يستخدم تحليل السائل الزليلي تحت المجهر الضوئي المرسل والمستقطب والمعوض لتقييم الطبيعة الالتهابية أو غير الالتهابية للعينة من خلال خطوات بسيطة. من المفيد بشكل خاص في هشاشة العظام الكشف عن بلورات الكالسيوم وتحديد مجموعة فرعية أكثر حدة من هشاشة العظام.
يستخدم تحليل السائل الزليلي تحت المجهر الضوئي المرسل والمستقطب والمعوض لتقييم الطبيعة الالتهابية أو غير الالتهابية للعينة من خلال خطوات بسيطة. من المفيد بشكل خاص في هشاشة العظام الكشف عن بلورات الكالسيوم وتحديد مجموعة فرعية أكثر حدة من هشاشة العظام.
تحليل السائل الزليلي (SF) مهم في تشخيص هشاشة العظام (OA). تساعد الميزات العيانية والمجهرية ، بما في ذلك عدد خلايا الدم البيضاء الكلية والتفاضلية (WBC) ، في تحديد الطبيعة غير الالتهابية ل SF ، والتي تعد سمة مميزة ل OA. في المرضى الذين يعانون من هشاشة العظام ، لا يتجاوز WBC في عينات SF عادة 2000 خلية لكل ميكرولتر ، والنسبة المئوية للخلايا الالتهابية ، مثل العدلات ، منخفضة جدا أو غائبة. بلورات الكالسيوم متكررة في SF التي تم جمعها من مرضى الزراعة العضوية. على الرغم من أن دورها في التسبب في هشاشة العظام لا يزال غير واضح ، فقد ارتبطت بعملية التهابية خفيفة وتطور مرض أكثر حدة. في الآونة الأخيرة ، تم وصف بلورات الكالسيوم في كل من المراحل المبكرة والمتأخرة من الزراعة العضوية ، مما يشير إلى أنها قد تلعب دورا حيويا في تشخيص مجموعات فرعية سريرية مختلفة من الزراعة العضوية والعلاج الدوائي. الهدف العام من تحليل SF في الزراعة العضوية ذو شقين: التأكد من الدرجة غير الالتهابية ل SF وتسليط الضوء على وجود بلورات الكالسيوم.
هشاشة العظام (OA) هو مرض مزمن معقد ومتعدد العوامل في المفاصل ، مع انتشار عالمي مجمع يقدر ب 16٪ في الأشخاص الذين تتراوح أعمارهم بين 15 وما فوق ، و 23٪ في الأشخاص الذين تتراوح أعمارهم بين 40 وما فوق1. من المتوقع أن يزداد حدوث هشاشة العظام بسبب شيخوخة السكان وزيادة عوامل الخطر ، مثل السمنة ومتلازمة التمثيل الغذائي2.
من بين القضايا الرئيسية المرتبطة بهشاشة العظام صعوبة تشخيص المرض في مراحله المبكرة والعلاجات المتاحة حاليا التي تقتصر على إدارة الألم والأدوية بطيئة المفعول (SYSADOAs) مثل الجليكوزامينوجليكان. يعتمد تشخيص هشاشة العظام على الأعراض السريرية ونتائج التصوير. ومع ذلك ، فإن عدم وجود علاقة بين التقييمين يمكن أن يسبب سنوات من التأخير في تشخيص هشاشة العظام وبدء العلاج2. يتميز الزراعة العضوية بالعمليات التنكسية والالتهابات منخفضة الدرجة ، والتي يمكن التحقيق فيها بسهولة عن طريق تحليل السائل الزليلي (SF). SF عبارة عن غسيل بلازمي لزج غني بحمض الهيالورونيك ، الذي يشحم مساحة المفصل ، ويوفر العناصر الغذائية والأكسجين للغضروف ، ويزيل النفايات الأيضية. يعمل SF أيضا كممتص للصدمات ، وبالتالي يحمي المفاصل أثناء الإجهاد والإجهاد3.
تحليل SF هو طريقة بسيطة وموثوقة يجب إجراؤها دائما أثناء التقييم الأولي للمرضى الذين يعانون من أعراض الجهاز العضلي الهيكلي وانصباب المفاصل3. تشمل التوصيات الصادرة عن الكلية الأمريكية لأمراض الروماتيزم والجمعية البريطانية لأمراض الروماتيزم وغيرها تحليل SF بين الاختبارات التشخيصية للأمراض الروماتيزمية التي يجب إجراؤها بشكل أساسي في تقييم التهاب المفاصل الأحادي الحاد 4,5. توفر أعداد الكريات البيض الكلية والتفاضلية التي تم الحصول عليها من تحليل SF لقطة للعملية المرضية التي تحدث في المفصل ، وبالتالي تصنيف درجة الالتهاب. يعد تحديد البلورات المسببة للأمراض ، مثل بلورات اليورات أحادية الصوديوم (MSU) وبيروفوسفات الكالسيوم (CPP) ، تحت الضوء المستقطب ، أمرا حيويا في تشخيص وعلاج التهاب المفاصل البلوري (مثل النقرس والنقرس الكاذب). علاوة على ذلك ، يشير وجود الكائنات الحية الدقيقة إلى تشخيص التهاب المفاصل الإنتاني.
بلورات الكالسيوم متكررة في العينات التي تم جمعها من المرضى الذين يعانون من OA6. تم الإبلاغ عن بلورات فوسفات الكالسيوم الأساسية (BCP) و CPP في حوالي 22٪ و 23٪ من عينات SF ، على التوالي ، من المرضى الذين يعانون من OA6. على الرغم من أن دورها لا يزال غير واضح ، فقد ارتبطت هذه البلورات بأشكال أكثر حدة من OA7 وتعتبر ظاهرة عرضية للعملية المرضية نفسها. تم الكشف عن بلورات الكالسيوم في 100٪ من عينات الأنسجة من مرضى الزراعة العضوية الذين يخضعون لاستبدال الركبة8. علاوة على ذلك ، تم افتراض أن بلورات الكالسيوم قد تكون متورطة في التسبب في هشاشة العظام بسبب آثارها الالتهابية ، والتي أظهرتها العديد من الدراسات9 وتوسطت ، جزئيا على الأقل ، التهاب NLRP310.
في الآونة الأخيرة ، تم وصف بلورات الكالسيوم في كل من المراحل المبكرةوالمتأخرة 6 من الزراعة العضوية ، مما يشير إلى أنها قد تلعب دورا حيويا في تشخيص مجموعات فرعية سريرية مختلفة من الزراعة العضوية والعلاج الدوائي.
الهدف العام من تحليل SF ذو شقين: تحديد درجة التهاب SF وتشخيص التهاب المفاصل البلوري أو الإنتاني عن طريق تحديد بلورات أو كائنات دقيقة معينة. إنها أداة مفيدة وبسيطة وموثوقة بشكل خاص في تشخيص هشاشة العظام ، بسبب النمط غير الالتهابي النموذجي مع نسبة منخفضة جدا أو غياب العدلات.
مزايا على التقنيات البديلة
يتكون تحليل SF من إجراءات بسيطة تشمل تعداد الكريات البيض الكلي والتفاضلي والبحث البلوري. لا يزال العد اليدوي للخلايا الذي يقوم به فنيو المختبراتالخبراء 3,11 هو المعيار الذهبي للتحليل الخلوي للسوائل الزليلية وسوائل الجسم الأخرى. ومع ذلك ، نظرا للقيود التي تستغرق وقتا طويلا والتباين بين المراقبين وأثناءهم لهذه الطريقة ، حلت عدادات الخلايا الآلية تدريجيا محل العد اليدوي في المختبرات السريرية الروتينية الكبيرة حيث تم تكييف أجهزة تحليل الدم والبول لتمكين تحليل SF11,12. ومع ذلك ، يقدم العد اليدوي بعض المزايا في إعدادات محددة: (1) في الإسعافية ، للحصول على قيمة WBC الإجمالية والتفاضلية في الوقت المحدد ؛ (2) لتحديد أنواع الخلايا مثل الخلايا أحادية النواة الخلوية (Reiter) أو الخلايا غير المكونة للدم مثل الخلايا الزليلية ، التي لا تستطيع العدادات الآلية التعرف عليها ؛ (3) عندما تكون العينة صغيرة جدا بحيث لا يمكن معالجتها بواسطة الأداة ؛ (4) إنشاء سجلات مختبرية محلية يسهل الوصول إليها لأغراض البحث. ميزة أخرى للعد اليدوي هي تلطيخ inupravital ، وهي طريقة تسمح بتمايز الخلايا بسرعة كبيرة ومباشرة بعد إعداد الشريحة الزجاجية. على النقيض من ذلك ، تتطلب البقع التقليدية ، مثل إجراءات رايت وماي-جرونوالد-جيمسا ، مسحات SF المجففة بالهواء ووقتا لتلطيخ الخلايا13. على الرغم من أنها غير مناسبة للتحليلات الروتينية الحساسة للوقت ، إلا أن طرق التلوين هذه تكشف عن مجموعات خلايا أكثر تفصيلا في العينة ، بما في ذلك كريات الدم الحمراء ، والخلايا القاعدية ، والحمضات ، والكريات البيض متعددة الأشكال النووية ، والخلايا الليمفاوية ، والصفائح الدموية.
أخيرا ، يتم إجراء تحليل SF الروتيني للبلورات باستخدام تقنية بسيطة تعتمد على المجهر الضوئي المستقطب ، والتي توفر نتائج سريعة14. تسفر الطرق البديلة ، مثل المسح والمجهر الإلكتروني ، عن نتائج أكثر دقة وحساسية ، لكن استخدامها في الممارسة السريرية اليومية غير ممكن بسبب ارتفاع التكاليف وإعداد العينات وتحليلها الذي يستغرق وقتا طويلا.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
يتوافق البروتوكول الحالي مع المبادئ التوجيهية للجنة الأخلاقيات في مستشفى جامعة بادوفا. تم جمع SF بموافقة المريض من مفاصل الركبة للمرضى الذين يتلقون بزل المفصل العلاجي لانصباب المفاصل عند تقديمهم الأولي إلى العيادة أو استجابة لتوهج التهاب المفاصل. كانت موانع الإجراء: اعتلال التخثر ، الأدوية المضادة للتخثر ، الآفات الجلدية ، التهاب الجلد ، أو التهاب النسيج الخلوي الذي يغطي المفصل. تم تحديد جميع عينات SF.
1. إعداد السائل الزليلي
2. الفحص العياني
ملاحظة: يتكون التقييم العياني لعينات SF من تقييمات ذاتية ونوعية وشبه كمية. لا توجد مقاييس قياسية مرجعية ، ولا يتم استخدام عينات تحكم.
3. الفحص المجهري
ملاحظة: يتكون التحليل المجهري SF من الفحص الخلوي ، بما في ذلك تعداد خلايا الدم البيضاء الكلية والتفاضلية (WBC) والبحث عن البلورات.
4. كشف الكريستال
5. تلطيخ أحمر أليزارين
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
غالبا ما تتورم المفاصل الكبيرة المتأثرة بهشاشة العظام وتنتج كميات كبيرة من SF ، والتي يتم تصريفها عن طريق بزل المفصل15. تشمل الخصائص العيانية ل SF التي تم تقييمها مباشرة بعد بزل المفصل بشكل أساسي الكمية واللون والوضوح واللزوجة17. على الرغم من خصوصيتها المنخفضة ، فإنها توفر بيانات أولية عن درجة الالتهاب. يعتمد اللون على خلوية SF ودرجة تجزئة جزيئات المصفوفة خارج الخلية. SF الذي تم جمعه من المرضى الذين يعانون من هشاشة العظام أصفر باهت ، وهو ظل يرتبط عموما بالعينات غير...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
في الزراعة العضوية ، يساعد تحليل SF في تحديد خصائص المرض من خلال خطوات بسيطة: تعداد الكريات البيض الكلي والتفاضلي والبحث عن البلورات ، بما في ذلك CPP و BCP. علاوة على ذلك ، قد يسلط اكتشاف بلورات جامعة ولاية ميشيغان الضوء على الأمراض المصاحبة المهمة.
على الرغم من التكاليف المنخفضة والتنفيذ البسيط ، قد تتأثر حساسية الاختبارات وموثوقية النتائج بسبب المحللين عديمي الخبرة - خاصة فيما يتعلق بتحديد البلورة. يعد تدريب وخبرة المحلل أمرا بالغ الأهمية في التمييز بين شكل وانعكاس بلورات CPP و MSU ومطابقة ش...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
لا يكشف جميع المؤلفين عن أي تضارب في المصالح.
يود المؤلفون أن يشكروا البروفيسور ليوناردو بونزي على إرشاده الثمين في مجال تحليل السائل الزليلي ومستشفى جامعة بادوفا لدعمه.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| Alizarin red S | Merck | A5533 | للبحث عن الكريستال BCP |
| Burker | Merck | BR718905 | لإجمالي عدد خلايا الدم البيضاء |
| غطاء نظارات | Merck | C7931 | للفحص المجهري ؛ |
| أنابيب EDTA | BD | 368861 | لمجموعة SF ؛ |
| شرائح زجاجية | Merck | S8902 | للبحث الكريستالي |
| مرشح Lambda (المعوض) | Any | الرجوع إلى شركة المجهر | لتحديد الكريستال |
| ماصة Malassez-Potain | Artiglass | 54830000 | لتخفيف السائل الزليلي |
| محلول الميثيلين الأزرق | Merck | 3978 | لإجمالي عدد خلايا الدم البيضاء |
| المجهر المستقطب ؛ | لايكا ، نيكون ، آخرون | اعتمادا على النموذج والشركة | لتحليل السائل الزليلي الكامل |
| عدسة الاستقطاب | Any | الرجوع إلى شركة المجهر | لتحديد الكريستال |
| Testsimplet | Waldeck | 14386 | تلطيخ سوبرافيتال لتمايز الخلايا |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه
طلب إذن