مقالة منهجية

تقنية حقن الأجنة لتحرير الجينات في القراد ذو الأرجل السوداء ، Ixodes scapularis

DOI:

10.3791/64142

⸱

سبتمبر 13, 2022

 ,  ,  ,  , 
1Department of Biochemistry and Molecular Biology, University of Nevada, Reno, 2Insect Transformation Facility, University of Maryland Institute for Bioscience and Biotechnology Research, 3Department of Agriculture, Veterinary, and Rangeland Sciences, University of Nevada, Reno

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف البروتوكول الحالي طريقة لحقن أجنة القراد. حقن الأجنة هو الأسلوب المفضل للتلاعب الجيني لتوليد خطوط معدلة وراثيا.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يمكن للقراد أن ينقل العديد من مسببات الأمراض الفيروسية والبكتيرية والأولية ، وبالتالي يعتبر ناقلات ذات أهمية طبية وبيطرية. على الرغم من العبء المتزايد للأمراض التي تنقلها القراد ، فقد تخلفت الأبحاث على القراد عن ناقلات الأمراض الحشرية بسبب التحديات في تطبيق أدوات التحول الجيني للدراسات الوظيفية على البيولوجيا الفريدة للقراد. تحظى التدخلات الجينية بالاهتمام للحد من الأمراض التي ينقلها البعوض. ومع ذلك ، فإن تطوير مثل هذه التدخلات يتطلب تحولا مستقرا للخط الجرثومي عن طريق حقن الأجنة. مثل هذه التقنية لحقن الجنين غير موجودة في chelicerates ، بما في ذلك القراد. هناك عدة عوامل ، مثل طبقة الشمع السميكة الخارجية على أجنة القراد ، والمشيمية الصلبة ، والضغط العالي داخل البيضاوي ، هي بعض العقبات التي منعت سابقا تطور بروتوكول حقن الأجنة في القراد. لقد تغلب العمل الحالي على هذه العقبات ، ويتم وصف تقنية حقن الأجنة للقراد ذو الأرجل السوداء ، Ixodes scapularis ، هنا. يمكن استخدام هذه التقنية لتوصيل المكونات ، مثل CRISPR / Cas9 ، لتحويلات الخط الجرثومي المستقرة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

القراد هي ناقلات ذات أهمية طبية وبيطرية ، قادرة على نقل مجموعة متنوعة من مسببات الأمراض الفيروسية والبكتيرية والبروتوزوان والديدان الخيطية1،2. في شرق الولايات المتحدة ، يعد القراد ذو الأرجل السوداء ، Ixodes scapularis ، ناقلا مهما لمرض لايم (LD) الممرض ، اللولبي Borrelia burgdorferi. يتم الإبلاغ عن أكثر من 400000 حالة من LD كل عام في الولايات المتحدة ، مما يجعلها أكبر الأمراض المعدية المنقولة بالنواقل في الولايات المتحدة1. بالإضافة إلى B. burgdorferi ، تنتقل ستة كائنات دقيقة أخرى بواسطة I. scapularis - بما في ذلك أربعة بكتيريا (Anaplasma phagocytophilum و B. mayonii و B. miyamotoi و Ehrlichia muris eauclarensis) ، وطفيلي أولي واحد (Babesia microti) ، وفيروس واحد (فيروس Powassan) ، مما يجعل هذا النوع من القراد مصدر قلق كبيرللصحة العامة 3 . في حين أن الأمراض التي تنقلها القراد أصبحت أكثر انتشارا في السنوات الأخيرة ، فقد تراجعت الأبحاث على القراد عن ناقلات المفصليات الأخرى ، مثل البعوض ، بسبب البيولوجيا الفريدة للقراد والتحديات المرتبطة بتطبيق الأدوات الجينومية الجينية والوظيفية 4,5.

وقد جعلت تقنيات تحرير الجينات، وخاصة كريسبر/كاس9، الآن دراسات الجينوم الوظيفي ممكنة في الكائنات غير النموذجية. لإنشاء طفرات وراثية في الكائن الحي ، يظل حقن الجنين هو الطريقة المفضلة لتقديم تركيبات لتغيير الخط الجرثومي6،7،8،9. ومع ذلك ، حتى وقت قريب4 ، كان بيض القراد يعتبر صعبا للغاية أو حتى مستحيلا للحقن دون قتل الجنين10,11. كانت طبقة الشمع السميكة على البيض ، والمشيمية الصلبة ، والضغط العالي داخل البيضاوي بعض العقبات الرئيسية التي منعت حقن الجنين في القراد. يودع الكتفي البالغ الذي يتغذى على الدم مخلبا واحدا يصل إلى 2000 بيضة12 على مدار 3-4 أسابيع (حوالي 100 بيضة / يوم). يتم وضع البيض منفردا ، ويتم تغليف كل بيضة بالشمع الذي يفرزه نتوءات أو "قرون" عضو Gené الغدي13،14،15 من الأم. يحمي هذا الشمع البيض من الجفاف ويحتوي على مركبات مضادة للميكروبات15. لحقن بيض القراد بنجاح ، من المهم إزالة طبقة الشمع ، وتليين المشيم ، وتجفيف البيض لتقليل الضغط داخل البيضاوي حتى لا يؤدي الحقن إلى إتلاف البويضة بشكل لا رجعة فيه. فهم الأهمية الحاسمة لحقن الأجنة لنجاح تحويل الخط الجرثومي ، تم تطوير بروتوكول ل I. scapularis ، والذي يمكن استخدامه لتقديم بنية CRISPR / Cas9 وتوليد طفرات جرثومية مستقرة4. بالإضافة إلى مساهمته في أبحاث I. scapularis ، يمكن أيضا تحسين هذا البروتوكول لأنواع القراد الأخرى.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم شراء البالغين Ixodes scapularis إما من جامعة ولاية أوكلاهوما (OSU) أو تربيتهم في جامعة نيفادا ، رينو (UNR) (بروتوكول IACUC # 21-001-1118).

1. إعداد القراد الإناث لجمع الأجنة

ملاحظة: لجمع البيض من العمر المناسب ، من المهم مزامنة وضع البيض. على الرغم من أن إشارات وضع البيض في القراد لا تزال غير واضحة ، في ظل الظروف الحشرية القياسية (درجة حرارة 27 درجة مئوية ورطوبة نسبية >90٪ (RH)) ، تبدأ إناث I. scapularis في وضع البيض بعد حوالي 8 أيام من انفصال المضيف. يمكن إطالة هذا الجدول الزمني عن طريق تخزين الإناث المليئة عند 4 درجات مئوية. لقد قمنا بتخزين الإناث التي تتغذى على الدم في 4 درجات مئوية حتى 8 أسابيع دون أي تأثير سلبي على وضع البيض. قد تحتاج هذه الشروط إلى تعديل لكل حشرة.

  1. قم بتخزين جميع الإناث الممتلئة في درجة حرارة 4 درجات مئوية مع رطوبة نسبية >90٪ في صندوق بلاستيكي سعة 6 لتر مبطن بورق ترشيح رطب حتى يتم استخدامه للحقن المجهري.
  2. قبل أسبوع من الحقن ، انقل الإناث من 4 درجات مئوية إلى حاضنة 27 درجة مئوية لبدء وضع البيض.
  3. عندما تبدأ الإناث في وضع البيض (بعد 3-4 أيام من نقلها إلى 27 درجة مئوية) ، قم بإزالة أي بيض باستخدام فرشاة رسم ذات رؤوس دقيقة وقم بإعداد الإناث لاستئصال عضو Gené (غدة الشمع).
    ملاحظة: يمتد عضو Gené من المنطقة الواقعة بين البلغم والرأس (القاعدة الظهرية لأجزاء الفم) ، وتنحني أجزاء الفم على سطح الجسم البطني (موازية للسطح) ، ويغلف عضو Gene الممتد البيض بمجرد وضع البيض (الشكل 1). البيض الذي يتم وضعه قبل إزالة عضو Gené أو إفراغه من الشمع سيكون له طلاء شمعي وغير مناسب للحقن ويجب التخلص منه.
  4. لإزالة أو تفريغ عضو Gené ، استخدم الطين لوضع الأنثى المحتقنة على شريحة زجاجية تحت مجهر موجه بحيث تكون أجزاء الفم مرئية على الجانبين البطني والظهري (الشكل 1B ، C).
    1. قم بوخز المنطقة الواقعة بين البلغم وأجزاء الفم بعناية باستخدام ملقط دقيق وإبر تنغستن مصنوعة في المختبر باستخدام سلك التنغستن باتباع بروتوكول16 منشور مسبقا (يمكن أيضا شراء الإبر تجاريا ، وإرفاقها بمسبار تشريح دقيق ، انظر جدول المواد).
    2. العمل في الداخل بإبرة التنغستن ، اسحب غدة الشمع للخارج (الشكل 1D ، E). قد يستغرق الأمر عدة دقائق لإزالة الغدة. امسح أي إفراز شمعي سائل باستخدام مناديل المختبر.
      ملاحظة: يمكن أيضا إزالة الغدة من الجانب البطني أسفل أجزاء الفم مباشرة. عن طريق الوصول إلى الخلف نحو scutum بإبرة وملقط. كما أن تطبيق غراء السيليكون حول أجزاء الفم يمنع انقلاب الأعضاء في جين ويمكن استخدامه بدلا من إزالة الشمع أو إفراغه (اتصال شخصي مع الدكتور لاديسلاف سيمو ، INRAE ، فرنسا). لن تبقى القراد المحتقنة على شريط على الوجهين. يساعد استخدام الطين "لقماط" القراد على إبقائها في مكانها أثناء التلاعب. استخدم ملقط لعقد إبرة القراد والتنغستن للتشريح. الجزء البطني أسهل في الاختراق بإبرة ويفضله المؤلفون.
  5. لتفريغ الغدة، رتب قراد الجاذبية كما هو مذكور في الخطوة 1.4. ثقب بعناية المنطقة خلف أجزاء الفم على الجانب الظهري والضغط على الجانب البطني باستخدام ملقط.
    ملاحظة: بدلا من ذلك ، ليس من الضروري إزالة غدة الشمع. إفراغ غدة الشمع سيستمر لعدة أيام. الإناث التي تضع البيض لديها منطقة بيضاء حول أجزاء الفم تشير إلى موقع غدة الشمع ويمكن استخدامها كمرجع.
    1. ضع حافة مناديل معملية خالية من النسالة وأزل الشمع السائل الخارج من موقع البزل. تأكد من تجنب إفراز الدملمف ، وهو سائل صاف مقارنة بالشمع اللزج المصفر قليلا. قد يستغرق الأمر من 5 إلى 10 دقائق حتى تتم إزالة معظم الشمع.
  6. بعد التلاعب ، ضع الإناث في حاضنة عند 27 درجة مئوية (>90٪ رطوبة نسبية) واسمح لها بالتعافي لمدة 1-2 أيام.
    ملاحظة: عادة ما تستغرق الإناث المعالجة 1-2 أيام للتعافي والبدء في وضع البيض مرة أخرى.
  7. عندما تبدأ الإناث في وضع البيض مرة أخرى ، استخدم فرشاة رسم دقيقة لجمع البيض المترسب حديثا (0-18 ساعة بعد وضع البيض) ووضعها في أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 مل.
    ملاحظة: في حالة استخدام بيض من نفس الأنثى بمرور الوقت ، يجب تكرار هذا الإجراء بعد 4-5 أيام من وضع البيض إذا لم تتم إزالة الغدد.

2. علاج الجنين للحقن المجهرية

  1. أضف ~ 200 ميكرولتر (أو حجم كاف لتغطية البيض ، اعتمادا على عدد البيض) من 5٪ (الوزن / الحجم) كلوريد البنزالكونيوم / الماء (انظر جدول المواد) في الأنبوب الذي يحتوي على بيض عمره 0-18 ساعة. حرك البيض برفق باستخدام فرشاة الرسم لمدة 5 دقائق لتجنب استقرار البيض في قاع الأنبوب (لمزيد من التفاصيل ، انظر شارما وآخرون 4). قم بإزالة المادة الطافية باستخدام ماصة دقيقة ، تاركا البيض خلفها في أنبوب.
    تنبيه: كلوريد البنزالكونيوم تآكل الجلد والعينين ، وارتداء القفازات وحماية العين.
  2. أضف ~ 200 ميكرولتر من الماء المقطر (DI) إلى الأنبوب الذي يحتوي على البيض ، وقم بالدوران باستخدام فرشاة الرسم ، وقم بإزالة الماء من أنبوب الطرد المركزي الدقيق باستخدام micropipette. كرر الغسيل بماء DI مرة أخرى.
  3. بعد الغسيل بماء DI ، أضف ~ 200 ميكرولتر من 5٪ (وزن / حجم) كلوريد الصوديوم (NaCl) وقم بتحريكه برفق باستخدام فرشاة الرسم لمدة 5 دقائق. أخرج المحلول من الأنبوب بعد 5 دقائق واغسل البيض مرتين بماء DI.
  4. أضف ~ 100 ميكرولتر من محلول كلوريد الصوديوم 1٪ (وزن / حجم) في أنبوب الطرد المركزي الدقيق الذي يحتوي على البيض. احتفظ بالبيض في محلول كلوريد الصوديوم 1٪ (وزن / حجم) حتى يتم استخدامه للحقن.
  5. بدء الحقن المجهري بعد حوالي ساعة. يساعد هذا الجدول الزمني في تجفيف البيض بشكل صحيح ويمنعها من الانفجار.
    ملاحظة: يمكن حفظ البيض في محلول كلوريد الصوديوم بنسبة 1٪ (وزن / حجم) لمدة 7-8 ساعات دون التأثير بشكل كبير على البقاء على قيد الحياة. إذا كان من الصعب حقن البيض أو انفجاره ، فلن يتم تجفيف البيض بدرجة كافية ويمكن معالجته مرة أخرى بنسبة 5٪ (وزن / حجم) كلوريد الصوديوم لمدة 5 دقائق إضافية.

3. إعداد إبر الحقن

  1. أدخل زجاجا شعريا من سيليكات الألومنيوم (مع خيوط ، انظر جدول المواد) في مجتذب الإبرة باتباع تعليمات الشركة المصنعة.
  2. اضبط مجتذب الإبرة على الإعدادات التالية: الحرارة: 575 ، السحب: 20 ، السرعة: 50 ، الوقت: 200 ، والضغط: 700.
  3. قم بتنشيط وظيفة السحب لمجتذب الإبرة وكرر العملية للحصول على إبر إضافية.
  4. قم بتخزين الإبر المسحوبة عن طريق لصقها في خطوط من طين العارض في طبق بتري نظيف.
  5. قم بتحميل الإبرة بخليط الحقن باستخدام طرف اللودر الصغير (انظر جدول المواد).
    ملاحظة: يوضح الشكل 2 مقارنة الإبر المستخدمة في حقن جنين القراد والبعوض.

4. إعداد الشريحة للحقن المجهري

  1. باستخدام شريط على الوجهين ، قم بلصق شريحتين مجهريتين زجاجيتين معا ، تاركا فجوة تبلغ حوالي 0.5 سم لدعم محاذاة البيض ومنعها من التدحرج أثناء الحقن (الشكل 3 أ).
  2. ضع قطعة من ضمادة الفيلم الشفافة (انظر جدول المواد) على الشريط على الوجهين في الفجوة بين الشرائح. تأكد من محاذاة خلع الملابس الفيلم تماما مع الفجوة.

5. الحقن المجهرية للجنين

  1. قم بمحاذاة 8-10 بيضات في المرة الواحدة على إعداد الشريحة (أعلاه) باستخدام فرشاة طلاء أحادية الشعر.
    ملاحظة: البيض المحاذي للمحور الأطول العمودي (الشكل 3B) على حافة الشريحة أسهل في الحقن من البيض الذي يتم محاذاة محوره الطولي بالتوازي مع الحافة (الشكل 3C). يمكن للبيض في الاتجاه العمودي (الشكل 3 ب) أن يتحمل الحقن بشكل أفضل مما يؤدي إلى زيادة البقاء على قيد الحياة.
  2. ضع الشريحة مع البيض المحاذي على مرحلة المجهر المركب. استخدم قطعة من المناديل الخالية من النسالة لإزالة محلول كلوريد الصوديوم 1٪ الذي يتم تخزينها فيه.
  3. قم بتوصيل إبرة الحقن المملوءة بحاقن دقيق متصل بمناور دقيق (انظر جدول المواد).
  4. افتح الإبرة عن طريق فركها برفق على سطح البويضة باستخدام إعداد الضغط العالي على الحاقن الدقيق (>5000 هيكتوباسكال).
  5. بعد فتح الإبرة ، قلل الضغط (1000-2500 هيكتوباسكال) للحاقن الدقيق اعتمادا على فتحة الإبرة.
    ملاحظة: تتطلب الفتحة الصغيرة ضغطا أعلى نسبيا ، بينما تتطلب الفتحة الأكبر ضغطا أقل. هذا هو التحكم في حجم البناء المحقونة. اعتمادا على حجم فتحة الإبرة ، سيختلف حجم الحقن من 1-5 pL.
  6. قم بحقن كل البيض الموجود على الشريحة بزاوية 10 درجات -15 درجة في أسرع وقت ممكن وانقل الشريحة على الفور إلى ظروف الرطوبة العالية في طبق بتري مبطن بورق رطب. بمجرد حقن البيض ، يبدأون في الجفاف.
    ملاحظة: حقن عدد صغير من البويضات في وقت واحد يزيد من نجاح الحقن واحتمال البقاء على قيد الحياة. تسد الإبر بسبب ارتجاع الجنين. إذا كان الطرف لا يزال حادا ، لإزالة الإبر المسدودة ، انقل الإبرة إلى قطرة صغيرة من 1٪ كلوريد الصوديوم تضاف إلى حافة الشريحة. سيؤدي العمل الشعري إلى إزاحة السدادة الصغيرة. إذا كانت الإبرة حادة بالفعل ، فقم بتغييرها.

6. رعاية الأجنة بعد الحقن

  1. ضع الشريحة التي تحتوي على أجنة محقونة في طبق بتري كبير مبطن بورق ترشيح رطب.
    ملاحظة: من الأهمية بمكان عدم إزعاج البيض لمدة 5-6 ساعات على الأقل. هذا يسمح لجرح الحقن بالإغلاق بشكل صحيح. قد ينفتح جرح الحقن عند تحريكه ، وقد يبدأ السيتوبلازم في الخروج ، مما يؤدي إلى نفوق البويضات.
  2. بعد 5-6 ساعات ، أضف قطرة صغيرة من ماء DI إلى ضمادة الفيلم الشفافة مع الأجنة المحقونة المرفقة. باستخدام فرشاة الرسم ، قم بإزاحة البيض برفق. انقل البيض إلى طبق بتري صغير (10 سم) واغمره في ماء DI.
    ملاحظة: تسمح ضمادة الفيلم بإزالة البيض بسهولة بعد الحقن. في اللحظة التي تضاف فيها قطرة ماء إلى ضمادة الفيلم ، سيبدأ البيض في التحرك مع الماء.
  3. احتفظ بالبيض مغمورا في الماء وضع طبق بتري في صندوق بلاستيكي سعة 6 لتر في حاضنة عند 27 درجة مئوية ورطوبة نسبية >90٪.
  4. افحص البيض بانتظام ، يوميا في الأيام القليلة الأولى ، ثم كل 3-4 أيام حتى تبدأ اليرقات في الفقس.
    ملاحظة: في حالة تلف عدد كبير من البيض أثناء الحقن المجهري ، فإن تصريف ماء DI برفق بعد أسبوع سيمنع نمو الفطريات على البيض الميت.
  5. عندما تبدأ اليرقات في الفقس من الأجنة المحقونة (بعد 21-25 يوما من الحقن لإعداد المختبر الحالي) ، افحصها يوميا وانقل أي يرقات فقس إلى قوارير زجاجية مع شاشة في الأعلى. يمكن أن تفقس اليرقات تحت الماء والبقاء على قيد الحياة لمدة ~ 1-2 أسابيع.
  6. افحص اليرقات4 إذا تم حقن البيض ببنية قد تؤدي إلى نمط ظاهري مرئي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم وصف بروتوكول حقن الأجنة الناجح ل I. scapularis في هذه المقالة. تم الاحتفاظ بالإناث التي تضع البيض في رطوبة عالية لتجنب جفاف البيض المشمع جزئيا. تمت إزالة طبقة الشمع لحقن أجنة القراد عن طريق استئصال عضو الجين (غدة الشمع) للأنثى الجاذبة (الشكل 1A-E). استخدمنا إبر زجاجية من سيليكات الألومنيوم ذات رقبة أقصر (الشكل 2). كان هذا الشكل مثاليا لحقن بيض القراد لأنه يمكن أن يتحمل الضغط بشكل أفضل من الإبرة الطويلة (المدببة) المس...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذا هو البروتوكول الأول الذي تم تطويره لحقن أجنة القراد المبكرة بنجاح. تم تحقيق معدل البقاء على قيد الحياة ~ 4٪ -8٪ ، وهو ما يمكن مقارنته بحقن الجنين في نماذج الحشرات الراسخةالأخرى 5.

نظرا لأن هذا هو البروتوكول الأولي ، فمن المتوقع أن يتم تحسين هذا البروتوكول وتخصصه لأنواع القراد الفردية. على وجه الخصوص ، يختلف توقيت الحقن من نوع إلى آخر ، اعتمادا على التطور الجنيني ، وخاصة توقيت الخلوية. تشير البيانات الأولية إلى أن بيض I. scapularis لا يمر بتقسيم نووي سريع في...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعترف المؤلفون ب Channa Aluvihare و Youns Gebermicale، ITF، UMD، للحصول على البصيرة والدعم خلال المرحلة الأولية من تطوير البروتوكول. كانت إبر التنغستن هدية سخية من ديفيد أوبروشتا، الITF، UMD. نحن ممتنون للدكتور لاديسلاف سيمو لاختبار هذا البروتوكول في I. ricinus وللمناقشات الثاقبة. تم تمويل هذا المشروع من قبل NIH-NIAID R21AI128393 ومؤسسة بليموث هيل ، نيويورك إلى MG-N ، وصناديق بدء التشغيل من جامعة نيفادا إلى AN، ومنحة المؤسسة الوطنية للعلوم رقم 2019609 إلى MG-N و AN، ومنحة نظير إلى نظير من IGTRCN إلى AS.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
الشعيرات الدموية سيليكات الألومنيوم ، مع خيوطأدوات SutterAF100-64-10حقن الأجنة
كلوريد البنزالكونيوم 50٪ في الماء ، 25 جمTCI-AmericaB0414علاج الأجنة ، 25 جم حوالي 25 مل
ورق ترشيحWhatman1001-090رعاية ما بعد الحقن
ملقطتوماس Scientific300-101عضو الجين مناديل
مختبرGenesee Scientific88-115
نصائح MicroloaderEppendorf930001007تحميل الإبر المسحوبة
Micromanipulatorأدوات SutterROE-200حقن الأجنة
شرائح مجهرية - عادي ، حواف أرضيةGenesee Scientific29-100محاذاة الأجنة ، يفضل استخدام الحواف الأرضية ، يمكن أن تكون الحواف المشطوفة حجب البيض من العرض
NaClResearch Products InternationalS23020-500.0علاج الأجنة
مجتذب الإبرةأدوات SutterP-1000
شريط دائم على الوجهينسكوتش34-8716-3417-5محاذاة الأجنة
لوحات بتريجينيسي العلمية32-107Gرعاية ما بعد الحقن
Tegaderm / شفاف خلع الملابس 3MHealthcare1628محاذاة الأجنة
إبر التنغستنأدوات العلوم الدقيقة10130-10التلاعب بأعضاء الجين
سلك التنغستنAmazonB08DNT7ZK3التلاعب بأعضاء الجين
XenoWorks Digital Microinquorأدوات Sutterحقن الأجنةMPC-200
التلاعب

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

CRISPR Cas9

مقالات ذات صلة