داء هو التهاب دماغ فيروسي حاد وتدريجي. ينتمي العامل المسبب على شكل رصاصة إلى جنس فيروس ليسا ، والذي يسبب 17 منها على الأقل داء في جميع أنحاء العالم (باستثناء القارة القطبية الجنوبية). فيروس داء هو أهم عضو في فيروسات الحمض النووي الريبي المتنوعة. جميع الثدييات معرضة للإصابة ، حيث تعتبر الخفافيش آكلة اللحوم من الخزانات الهامة. يحدث الانتقال في المقام الأول بعد اللدغة. كعوامل عصبية مثالية ، تتقدم الفيروسات بشكل مركزي بعد الترسيب عبر المحاور من المحيط إلى الجهاز العصبي المركزي (CNS) للنسخ المتماثل ، وبعد ذلك إلى الغدد اللعابية ، وتفرز في اللعاب. على الصعيد العالمي ، مسؤولة عن أكبر عدد من الوفيات البشرية بسبب داء ، مما يتسبب في عشرات الآلاف من الوفيات سنويا. بالنظر إلى الأبعاد الحيوانية المنشأ ، تعد الأساليب المختبرية ضرورية للبحث التطبيقي والإخطار بالأمراض والوقاية منها ومكافحتها في البشر الأليفة والحياة البرية. الهدف من هذه المجموعة المكونة من تسع مقالات مترابطة هو تقديم طرق توفر الاستبطان لحدوث داء ، والكشف ، وعلم الأحياء المرضي ، وعلم الأوبئة ، والإدارة ، والتحسين في البيولوجيا.
كيف يتم تقييم داء؟ يجب أن يكون داء مرضا يجب الإبلاغ عنه ، مع جمع البيانات وتحليلها وتفسيرها الوبائي بشكل مناسب. اليوم ، يتم الإبلاغ عن معظم الحالات من المراقبة السلبية ، بناء على التي تعرض الناس. في حين أنه قد يبدو من السهل بشكل معقول تصور الالتقاط الآمن ، وضبط النفس ، والتخدير ، والقتل الرحيم للمشتبه به السريري (أي عض لتشخيص داء) ، إلا أن هذا ليس سهلا بالنسبة لبعض الحياة البرية. على سبيل المثال ، كانت تايوان منطقة تعتبر "خالية" من داء ، واستندت في الأصل إلى مراقبة مكثفة للحيوانات الأليفة. ومع ذلك ، إدراكا لأهمية خزانات الأخرى ، حول المحققون في الجزيرة انتباههم إلى الحياة البرية. كما يصف Hsu et al. ، توفر المجموعة المستهدفة من الخفافيش المحتضرة والميتة فرصة للكشف عن أنواع فيروسات lyssavirus الفريدة في تايوان1. وسعت هذه الجهود الاتساع التصنيفي لهذا الجنس الفيروسي وقدمت مخططا معقولا لتقييمات أخرى في آسيا.
ما هي الأنسجة اللازمة لتشخيص فيروس ليسا؟ بالإضافة إلى اشتقاق طرق المراقبة ذات الصلة وتحديد الأنواع بشكل صحيح ، فإن اختيار الأنسجة الآمن والمناسب أمر بالغ الأهمية للتشخيص الحساس والمحدد لداء. منذ القرن التاسععشر ، تم تقدير الجهاز العصبي المركزي (CNS) كنسيج أساسي. تم القتل الرحيم للحيوانات ، وتم إرسال جثثها إلى المختبر ، وفتح الجماجم ، وإزالة الأدمغة ، وفحص الأجزاء مجهريا بحثا عن شوائب فيروسية. ومع ذلك ، فإن شحن الكاملة ليس عمليا ، خاصة مع الثدييات ذات الجسم الكبير مثل الماشية. علاوة على ذلك ، ليست كل مناطق الدماغ مفيدة بنفس القدر للتشخيص. يصف جارفيس وآخرون طرق التشريح الآمنة والعملية لكل من الثدييات الصغيرة والكبيرة التي تقلل من مخاطر التعرض وتقلل من أوقات المعالجة2. سيؤدي تطبيق توصيات السلامة الأحيائية هذه والتركيز على جذع الدماغ والمخيخ إلى تحسين ممارسات المراقبة المختبرية الحديثة لداء الحيواني.
ما هي الخيارات المستخدمة للكشف عن المستضد الفيروسي؟ للتشخيص الروتيني لفيروس ليسا، تم استخدام اختبار الأجسام المضادة الفلورية المباشرة (DFA) لمراقبة الشوائب الفيروسية في أنسجة الجهاز العصبي المركزي منذمنتصف القرن العشرين. على الرغم من كونه شديد الحساسية وتحديدا ، إلا أن اختبار DFA يتطلب مجهره فلوريا ويستخدم الأسيتون كمثبت للأنسجة. أبلغ باتريك وآخرون عن استخدام اختبار كيميائي مناعي مباشر وسريع (DRIT) يعتمد على جمع جذع الدماغ ، وتثبيت الفورمالين لطبعات الأنسجة ، واستخدام الأجسام المضادة أحادية النسيلة أو متعددة النسيلة المقترنة بالبيوتين ، والكشف عن الشوائب الفيروسية عن طريق الفحص المجهري الضوئي ، في أقل من 1 ساعة3. يتمتع الدرافت بحساسية وخصوصية مماثلة لاختبار DFA ، وهو مناسب للمراقبة اللامركزية والمعززة في المختبر في ظل الظروف الميدانية. بالنسبة للإعدادات المحدودة للموارد ، يعد اختبار التدفق الخطي (LFA) طريقة أخرى للتشخيص السريع يتطلب الحد الأدنى من الخبرة الفنية ، كما أفاد Mauti et al.. يمكن إرسال شرائط الاختبار الإيجابية من الميدان إلى المختبر المركزي للتأكيد4.
إلى جانب الكشف عن المستضد ، هل هناك طرق أخرى مناسبة لتشخيص فيروس ليسا؟ تعد اختبارات DFA و drit و LFA مفيدة للكشف عن المستضدات الفيروسية في أنسجة الجهاز العصبي المركزي بعد الوفاة. ومع ذلك ، قد تتحلل أنسجة المخ. علاوة على ذلك ، في الحالات البشرية المشتبه بها ، تكون اختبارات ما قبل الوفاة مرغوبة أكثر ويمكن أن تشمل عينات سريرية بديلة مثل السائل الدماغي النخاعي. على هذا النحو ، فإن المقايسات الجزيئية مفيدة جدا للكشف عن كميات صغيرة من الأحماض النووية الفيروسية. Marston et al. و Wang et al. يصف تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي والمتداخلة ، على التوالي ، وهي سريعة وحساسة ومحددة5،6. يسمح هذا الاهتمام الدقيق بالتفاصيل لتقليل تلوث العينة وتصميم التمهيدي المناسب بالتشخيص الأولي عبر طيف فيروسات الليسا المتباينة.
بمجرد التشخيص ، هل الفحص المجهري التقليدي مناسب للرؤى الحديثة حول علم الأحياء المرضي لفيروس ليسا؟ قد يؤدي استخدام الطرق المجهرية ثنائية الأبعاد وحدها إلى فقدان العناصر الحرجة في الجسم الحي في السياق والتعقيد. ومع ذلك ، باستخدام أهداف مسافة العمل الحرة الطويلة ، يمكن تصوير الأنسجة المصابة بالفيروس عن طريق الفحص المجهري بالليزر متحد البؤر التقليدي بدقة عالية ، كما هو مفصل من قبل Zaeck et al. ، لتصور توزيع مسببات الأمراض وتقدير التفاصيل الدقيقة بشكل أفضل حول التسبب في المرض الفيروسي ، والانتشار ، والاستواء ، والغزو العصبي7.
هل هناك بدائل لقياس فاعلية لقاح داء؟ تتطلب الطرق الحالية لقياس فاعلية لقاح داء أعدادا كبيرة من القوارض المختبرية. ومع ذلك ، فإن التكاليف وفترات الثقة وقضايا الرعاية الاجتماعية تتطلب بديلا. يثير البروتين السكري لفيروس داء الأجسام المضادة المعادلة للفيروس بعد التطعيم. كما أبلغ Jallet و Tordo ، يمكن استخدام اختبار ELISA في المختبر بدلا من لقياس المحتوى النسبي للقاحات فيروس داء ، باستخدام الأجسام المضادة وحيدة النسيلة عالية التحديد8.
هل يمكن الاستدلال على استهلاك اللقاح الفموي للطعم من قبل الحياة البرية باستخدام المؤشرات الحيوية؟ بخلاف التطعيم بالحقن للإنسان الأليفة ، بدأ التطعيم الفموي للحيوانات آكلة اللحوم البرية منذ سبعينيات القرن الماضي. إلى جانب قياس مناعة اللقاح أو الفعالية الناتجة بين مجموعات الثعالب والراكون والظربان وما إلى ذلك من خلال اكتشاف الحالة ، يمكن استخدام المؤشرات الحيوية لاستنتاج ملامسة الطعوم المحملة باللقاحات واستهلاكها. تاريخيا ، تم الكشف عن التتراسيكلين المدمج من الطعوم في عظام أو أسنان. بديل لجمع هذه الأنسجة الصلبة هو القياس المصلي لمؤشر حيوي مختلف ، مثل حمض اليوفينوكسيك. تقرير بيرنتسن وآخرون عن تحليلات هذه المشتقات في مصل النمس ، وهو خزان طبيعي مهم في آسيا ، تم إدخاله إلى منطقة البحر الكاريبي9. بعد استهلاك الطعم الذي يحتوي على هذه العلامة الحيوية من قبل النمس الأسيرة ، قاموا باستخراج أحماض اليوفينوكسيك في الأسيتونيتريل وتحليل الأمصال الحيوانية عن طريق قياس الطيف الكتلي السائل والكروماتوغرافيا. تم الكشف عن علامات كافية لعدة أسابيع بعد استهلاك الطعم ويمكن أن تكون هذه المشتقات مناسبة للتقييم الميداني لامتصاص الطعم المحمل باللقاحات في ذات النطاق الحر.
ويرجع ذلك جزئيا إلى جائحة COVID-19 المستمر ، من المتوقع تحسين الأساليب الفيروسية في تعزيز مراقبة فيروس الليسا ، واكتشاف مسببات الأمراض ، والتشخيص التأكيدي ، وتوصيف المتغيرات. عادة ما تكون القراءة عن التقنيات المختلفة في الأدبيات التي راجعها الأقران هي الخطوة الأولى للفرد المهتم. ومع ذلك ، فإن المراقبة المباشرة لسلسلة من الخطوات ، والاستماع إلى السياق من مشغل متمرس ، يزيل الفروق الدقيقة وسوء التفسير. ويمكن أن تستفيد البروتوكولات المختبرية والميدانية الحالية والمستقبلية المتعلقة بداء، على النحو الذي أوصت به المنظمة العالمية لصحة ومنظمة الصحة العالمية، من مجموعات إضافية من الأساليب المرئية لمساعدة الباحثين الجدد، لا سيما داخل البلدان النامية.