....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
أدى الحقن المكون من نقطتين من LPC إلى إزالة الميالين بشكل أكثر متانة
LPC يؤدي أساسا إلى تلف سريع مع سمية المايلين وانقسام سلامة المحور العصبي15. كان يوم الحقن يعتبر اليوم 0. تم الاحتفاظ بالفئران لمدة 10-28 يوما (10 نقطة في البوصة و 28 نقطة في البوصة). تم استخدام تلطيخ Luxol fast Blue (LFB)10 لتقييم منطقة إزالة الميالين في الفئران في هذه النقاط الزمنية. في نموذج الحقن المكون من نقطتين ، كان هناك إزالة ميالين كبيرة على 10 نقطة في البوصة مقارنة بمجموعة صوري.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
مرض التصلب العصبي المتعدد، وهو مرض مزيل للميالين مزيل للجهاز العصبي المركزي، هو أحد الأسباب الأكثر شيوعا للخلل العصبي لدى الشباب20 عاما. سريريا، ما يقرب من 60٪ -80٪ من مرضى التصلب المتعدد يعانون من دورة الانتكاسات والمغفرة قبل تطوير MS الثانوي التدريجي 21,22، ويؤدي في نهاية المطاف إلى ضعف الحركة التراكمي والعجز المعرفي مع مرور الوقت23. حاليا ، لا يوجد نموذج تجريبي واحد يغطي مجموعة كاملة من السمات السريرية أو المرضية.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
تم دعم هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (المنح: 82071380 ، 81873743).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| L- & alpha ؛ - Lysophosphatidylcholine من صفار البيض | Sigma-Aldrich | L4129-25MG | |
| 32 قياس إبرة | هاميلتون | 7762-05 | |
| 10 & ل حقنة | هاميلتون | 80014 | |
| عالية السرعة الجمجمة حفر | قوية ، كوريا | strong204 | |
| حفر | هاجر & Meisinger, Germany | المرجع 500 104 001 001 005 | |
| جهاز التنفس الصناعي Matrx Animal Aneathesia | MIDMARK | VMR | |
| أداة تجسيمية محمولة للماوس | مكافأة | 68507 | |
| حقنة صغيرة | KDS LEGATO 130 | ||
| Isoflurane | VETEASY | ||
| Paraformaldehyde | Servicebio | G1101 | |
| عازلة الفوسفات | BOSTER | PYG0021 | |
| LuxoL سريع bLue | Servicebio | G1030-100ML | |
| خياطة | FUSUNPHARMA | 20152021225 | |
| قالب الدماغ | مكافأة | 68707 | |
| مثبت المجهر | الإلكترونيServicebio | G1102-100ML | |
| أحمر محايد (CI 50040) ، للفحص المجهري Certistain | Sigma-Aldrich | 1.01376 | |
| الأجسام المضادة للبروتين الأساسي المضاد للمايلين ؛ | Millipore | #AB5864 | |
| Anti-GST-P pAb | MBL | # 311 | |
| Ki-67 الأجسام المضادة أحادية النسيلة (SolA15) Thermo | Fisher ؛ علمي | 14-5698-95 | |
| بيتا أكتين أحادي النسيلة الأجسام المضادة | Proteintech | 66009-1-IG | |
| بروتين المايلين الأساسي متعدد النسيلة الأجسام المضادة | Proteintech | 10458-1-AP | |
| OLIG2 الأجسام المضادة متعددة النسيلة | Proteintech | 13999-1-AP | |
| Alexa Fluor 488 ؛ AffiniPure الحمار المضاد للأرانب IgG (H+L) | YEASEN | 34206ES60 | |
| Alexa Fluor 594 AffiniPure Donkey Anti-Rat IgG (H+L) | YEASEN | 34412ES60 | |
| Alexa Fluor 594 AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) | YEASEN | 34212ES60 | |
| HRP الماعز المضاد للأرانب IgG (H + L) | ABCLONAL | AS014 | |
| HRP الماعز المضاد للفأر IgG (H + L) | abclonal | AS003 | |
| الكبار C57BL / 6 ذكور وإناث الفئران | هونان SJA مختبر المحدودة |
المراجع
- Gaire, B. P., Choi, J. W. Critical roles of lysophospholipid receptors in activation of neuroglia and their neuroinflammatory responses. International Journal of Molecular Sciences. 22 (15), 7864(2021).
- Compston, A., Coles, A. Multiple sclerosis. Lancet
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
