هنا ، نصف طريقة توليد نموذج إزالة الترسبات الاصطناعي باستخدام الفأر المبيض ، وهي تجربة كلاسيكية لإزالة ترسبات بطانة الرحم في مجال أبحاث إزالة ترسبات بطانة الرحم.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
توليد نموذج إزالة الترسيب الاصطناعي للفأر مع استئصال المبيض لأبحاث إزالة ترسبات بطانة الرحم
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
إزالة بطانة الرحم هي عملية تمايز فريدة من نوعها في بطانة الرحم ، ترتبط ارتباطا وثيقا بالحيض والحمل. يؤدي ضعف إزالة الترسبات إلى اضطرابات بطانة الرحم المختلفة ، مثل العقم والإجهاض المتكرر والولادة المبكرة. كان تطوير واستخدام نموذج إزالة بطانة الرحم في الدراسات الإنجابية من أبرز ما يميز الباحثين الإنجابيين لفترة طويلة. تم استخدام الفأر على نطاق واسع في دراسة التكاثر وإزالة الترسيبات. هناك ثلاثة نماذج راسخة للفأر فيما يتعلق بإزالة الترسبات ، وهي إزالة الترسبات الطبيعية للحمل (NPD) ، وإزالة الترسبات الاصطناعية (AD) ، وإزالة الترسبات في المختبر (IVD). من بينها ، يعتبر AD نموذجا موثوقا به لإزالة الفأر ، وهو سهل التنفيذ وقريب من NPD. يركز هذا البحث على طريقة معدلة لعملية توليد وتطبيق نموذج إزالة الترسيب الاصطناعي للفأر مع استئصال المبيض لتجنب تأثيرات المبيض ، والتي يمكن أن تحصل على نتائج قابلة للتكرار بدرجة كبيرة مع اختلافات صغيرة داخل المجموعة. توفر هذه الطريقة نموذجا حيوانيا جيدا وموثوقا به لدراسة إزالة بطانة الرحم.
المقدمة
مع تطور التكنولوجيا الإنجابية بمساعدة الإنسان ، وصل معدل الحمل السريري الحالي لنقل الأجنة في المختبر (IVF-ET) إلى أو حتى تجاوز معدل الحمل الطبيعي. على الرغم من ذلك ، لا يزال العديد من المرضى في الممارسة السريرية للمساعدة على الإنجاب يخضعون لعمليات نقل أجنة متعددة لكنهم يفشلون في تحقيق الحمل على النحو المطلوب. ومع ذلك ، لا تزال آليته الجزيئية المحددة غير واضحة ، لذا فإن التدخل السريري غير فعال ، وهو أحد التحديات الكبيرة التي تواجه الطب التناسلي 1,2.
تمثل عوامل بطانة الرحم حوالي ثلثي أسباب فشل التلقيح الاصطناعي3. ينقسم زرع الجنين البشري إلى ثلاث مراحل:....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت الموافقة على جميع التجارب على الحيوانات الموصوفة من قبل مستشفى برج الطبل التابع للجنة كلية الطب بجامعة نانجينغ حول استخدام ورعاية الحيوانات (رقم 20171202). تتبع جميع العمليات وكالة رعاية واستخدام الحيوانات المناسبة والمبادئ التوجيهية الوطنية.
ملاحظة: تمت تربية الفئران في بيئة محددة خالية من مسببات الأمراض (SPF) ، مع درجة حرارة 22 درجة مئوية ± 1 درجة مئوية ، ورطوبة نسبية تبلغ 50٪ ± 1٪ ، ودورة ضوء / مظلمة تبلغ 12 ساعة / 12 ساعة ، وحرية الوصول إلى الطعام والماء.
1. استئصال المبيض الفأر
- تعقيم الأدوات الجراحية مع معقم درجة حرارة عالية وضغط عالي 1 قبل يوم من العملية.
- قم بوزن الف....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تتضمن مؤشرات نموذج إزالة الترسبات من الفأر التشكل العام للرحم ، ونسبة كتلة الرحم المنزوع الترسبي وغير المنزوع الترسبي ، والتشكل النسيجي لبطانة الرحم ، ومستوى التعبير عن جزيئات علامة إزالة الترسب. التشكل العام للرحم الاصطناعي المنزوع الرواسب للفئران التي يسببها الزيت أقرب إلى الرحم أثناء الحمل. يصبح جسم الرحم سميكا ، ويصبح تجويف الرحم أصغر من الجانب غير المستحث. حجم ووزن قرن الرحم المستحث أعلى بكثير من الجانب غير المستحث (الشكل 3 أ ، ب). أظهر تلطيخ أنسجة الرحم أن الغدد تختفي .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
إزالة الترسبات في الفئران هي عملية عفوية تعتمد على وجود الأجنة ، والتي تختلف عن البشر. ومع ذلك ، فقد وجد أن التحفيز الاصطناعي مثل حقن الرحم من الخرز الزجاجي وتمزق الرحم يمكن أن يؤدي إلى إزالة بطانة الرحم بدلا من الأجنة. بالإضافة إلى ذلك ، وجد الباحثون أن العديد من العوامل يمكن أن تحفز العشرية أو المشاركة في إزالة الترسبات ، مثل حقن هرمونات الستيرويد والبروستاجلاندين والعوامل المثبطة للنمو في تجويف الرحم21. بالمقارنة مع طرق النمذجة المذكورة أعلاه ، فإن نموذج الماوس المفصل هنا مع استئصال المبيض ، با.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
يرغب المؤلفون في الاعتراف بالدعم المقدم من المؤسسة الوطنية لعلوم الطبيعة في الصين (82001629 ، XQS) ، وبرنامج الشباب لمؤسسة العلوم الطبيعية في مقاطعة جيانغسو (BK20200116 ، XQS) ، وتمويل أبحاث ما بعد الدكتوراه في مقاطعة جيانغسو (2021K277B ، XQS).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| هرمون الاستروجين | سيجما | E2758 | مكمل هرموني |
| البروجسترون | سيجما | P0130 | مكمل هرموني |
| زيت السمسم | مكمل هرموني Sigma | S3547 | |
| الصوديوم بنتوباربيتال | Dainippon سوميتومو فارما المحدودة | حقن التخدير | |
| Meloxicam | Qilu منتجات صحة المحدودة | تسكين | |
| القلوية فوفاتاز طقم وصمة عار (طريقة اقتران kaplou's / azo) | Solarbio | G1480 | صبغة phophatase القلوية |
| Eosin | Servicebio | G1005-2 | HE وصمة عار |
| Hematoxylin | Servicebio | G1005-1 | HE وصمة عار |
| ChamQ عالمي SYBR qPCR ماستر ميكس | Vazyme | Q711-02 | qPCR |
| 70٪ إيثانول | ليركون | ZH1120090 | تطهير |
| اليودوفور | Runzekang | RZK-DF | تطهير |
| مرهم العين الإريثروميسين | قوانغتشو Baiyunshan | مقلة العين حماية | |
| 4-0 خياطة | Ethicon | W329 | شق |
| خياطة 10٪ فورمالين | Yulu | L25010118 | Tissue Fix |
| مركب درجة حرارة القطع الأمثل | Sakura | 4583 | Ssection |
| Trizol Reagent | Ambion | 15596018 | qPCR |
المراجع
- Carson, S. A., Kallen, A. N. Diagnosis and management of infertility: A review. JAMA. 326 (1), 65-76 (2021).
- Yatsenko, S. A., Rajkovic, A. Genetics of human female infertility dagger. Biology of Reproduction. 101 (3), 549-566 (2019).
- Sang, Y., Li, Y., Xu, L., Li, D., Du, M.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
