أساسيات الأنسجة واكتشاف موت الخلايا في أنسجة نحل العسل

ملخص

الطرق المناعية الكيميائية مفيدة في أبحاث نحل العسل لاكتشاف وتقييم مستوى موت الخلايا المبرمج والنخر في الغدد الوسطى والبلعومية للنحل البالغ.

الملخص

يتعرض نحل العسل (Apis mellifera L.) داخل الخلية (عمال التمريض ونحل الخلية الآخر) وخارج الخلية (العلافين) للتغيرات المناخية والطقس ، والمبيدات الحشرية المختلفة ، ومسببات الأمراض ، وسوء التغذية ، ويدخل بشكل رئيسي عن طريق الفم ويؤثر بشكل أساسي على الجهاز الهضمي للنحل البالغ. لفهم ومنع آثار هذه الضغوطات الخارجية والداخلية على نحل العسل ، فإن إحدى طرق البحث المفيدة هي الطريقة المناعية. يوصف بروتوكول أساسي لإعداد الأمعاء الوسطى (البطين) والغدد البلعومية (HPGs) للنحل البالغ للتحليل النسيجي. يتم وصف منهجية مفصلة لتقييم مستوى تلف الخلايا والتمييز بين النخر وموت الخلايا المبرمج (موت الخلايا المبرمج) كعملية طبيعية لتجديد الأنسجة. يتم عرض نتائج علاج نحل العسل للبالغين بحمض الأكساليك والمبيدات الحشرية (المبيدات الحشرية والمبيدات الحشرية) وتحديد موت الخلايا في البطين و HPGs. كما تتم مناقشة إيجابيات وسلبيات المنهجية.

المقدمة

نحل العسل (Apis mellifera L.) هي ، من بين الملقحات البرية الأخرى ، أهم الملقحات للنباتات الزراعية. على مدى آلاف السنين ، أثرت البيئة المتغيرة على النحل لتكييف مورفولوجيته وعلم وظائف الأعضاء والسلوك والتسامح مع العديد من مسببات الأمراض والطفيليات. لذلك ، طور نحل العسل مجموعة متنوعة للغاية من الأنواع والأنواع الفرعية حول العالم¹. تتوافق هذه النتائج مع النتائج السابقة ، أن هناك تباينا وراثيا في بنية الجهاز الهضمي لنحل العسل ، ولكنها تشير أيضا إلى أن التغيرات في الأمعاء الوسطى ترجع إلى عوامل بيئية ^2,3.

يتكون الجهاز الهضمي لنحل العسل من ثلاثة أجزاء رئيسية....

البروتوكول

1. الأنسجة الأساسية لأبحاث نحل العسل

1. تشريح أنسجة نحل العسل
   ملاحظة: لتشريح النحل العامل ، استخدم مجهر تشريح مع مصدر ضوء LED. التكبير الأكثر فائدة هو ~ 20x.
   1. التلاعب والتشريح
      1. خذ بعناية نحلة عاملة بالملقط وضعها على الثلج (أو في الفريزر عند -20 درجة مئوية) لمدة دقيقتين لشل حركتها²². ثبت النحلة على طبق بتري قطريا من خلال الجزء الخلفي العلوي من الصدر مرتين ، من اليسار إلى اليمين ومن اليمين إلى اليسار.
      2. صب الحشرات المالحة لتغطية الجسم. ضع طبق بتري تحت المجهر ، وقم بالتركيز ، واضبطه.
      3. قم بإعداد الأدوات (انظر جدول المواد).
   2. تشريح الأمعاء الوسطى

النتائج

كشف موت الخلايا في الأمعاء الوسطى
تمت معالجة النحل العامل الناشئ حديثا (Apis mellifera carnica) من المنحل التجريبي في المعهد الزراعي في سلوفينيا في ليوبليانا بشكل فردي بحمض الأكساليك 3٪ (OA)²³. كثيرا ما يستخدم الزراعة العضوية في تربية النحل للتحكم في مدمر الفاروا . بعد العلاج ، تم تجميد النحل العامل (ثلاثة من كل مجموعة) على الجليد. تم تشريح الأمعاء الوسطى وتثبيتها في 10 ٪ من الفورمالين. ثم تم تجفيف الأنسجة في سلسلة من محاليل الكحول وأخيرا تم تضمينها في شمع الب.......

المناقشة

في الكائنات الحية ، يعرف موت الخلايا بأنه موت الخلايا المبرمج أو النخر²⁵ ويمكن أن يكون مصحوبا بالالتهام الذاتي²⁶. الفرق بين الخلايا المبرمج والخلايا الميتة هو أن موت الخلايا المبرمج هو شكل من أشكال موت الخلايا المبرمج ويظهر في الخلايا الطبيعية ، بينما يحدث النخر بسبب الظروف المميتة (على سبيل المثال ، حادث ، مرض)^27,28. يمكن الكشف عن موت الخلايا المبرمج باستخدام مجموعات الفحص بناء على تقنية TUNEL (الكشف عن تجزئة الحمض.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
2-مجموعة البروبانول
ApopTag بيروكسيداز (ApopTag بيروكسيداز في الموقع اكتشاف موت الخلايا المبرمج)	Sigma-Aldrich	S7100	Assay B ، https://www.sigmaaldrich.com/SI/en/product/mm/s7100?gclid=CjwKCA jw7vuUBhBUEiwAEdu2pPanI9SE j81ZTl-nLHEoxXAv7ViKwPA_QRx H7fciMRNcYwR7lbPQbhoCqcQQA vD_BwE; الضوابط الإيجابية المدرجة في S7101
يغطي
نظام TUNEL اللوني المسدود	Promega	G7360	Assay A, https://worldwide.promega.com/products/cell-health-assays/apoptosis-assays/deadend-colorimetric-tunel-system/?catNum=G7360
تشريح المجهر  (لتشريح النحل)	Zeiss
الماء
تضمين كاسيت
EnVision System طقم الفوسفاتيز القلوي	Dako
Eosin Y Solution	Sigma-Aldrich
الإيثانول			95٪ (أو أقل نقاء) ، 90٪ ، 80٪
Faramount التركيب المتوسط ، مائي	داكو		تصاعد طاولة تسطيح متوسطة
	Leica	HI1220
ملقط   (لتشريح النحل)	أدوات العلوم الدقيقة	11294-00	قياسي # 4
الفورمالين 10٪			الفورمالديهايد
الهيماتوكسيلين	سيجما ألدريتش
هيستو عامل المقاصة	سيجما ألدريتش	عامل المقاصة
الهيدروجين بيروكسيداز 3٪
حاضنة	دبابيس الحشرات BioRad
(لتشريح النحل)	Entosphinx	44594	دبابيس الحشرات الفولاذ المقاوم للصدأ & أبيض ، مقاس 2
ISCDDK ، AP (مجموعة الكشف عن موت الخلايا في الموقع ، الفوسفاتيز القلوي)	Roche	11684809910	Assay C ، https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/362/737/11684809910b ul.pdf
KH2< / sub>PO4< / sub>
ساعة مختبر
المجهر الضوئي	Leica
المجهر يجب			الحفاظ على الصندوق مع الشرائح في غلاف بلاستيكي لمنع الغبار
Microtome	Leica
وحدات الأنسجة محطة	تضمين Leica
Na2< / sub>HPO4< / sub>
كلوريد الصوديوم
بارافورمالدهيد 4٪
ماصات
طبق بتري PBS
؛ (لتشريح النحل)			مليئة بالسيليكون المكثف   ؛ (زانتوبرين L أزرق ومنشط سائل عالمي)
Proteinase K	Merck	21627
Ringers' solution  (لتشريح النحل)			7.5 جم كلوريد الصوديوم ، 2.38 جم Na 2< / sub>HPO4 ، 2.72 جم KH2< / sub>PO4 ، 1 لتر مقص الماء المقطر
؛ (لتشريح النحل)	أدوات العلوم الدقيقة	1406-09 ، 14061-09	مستقيمة ومنحنية ، 9 سم
سائل عالمي بالإضافة إلى منشط   ؛ (لتشريح النحل)	كولزر
صانع ساعات ملقط s (لتشريح النحل)	أدوات العلوم الدقيقة	91100-12
حمام مائي	فرشاة
	2x
(لتشريح النحل)	كولزر

المقطر الكحولي سيجما ألدريتش بارابلاست لايكا باستور 1.5 مل ؛ 3 مل ألوان مائية لايكا زانتوبرين L أزرق