يظهر هنا إجراء جراحي للربط الدائم للشريان التاجي الأيسر في الفئران. يمكن استخدام هذا النموذج للتحقيق في الفيزيولوجيا المرضية والاستجابة الالتهابية المرتبطة بها بعد احتشاء عضلة القلب.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
يظهر هنا إجراء جراحي للربط الدائم للشريان التاجي الأيسر في الفئران. يمكن استخدام هذا النموذج للتحقيق في الفيزيولوجيا المرضية والاستجابة الالتهابية المرتبطة بها بعد احتشاء عضلة القلب.
يعد مرض نقص تروية القلب واحتشاء عضلة القلب اللاحق (MI) أحد الأسباب الرئيسية للوفيات في الولايات المتحدة وحول العالم. من أجل استكشاف التغيرات الفيزيولوجية المرضية بعد احتشاء عضلة القلب وتصميم العلاجات المستقبلية ، هناك حاجة إلى نماذج بحثية من MI. يعد الربط الدائم للشريان التاجي الأيسر (LCA) في الفئران نموذجا شائعا للتحقيق في وظيفة القلب وإعادة تشكيل البطين بعد MI. هنا نصف نموذج MI للفأرة الجراحية الأقل توغلا وموثوقية وقابلية للتكرار عن طريق الربط الدائم ل LCA. يتكون نموذجنا الجراحي من تخدير عام يمكن عكسه بسهولة ، والتنبيب الرغامي الذي لا يتطلب بضع القصبة الهوائية ، وبضع الصدر. يجب إجراء تخطيط كهربية القلب وقياس التروبونين لضمان MI. تخطيط صدى القلب في اليوم 28 بعد MI سوف يميز وظائف القلب ومعلمات قصور القلب. يمكن تقييم درجة التليف القلبي من خلال تلطيخ ماسون ثلاثي الألوان والتصوير بالرنين المغناطيسي للقلب. نموذج MI هذا مفيد لدراسة التغيرات الفيزيولوجية المرضية والمناعية بعد MI.
تعد أمراض القلب والأوعية الدموية مصدر قلق كبير للصحة العامة يودي بحياة 17.9 مليون شخص كل عام ، وهو ما يمثل 31 في المائة من الوفيات العالمية1. النوع الأكثر انتشارا من شذوذ القلب والأوعية الدموية هو مرض القلب التاجي ، واحتشاء عضلة القلب (MI) هو أحد المظاهر الرئيسية لأمراض القلب التاجية2. عادة ما يحدث MI بسبب انسداد الشريان التاجي الخثاري بسبب تمزق لوحة ضعيفة3. يسبب نقص التروية الناتج تغيرات أيونية واستقلابية عميقة في عضلة القلب المصابة ، بالإضافة إلى انخفاض سريع في الوظيفة الانقباضي. MI يؤدي إلى وفاة خلايا عضلة القلب ، والتي يمكن أن تؤدي إلى مزيد من ضعف البطين وفشل القلب4.
البحث عن MI في المرضى محدود بسبب ندرة الأنسجة التي تم الحصول عليها من المرضى الذين يعانون من MI5. على هذا النحو ، فإن نماذج الفئران من MI مفيدة في كل من دراسة آليات المرض وكذلك تطوير الأهداف العلاجية المحتملة. تشمل نماذج الفئران المتاحة حاليا من MI نماذج نقص التروية التي لا رجعة فيها (LCA وطرق الاستئصال) ونماذج إعادة التروية (نقص التروية / إعادة التروية ، I / R)6. الربط الدائم للشريان التاجي الأيسر (LCA) في الفئران هو الطريقة الأكثر استخداما ، وهو يقلد الفيزيولوجيا المرضية والمناعة في MI في المرضى7،8،9. يمكن أيضا إحداث MI الدائم عن طريق طرق الاجتثاث ، والتي تنطوي على تلف كهربائي أو إصابة بالتبريد. طرق الاجتثاث قادرة على توليد احتشاء موحد الحجم في الموقع الدقيق10. من ناحية أخرى ، قد يختلف تكوين الندبة ومورفولوجيا الاحتشاء وآليات الإشارات الجزيئية بين طرق الاجتثاث10,11. طريقة الفئران I / R هي نموذج MI مهم آخر لأنها تمثل السيناريو السريري لعلاج إعادة التروية12. يرتبط نموذج I / R بتحديات مثل حجم الاحتشاء المتغير ، وصعوبة التمييز بين استجابات الإصابة الأولية ، وإعادة التروية6.
على الرغم من استخدامها على نطاق واسع ، إلا أن طرق ربط LCA ترتبط بمعدلات بقاء منخفضة وألم ما بعد الجراحة13. يوضح هذا البروتوكول نموذج MI الجراحي للفئران لربط LCA الذي يتضمن تحضير الفئران وتنبيبها ، وربط LCA ، والرعاية بعد الجراحة ، والتحقق من صحة MI. بدلا من استخدام بضع القصبة الهوائيةالغازية 14 ، تستخدم هذه الطريقة التنبيب الرغامي. يتم تنبيب الحيوان عن طريق إلقاء الضوء على البلعوم الفموي باستخدام منظار الحنجرة ، مما يجعل الإجراء أسهل وأكثر أمانا وأقل صدمة15. يتم الاحتفاظ بالماوس على دعم جهاز التنفس الصناعي وتحت تخدير الأيزوفلوران طوال العملية. علاوة على ذلك ، يتم إجراء تخطيط صدى القلب وتلطيخ ماسون ثلاثي الألوان لتقييم وظائف القلب والتليف القلبي بعد MI ، على التوالي. بشكل عام ، توفر هذه الطريقة نموذجا جراحيا موثوقا به وقابلا للتكرار من MI يمكن استخدامه لدراسة الفيزيولوجيا المرضية والالتهاب بعد MI.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تمت مراجعة بروتوكول الدراسة الحالي والموافقة عليه من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام الحيوان (IACUC) بجامعة بيتسبرغ. تم استخدام ثمانية (sham n = 4 و MI n = 4) إناث الفئران C57BL / 6J البالغة من العمر 1 عاما والتي تزن 24-30 جم لهذه التجارب. نجا ما يقرب من 100 ٪ و 80 ٪ على الأقل من الفئران في أول 24 ساعة و 28 يوما ، على التوالي.
1. إعداد والتنبيب الرغامي للفئران
2. الربط الدائم للشريان التاجي الأيسر
3. رعاية ما بعد الجراحة
4. تقييم تخطيط صدى القلب
ملاحظة: تم إجراء تخطيط صدى القلب لتقييم معلمات قصور القلب في اليوم 28 بعد MI.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
يوضح الشكل 1 إشارات تخطيط القلب والتنفس النشطة التمثيلية أثناء تقييم تخطيط صدى القلب للفئران الوهمية (الشكل 1 أ) و MI (الشكل 1 ب). يعد التحقق من إشارات تخطيط القلب والتنفس النشطة أمرا مهما قبل الحصول على بيانات تخطيط صدى القلب. يوضح الشكل 2 قياس تخطيط صدى القلب للمعلمات الوظيفية للقلب بعد 28 يوما من ربط LCA. يوضح الشكل 2 صورا للوضع M لمنظر المحور القصير ش...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
يكتسب نموذج الفئران من MI شعبية في مختبرات أبحاث القلب والأوعية الدموية ، وتصف هذه الدراسة نموذج MI القابل للتكرار والمناسب سريريا. يعمل هذا البروتوكول على تحسين عملية ربط LCA بعدة طرق. بادئ ذي بدء ، يتم تجنب استخدام التخدير عن طريق الحقن قبل الجراحة مثل زيلازين / الكيتامين أو بنتوباربيتال الصوديوم14،15 . تم استخدام تخدير الأيزوفلوران فقط ، مما يساعد على تعزيز معدلات بقاء الحيوانات (>80٪ البقاء على قيد الحياة بعد 28 يوما من الجراحة) ، وتقليل المضاعفات التي يسببها...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للكشف عنه.
تم دعم هذا العمل من خلال منح المعهد الوطني للصحة (R01HL143967 و R01HL142629 و R01AG069399 و R01DK129339) ، وجائزة AHA للمشروع التحويلي (19TPA34910142) ، وجائزة AHA للمشروع المبتكر (19IPLOI34760566) ، وجائزة مشروع الابتكار ALA (IA-629694) (إلى PD).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 22 جرام إبرة قسطرة | Exel INT | 26741 | بزل الصدر |
| 24 جرام إبرة قسطرة | Exel INT | 26746 | التنبيب الرغامي |
| 4-0 خياطة النايلون | Covetrus | 29263 | خياطة العضلات والجلد |
| 8-0 خياطة النايلون | S & T | 3192 | ربط |
| مبخرات التخدير | تجهيز الطبيب البيطري | VE-6047 | دعم التخدير |
| مراقب فسيولوجيا | Fujifilm | VEVO 3100 | مراقبة معدل ضربات القلب ومعدل التنفس ودرجة حرارة الجسم |
| محلول البيتادين | PBS صحة | 11205 | مضاد للتنفيذ |
| بوبرينورفين | كوفيتروس | 55175 | مسكن |
| مجهر مفكك | OMANO | OM2300S-V7 | |
| ماكينة حلاقة كهربائية | مجهر Wahl | 79300-1001M | الحلاقة |
| مختبرات | باركر W60698L | جل موصل للكهرباء | |
| مختبرات الإيثانول | Decon | 22-032-601 | |
| ملقط | FST | 11065-07 | الفولاذ |
| شاش | Curity | CAR-6339-PK | مصباح |
| حراري | Satco | S4998 | رعاية ما بعد الجراحة |
| وسادة تسخين | كينت Scientific | Surgi-M | التحكم في درجة الحرارة |
| معقم الخرزة الساخنة | بربات 500 | 11503 | تعقيم الأدوات الجراحية |
| Isoflurane | Covetrus | 29405 | Anesthesia |
| Masson’ s طقم تلطيخ ثلاثي الألوان | Thermoscientific | 87019 | قياس تليف القلب |
| حامل إبرة صغيرة | FST | 12500-12 | دقيق من الفولاذ المقاوم |
| FST | 15000-02 | عيون من الفولاذ المقاوم | |
| Dechra | Puralube Vet | زيوت تشحيم العين المعقمة | |
| ضوئي جل | مختبرات باركر | Aquasonic 100 | جل نقل الموجات فوق الصوتية المائي |
| FST | 14060-11 | الفولاذ المقاوم | |
| منظار الحنجرة الحيواني الصغير | Penn-Century | Model LS-2-M | إضاءة البلعوم الفموي |
| التنفس الصناعي للحيوانات الصغيرة | جهاز هارفارد | 557058 | دعم جهاز التنفس الصناعي |
| ضوء جراحي | كول بارمر | 41723 | عرض الإضاءة (بوصة): 7 |
| منصة التصوير قبل السريري Vevo 3100 | Fujifilm | VEVO 3100 | تخطيط صدى |
| القلب برنامج VevoLAB | Fujifilm | VevoLAB 3.2.6 | تحليل بيانات تخطيط صدى القلب |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.