عدوى الأم هي عامل خطر لاضطرابات النمو العصبي. قد توضح نماذج الفئران للتنشيط المناعي للأم (MIA) تأثير العدوى على نمو الدماغ ووظيفته. هنا ، يتم توفير إرشادات عامة وإجراءات لإنتاج ذرية مرنة وحساسة بشكل موثوق بها معرضة ل MIA.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
توليد نموذج قابل للتكرار للتنشيط المناعي للأم في منتصف الحمل باستخدام Poly (I: C) لدراسة الحساسية والمرونة في النسل
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يرتبط التنشيط المناعي للأم (MIA) أثناء الحمل باستمرار بزيادة خطر الإصابة باضطرابات النمو العصبي والاضطرابات العصبية والنفسية لدى النسل. تستخدم النماذج الحيوانية ل MIA لاختبار السببية ، والتحقيق في الآليات ، وتطوير التشخيص والعلاج لهذه الاضطرابات. على الرغم من استخدامها على نطاق واسع ، فإن العديد من نماذج MIA تعاني من نقص في التكاثر وتتجاهل جميعها تقريبا جانبين مهمين من عامل الخطر هذا: (i) العديد من النسل مرن ل MIA ، و (ii) يمكن أن يظهر النسل الحساس مجموعات مميزة من الأنماط الظاهرية. لزيادة قابلية التكاثر ونمذجة كل من القابلية والمرونة ل MIA ، يتم استخدام النشاط المناعي الأساسي (BIR) لإناث الفئران قبل الحمل للتنبؤ بحالات الحمل التي ستؤدي إما إلى ذرية مرنة أو ذرية ذات تشوهات سلوكية وجزيئية محددة بعد التعرض ل MIA. هنا ، يتم توفير طريقة مفصلة لتحفيز MIA عن طريق الحقن داخل الصفاق (i.p.) للحمض النووي الريبي المزدوج الذي تقطعت به السبل (dsRNA) الفيروسي المتعدد (I: C) في 12.5 يوما من الحمل. تؤدي هذه الطريقة إلى استجابة التهابية حادة في السد ، مما يؤدي إلى اضطرابات في نمو الدماغ في الفئران التي ترسم خريطة لمجالات متأثرة بالمثل في الاضطرابات النفسية والعصبية النمائية البشرية (NDDs).
المقدمة
تربط الأدلة الوبائية عدوى الأمهات بزيادة خطر الإصابة بالأمراض النفسية والأمراض غير المشبعة بالأمراض ، بما في ذلك الفصام (SZ) واضطراب طيف التوحد (ASD) 1،2،3،4،5،6،7. تم تطوير نموذج الماوس MIA لاختبار السببية والدور الميكانيكي ل MIA في مسببات هذه الاضطرابات ، وكذلك لتحديد المؤشرات الحيوية الجزيئية وتطوير كل من الأدوات التشخيصية والعلاجية 4,6. على الرغم من فائدة هذا النموذج وشعبيته ا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
يتم تنفيذ جميع البروتوكولات بموجب موافقة لجنة رعاية واستخدام الحيوانات المؤسسية بجامعة كاليفورنيا ديفيس (IACUC).
1. إعداد الحيوان
- عند الحصول على الحيوانات ، حافظ على المعلمات التالية متسقة لضمان أقصى قدر من التكاثر.
- موقع البائع والبائع: كما ورد سابقا ، تظهر الفئران البرية من النوع C57BL / 6J استجابات مختلفة لنفس الجرعة من poly (I: C) اعتمادا على البائع8. اختر موردا وسلالة الماوس التي تظهر استجابة متسقة. بالنسبة للتجارب هنا ، أظهرت الفئران C57BL / 6 التي تم الحصول عليها من Charles River تغييرات متسقة في السلوك بعد التعرض ل MIA في منتصف الحمل ، بينما تظهر تلك التي تم شراؤها من Taconic ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
ليست كل الحيوانات المعرضة ل 30 ملغم / كغم من بولي (I: C) في E12.5 تنتج ذرية مع تشوهات سلوكية متسقة8،31. على الرغم من أن كلا من 30 مجم / كجم و 40 مجم / كجم من poly (I: C) ينتجان بشكل موثوق سلوكيات مرضية في السدود ، بما في ذلك انخفاض مستويات النشاط ، والاستجابات المنخفضة الحرارة ، وفقدان الوزن ، ويسبب أيضا ارتفاعات كبيرة في IL-6 ، فقط مجموعة فرعية من الفضلات المعرضة ل MIA ستستمر في تطوير تشوهات سلوكية في مجالات مماثلة لتلك التي لوحظت في الطب النفسي البشري و NDDs (<.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
تغير عدوى الأم مسار نمو الدماغ لدى البشر وفي كل من القوارض والرئيسيات غير البشرية4،5،7. هنا ، تم تحديد إجراء لحث MIA في الفئران في نقطة زمنية في منتصف الحمل باستخدام poly (I: C). تتضمن هذه الطريقة تقييم BIR قبل الحمل ، مما يزيد من قابلية التكاثر ويوفر فرصة للتحقيق ميكانيكيا في الآليات التي تؤدي إلى مرونة وقابلية النسل ل MIA8. بعد MIA ، تولد السدود من مجموعة BIR المتوسطة (مع مستويات IL-6 في منتصف 50٪) ذرية.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للكشف عنه.
شكر وتقدير
نشكر الدكتورة ميكا إستس على مثابرتها في معالجة التباين في نموذج MIA للفأر وجميع المساهمين في Estes et al.8 على عملهم الذي أدى إلى تطوير بروتوكول الأساليب الموصوف هنا. تم دعم البحث المذكور هنا من قبل NIMH 2P50 MH106438-06 (AKM) و NIMH T32MH112507 (K.P.).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 0.9٪ كلوريد الصوديوم الفسيولوجي الخالي من السموم الداخلية محلول | ملحي سيجما ألدريتش | 7647-14-5 | التحكم والمركبة ل Poly (I: C) |
| طبق بتري 35 مم | توماس سيانتيفك | 1219Z45 | يستخدم لحمل الزيت أثناء نزيف الذيل |
| 7.5٪ TGX المواد الهلامية | Bio-rad | 4561084 | اختياري |
| Ancare Nestlets | Fisher Scientific | NC9365966 | اختياري |
| مضاد & بيتا ؛ توبولين | ميليبور | MAB3408 | الاختيارية |
| Bio-Plex Pro Mouse Group I | Bio-rad | 171I50001 | |
| Bio-Plex Pro Reagent Kit مع لوحة مسطحة | Bio-rad | 171304070M | |
| البقر الألبومين | ThermoFisher | 23209 | جهاز |
| طرد مركزي | Eppendorf | 5810R | اختياري |
| حقنة الأنسولين Covidien Monoject 1/2 مل مع 28 جم × 1/2 بوصة. | إبرة الطيف | 552-58457-083 | |
| Dithiothreitol | Sigma-Aldrich | D9779-10G | |
| الإثراء البيئي | Bio-serv | K3327 و K3322 | الاختياري |
| Ethovision | Noldus | Ethovision | اختياري |
| موسومة بالفلورسنت ntibodies | Li-cor | 925-32213 و 925-68072 | اختياري |
| زيت الطعام المخصص للطعام (مثل الزيتون أو الكانولا أو بذور العنب) | يستخدم بائعون | مختلفون لتليين الذيل أثناء نزيف الذيل | |
| HBSS | ThermoFisher | 14060040 | اختياري |
| عالي الوزن الجزيئي بولينوسيت: حمض البولي سيتيديليك | Invivogen | #tlrl-pic-5 | الإنسانية للإناث |
| AIMS | 1000 | تستخدم لكبح جماح الفأر أثناء الذيل نزيف | |
| برنامج استوديو الصور | Licor | 5.2 | اختياري |
| Laemmli عازلة | Bio-rad | 1610737EDU | اختياري |
| Luminex200 | ThermoFisher | APX10031 | |
| Microvette CB300 300 & ل أنبوب الشعيرات الدموية | المصلي Sarstedt | 16.440.100 | |
| الجزيئي المختلط متعدد الإنوزيات: حمض البولي سيتيديليك | سيجما ألدريتش | #P0913 | الحث الحملي ل MIA |
| أحادي النسيلة مضاد ل MEF2A | AbCam | ab76063 | إشارة |
| خلية | أحادية النسيلة الاختيارية المضادة ل STAT3 | 12640S | مراقب اختياري |
| نولدوس | أوبزرفر | ||
| المخزن المؤقت الاختياري لحجب Odyssey (TBS) | Li-cor | 927-50003 | |
| نظام التصوير Odyssey CLx | Li-cor | 9140 | اختياري |
| Omnipure PBS | Millipore | 65054L | اختياري |
| Pierce BCA اختبار البروتين | مجموعة ThermoFisher | 23227 | |
| anti_TH متعدد النسيلة | Pel-Freez | P4101-150 | اختياري |
| غشاء PVDF | Bio-rad | 162-0177 | اختياري |
| Qsonica Sonicator Q500 | Fisher Scientific | 15-338-282 | سدادة دم سريعة اختيارية |
| Petco | 17140 | ||
| Seal-Rite 1.5 مل أنبوب الطرد المركزي الدقيق ، طبيعي غير معقم | الولايات المتحدة الأمريكية العلمية | 1615-5500 | |
| حامل لحام | أمازون | B08Y12QC73 | تستخدم لعقد الأنبوب الشعري أثناء نزيف الذيل |
| بذور عباد الشمس | Bio-serv | S5137-1 | استخدم لزيادة كفاءة التكاثر |
| مجموعة Bio-Plex Pro Mouse IL-6 ، | Bio-rad | 171G5007M | |
| Tris base | Fisher Scientific | BP152-1 | اختياري |
| Tween 20 | Bio-rad | 23209 | اختياري |
المراجع
- Adams, W., Kendell, R. E., Hare, E. H., Munk-Jørgensen, P. Epidemiological evidence that maternal influenza contributes to the aetiology of schizophrenia. An analysis of Scottish, English, and Danish data. The British Journal of Psychiatry: The Journal of Mental Science. 163 (4), 522-534 (1993).
- Brown, A. S., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
