يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

تصوير الخلايا الحية للكرات الأرضية خارج الجسم الحي السليمة باستخدام حامل مطبوع 3D جديد

2.3K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/64510

⸱

أكتوبر 6, 2022

 ,  ,  ,  , 
1Department of Pharmacology, School of Medicine, Boston University, 2Department of Biochemistry, School of Medicine, Boston University, 3Department of Ophthalmology, School of Medicine, Boston University

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

يصف هذا العمل بروتوكولا تجريبيا جديدا يستخدم حاملا مطبوعا ثلاثي الأبعاد لتمكين تصوير الخلايا الحية عالي الدقة للكرات الأرضية المنزوعة. من خلال هذا البروتوكول ، يمكن ملاحظة نشاط إشارات الكالسيوم الخلوية في ظهارة القرنية المصابة من الكرات الأرضية خارج الجسم الحي في الوقت الفعلي.

الملخص

التئام الجروح الظهارية القرنية هو عملية هجرة تبدأ عن طريق تنشيط مستقبلات purinergic المعبر عنها على الخلايا الظهارية. ينتج عن هذا التنشيط أحداث تعبئة الكالسيوم التي تنتشر من خلية إلى أخرى ، وهي ضرورية لبدء الحركة الخلوية في سرير الجرح ، مما يعزز التئام الجروح بكفاءة. طور مختبر Trinkaus-Randall منهجية لتصوير استجابة التئام جروح القرنية في كرات الفئران خارج الجسم الحي في الوقت الفعلي. يتضمن هذا النهج استئصال كرة أرضية سليمة من فأر تم قتله رحيما وفقا للبروتوكولات المعمول بها واحتضان الكرة الأرضية على الفور بصبغة مؤشر الكالسيوم. يمكن تطبيق صبغة مضادة تلطخ الميزات الأخرى للخلية في هذه المرحلة للمساعدة في التصوير وإظهار المعالم الخلوية. عمل البروتوكول بشكل جيد مع العديد من أصباغ الخلايا الحية المختلفة المستخدمة في مكافحة التلطيخ ، بما في ذلك الأكتين SiR لتلطيخ الأكتين وصبغة غشاء البلازما الحمراء العميقة لتلطيخ غشاء الخلية. لفحص الاستجابة للجرح ، يتم إصابة ظهارة القرنية باستخدام إبرة 25 G ، ويتم وضع الكرات الأرضية في حامل مطبوع 3D. تتم معايرة أبعاد حامل الطباعة 3D لضمان تجميد الكرة الأرضية طوال مدة التجربة ويمكن تعديلها لاستيعاب العيون ذات الأحجام المختلفة. يتم إجراء التصوير بالخلايا الحية لاستجابة الجرح بشكل مستمر على أعماق مختلفة في جميع أنحاء الأنسجة بمرور الوقت باستخدام الفحص المجهري متحد البؤر. يسمح لنا هذا البروتوكول بإنشاء صور عالية الدقة وجودة النشر باستخدام هدف هوائي 20x على مجهر متحد البؤر. يمكن أيضا استخدام أهداف أخرى لهذا البروتوكول. وهو يمثل تحسنا كبيرا في جودة تصوير الخلايا الحية في كرات الفئران خارج الجسم الحي ويسمح بتحديد الأعصاب والظهارة.

المقدمة

القرنيه
القرنية عبارة عن بنية شفافة غير وعائية تغطي السطح الأمامي للعين والتي تنكسر الضوء لتمكين الرؤية وتحمي الجزء الداخلي من العين من التلف. نظرا لأن القرنية تتعرض للبيئة ، فهي عرضة للتلف من الأسباب الميكانيكية (الخدش) ومن العدوى. عادة ما تلتئم إصابة القرنية في مريض سليم في غضون 1-3 أيام. ومع ذلك ، في المرضى الذين يعانون من حالات كامنة بما في ذلك نقص الخلايا الجذعية الحوفية ومرض السكري من النوع الثاني ، يمكن أن تطول عملية التئام جروح القرنيةبشكل كبير 1. نظرا لأن القرنية معصبة للغاية ، فإن قرح القرنية غير الشافية وتآكل القرنية المتكرر مؤلمة للغاية وتقلل بشكل كبير من نوعية حياة المرضى الذين يعانون منها1.

إشارات الخلية
عندما تصاب قرنية سليمة ، تسبق أحداث إشارات الكالسيوم في الخلايا المجاورة للجرح وتدفع الهجرة الخلوية إلى سرير الجرح ، حيث تغلق الإصابة دون التعرض لخطر التندب 2,3. تم وصف أحداث الإشارات هذه بشكل جيد في نماذج زراعة الخلايا الظهارية للقرنية باستخدام تصوير الخلايا الحية2. تظهر التجارب الأولية إشارات الكالسيوم بشكل ملحوظ بعد الإصابة في الخلايا غير المصابة بالسكري مقارنة بخلايا السكري. ومع ذلك ، فقد ثبت أن توصيف أحداث إشارات الخلية في الكرات الأرضية خارج الجسم الحي يمثل تحديا تقنيا.

تصوير الخلايا الحية
نجحت الدراسات السابقة في تسجيل أحداث إشارات الكالسيوم من نماذج زراعة الخلايا في المختبر لالتئام جروح القرنية4،5،6. إن تطوير منهجية لإنتاج صور عالية الجودة لأحداث الإشارات هذه في الأنسجة خارج الجسم الحي أمر مهم للغاية لأنه سيسمح بدراسة هذه الأحداث في نظام أكثر تعقيدا وواقعية. تضمنت الأساليب السابقة تشريح القرنية متبوعا بالشلل في جل PEGالناجم عن الأشعة فوق البنفسجية 7،8،9. يعد التثبيت خطوة أساسية ولكنها صعبة عند العمل مع الأنسجة الحية ، حيث يجب أن تظل قابلة للحياة ورطبة طوال فترة التجربة. علاوة على ذلك ، يجب ألا يؤدي الشلل إلى إتلاف الأنسجة. في حين أن حل PEG يجمد الأنسجة ، إلا أن دقة وجودة الصور المنتجة لم تكن متسقة. لذلك ، تم تطوير حوامل مطبوعة 3D لشل حركة الكرات الأرضية السليمة لإنتاج صور عالية الجودة مع مخاطر أقل لتلف الأنسجة.

النهج المتبع
تم تطوير حامل مطبوع 3D فريد من نوعه لشل حركة الكرات الأرضية خارج الجسم الحي لتصوير الخلايا الحية. يمنع هذا الحامل الضرر من مصدرين رئيسيين: فهو يسمح بتصوير الكرة الأرضية المنزوعة النواة دون الحاجة إلى تشريح القرنية ، ويزيل التعرض للأشعة فوق البنفسجية. بدون مصادر الضرر هذه ، مثلت الصور التي تم الحصول عليها بدقة أكبر الاستجابة لإصابات الخدش التي تم إجراؤها تجريبيا. علاوة على ذلك ، تمت معايرة حامل الطباعة 3D إلى الأبعاد الدقيقة لعين الفأر. قدم هذا ملاءمة أفضل بكثير من الشلل في محلول PEG ، مما أدى إلى صورة عالية الجودة في أهداف أقل طاقة بسبب انخفاض حركة الأنسجة. يضمن قضيب الغطاء المتصل بالجزء العلوي من الحامل بقاء الكرة الأرضية غير متحركة طوال مدة التجربة وعدم وجود إزاحة للكرة الأرضية عند تطبيق وسائط النمو للحفاظ على الترطيب والحيوية. تتيح لنا القدرة على طباعة الحامل بأبعاد دقيقة أيضا إنشاء ملاءمة مثالية لعيون الفئران ذات الأحجام المختلفة بسبب العمر أو حالة المرض. يمكن تطبيق هذه التكنولوجيا على نطاق أوسع لتطوير حوامل لعيون الأنواع المختلفة بناء على أبعادها.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة على الإجراءات التي تنطوي على مواضيع حيوانية من قبل جمعية أبحاث الرؤية وطب العيون لاستخدام الحيوانات في رعاية العيون وأبحاث الرؤية وبروتوكول IACUC بجامعة بوسطن (201800302).

1. تصميم أصحاب المطبوعة 3D وشريط الغطاء

  1. تصميم حوامل الطباعة ثلاثية الأبعاد وشريط الغطاء الذي يمثل متوسط قطر كرات الماوس وطباعة التصميم ثلاثي الأبعاد (الشكل 1 أ ، ب).
  2. حافظ على قطر الجدار الداخلي للحامل أكبر قليلا من متوسط قطر الكرة الأرضية لحساب الأحجام المختلفة للفئران الفردية. حافظ على ارتفاع الحامل عند حوالي نصف قطر الكرة الأرضية ، مما يضمن ملاءمة محكمة للكرة الأرضية عند تأمينها بواسطة شريط الغطاء المطبوع 3D.
  3. قم بقياس قضيب غطاء الحامل بطول القطر الخارجي للحامل بعرض يتراوح من 1/4 إلى 1/2 من قطر الحامل. تم تحديد حجم قضيب الغطاء للسماح بالوصول إلى الكرة الأرضية عند تثبيته في الحامل للترطيب وإزالة العين في نهاية التجربة.
  4. اطبع الحامل وشريط الغطاء.

2. جمع العينات

  1. تم استخدام فئران القتل الرحيم (ذكور C57BL / 6 فئران تتراوح أعمارهم بين 9-12 أسبوعا و 27 أسبوعا في هذه الدراسة) باستخدام البروتوكولات المعمول بها وفقا للإرشادات المؤسسية. بالنسبة لهذا البروتوكول ، قم بإجراء القتل الرحيم بثاني أكسيد الكربون متبوعا بقطع الرأس.
  2. قم بإزالة رأس الماوس وضعه على الفور على الثلج للحفاظ على صلاحية الأنسجة. قم باستئصال الكرات الأرضية باستخدام أدوات التشريح مع منع تلف الأنسجة.
  3. بروتينوز الكرة الأرضية باستخدام ملاقط. قص العصب البصري باستخدام مقص تشريح أسفل المكان الذي تمسكه به الملقط.
    ملاحظة: لمزيد من الاحتياطات ، قم بتنفيذ الخطوات التالية في غطاء التدفق الرقائقي.
  4. احتضان الكرات الأرضية في 2 مل من الوسط في طبق زراعة الخلايا p35 بما في ذلك مؤشر الكالسيوم و / أو صبغة غشاء الخلية لمدة 1 ساعة في حاضنة 37 درجة مئوية ، 5٪ CO2 مع ظروف الإضاءة المنخفضة. تأكد من غمر الكرات الأرضية في وسط التلوين لتلطيخ موحد.
    1. بالنسبة للتجارب التي أجريت هنا ، استخدم مؤشر الكالسيوم ، Fluo4-AM (1: 100) 2 ، وصبغة مضادة غشاء الخلية ، صبغة غشاء البلازما الحمراء العميقة (1: 10000) 2 ، بتركيز نهائي 1٪ (v / v) DMSO و 0.1٪ (وزن / حجم) حمض بلورونيك في 2 مل من وسط مصل الخلايا الكيراتينية الخالي (KSFM) مع مكملات النمو التالية: 25 ميكروغرام / مل مستخلص الغدة النخامية البقري ، 0.02 نانومتر عامل نمو البشرة ، 0.3 mM CaCl2 ، والبنسلين الستربتومايسين (100 وحدة / مل و 100 ميكروغرام / مل ، على التوالي).
      ملاحظة: تختلف ظروف وأوقات الحضانة اعتمادا على مؤشر الكالسيوم ونوع الأنسجة وحجم العينة. عند استخدام حمض pluronic ، ينصح بالحذر لأنه يجعل الأنسجة قابلة للنفاذ. يدعو هذا البروتوكول إلى 10٪ حمض بلورونيك. تم تحديد تركيزات أقل من حمض pluronic تجريبيا لتكون غير فعالة ، والتركيزات الأعلى خطر تلف الأنسجة.

3. إعداد حاملي العينات

  1. قم بلصق الحوامل على غطاء زجاجي نظيف مع غراء لم يتم استخدامه من قبل. يأتي الغراء المستخدم في هذا البروتوكول من حاويات تستخدم مرة واحدة لضمان العقم ويتم استخدام حاوية جديدة غير مفتوحة في كل مرة.
  2. اغسل الحامل بنسبة 70٪ إيثانول. ضع الغراء على الحامل وألصق الحامل بغطاء الغطاء السفلي الزجاجي. تأكد من عدم وجود غراء داخل المنطقة الداخلية للحامل لأن الغراء يمكن أن يتألق ، مما يعقد التصوير.
  3. انتظر حتى يصلب الغراء. تأكد من أن الحامل محكم ضد قسيمة الغطاء.
    ملاحظة: تم استخدام ألواح الخلايا P35 ذات أغطية ذات قاع زجاجي للتجارب المعروضة في هذه المخطوطة. يمكن استبدال الشرائح و / أو الألواح الأخرى ذات القاع الزجاجي بناء على احتياجات التجربة.

4. جرح كرات العين

  1. قم بإزالة الكرات الأرضية من محلول التلوين باستخدام قطارات العين المعقمة ، مع الحرص على منع تلف الأنسجة في المنطقة محل الاهتمام. اغسل الكرات الأرضية لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة باستخدام محلول ملحي معقم مخزن بالفوسفات لإزالة البقع الزائدة ، وضع الكرات الأرضية في الوسط لنقلها إلى المجهر.
  2. جرح الكرات الأرضية باستخدام إبرة معقمة 25 غرام في المنطقة محل الاهتمام.
    1. باستخدام قطارة العين المعقمة ، التقط الكرة الأرضية وأمسك بها من مؤخرة العين. سيؤدي ذلك إلى الحفاظ على استقرار الكرة الأرضية ، ومنعها من التدحرج ، والسماح بعمل جروح ثابتة. باستخدام هذا الإعداد ، سيكون العصب البصري داخل فوهة قطارة العين ، وستكون القرنية متجهة للخارج.
    2. لجرح الخدش ، حرك إبرة معقمة برفق 25 جم عبر القرنية المكشوفة. لجرح ثقب ، اضغط برفق على الإبرة مباشرة في القرنية المركزية. تأكد من أن الجرح لا يثقب القرنية.
      ملاحظة: تخطي هذه الخطوة إذا لم تكن استجابة الجرح أو البيئة الجريحة مطلوبة للتجربة. أظهرت الدراسات السابقة أن كلا من جروح الخدش وجروح البزل في قرنية الفئران المصنوعة باستخدام هذه الطريقة متسقة في كل من القطر والعمق10. تم تأكيد أبعاد الجرح بين الكرات الأرضية المستقلة باستخدام تحليل منطقة الاهتمام.

5. وضع العينة على حامل

  1. ضع القرنية أو منطقة القزحية على غطاء الغطاء في المنطقة الداخلية للحامل وثبت باستخدام الغطاء المطبوع 3D (الشكل 1C-H).
  2. تأكد من وضع الكرة الأرضية بشكل صحيح وأن موقع الاهتمام ملامس لغطاء الغطاء الزجاجي. بمجرد وضع الكرة الأرضية في الحامل ، لا تحاول إزالة الكرة الأرضية لأن ذلك قد يتسبب في تلف الأنسجة.
  3. التمسك غطاء مطبوع 3D لحامل باستخدام الغراء، وضمان الاستقرار. تأكد من أن شريط الغطاء يلتصق بالحامل وليس بالكرة الأرضية.
    ملاحظة: يتم وضع المنطقة المراد تصويرها لأسفل لأن البروتوكول مكتوب للاستخدام على مجهر مقلوب. يمكن تكييف البروتوكول مع المجاهر المستقيمة باستخدام حوامل ذات نصف قطر داخلي أصغر وإزالة شريط الغطاء. سيؤدي هذا إلى استقرار أقل للكرة الأرضية.

6. تصوير العينة

  1. قم بتشغيل المجهر والغرفة البيئية وتحقق من ترطيب الغرفة. اضبط الغرفة البيئية على 35 درجة مئوية و 5٪ CO2 طوال مدة التجربة.
    ملاحظة: يفضل استخدام المجاهر ذات الغرف البيئية لهذا الإجراء لمنع الجفاف والحفاظ على الكرة الأرضية في درجات حرارة مثالية ولكنها غير مطلوبة.
  2. ضع الغطاء والحامل والكرة الأرضية المستقرة على مسرح المجهر داخل الغرفة البيئية والصورة باستخدام تقنيات التصوير بالخلايا الحية9.
  3. ماصة وسائط نمو إضافية على غطاء الغطاء لمنع الجفاف والحفاظ على صلاحية الأنسجة. تأكد من وجود وسيط كاف في البئر لتغطية الكرة الأرضية في الحامل. اعتمادا على مدة التصوير ، أضف وسيطا جديدا عند الحاجة طوال التجربة.
  4. ابدأ التجارب باستخدام تقنيات وبروتوكولات التصوير بالخلايا الحية. استخدم إعدادات الليزر منخفضة الطاقة للحفاظ على الأنسجة ومنع تلف الأنسجة في التجارب طويلة الأمد. استخدم الأهداف المناسبة لمسافات العمل الطويلة. أجريت التجارب في هذه المخطوطة باستخدام هدف 20x.
    ملاحظة: قوة الليزر وكسبه ، والمدة التجريبية ، والموقع ، ومستوى التصوير كلها متغيرات اعتمادا على المعلمات التجريبية. تم إجراء تجارب التصوير على الكرات الأرضية السليمة التي تتراوح مدتها من 1 ساعة إلى 4 ساعات بنجاح في المنشورات السابقة10.
  5. تسجيل وحفظ البيانات بتنسيق الملف المفضل. ينتج البرنامج الذي يستخدمه المجهر ملفات .czi لتسجيل البيانات.
  6. تخلص من الكرات الأرضية وفقا للبروتوكولات المؤسسية القياسية في نهاية البروتوكول.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تم استخدام هذا البروتوكول لإنتاج بيانات وصور بجودة النشرباستمرار 10. تمثل الصور التي تم الحصول عليها تحسنا كبيرا عند مقارنتها بالنهج السابقة (الشكل 2). باستخدام حامل الطباعة ثلاثية الأبعاد ، يمكن التقاط الصور في جميع أنحاء طبقات القرنية ، ويمكن ملاحظة تعبئة الكالسيوم في مستويات z المختلفة (الشكل 3). تم استخدام هذا النهج لمقارنة إشارات الخلية الخلوية بين طبقات الخلايا القمية والقاعدية عند الجرح في الفئران الصغيرة والكبيرة...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

يصف هذا البروتوكول تقنية تصوير الخلايا الحية التي تستخدم حامل مطبوع 3D لتثبيت وتثبيت عيون الحيوانات السليمة. إنه مصمم للتحايل على العديد من العيوب المهمة المعترف بها مع بروتوكولات تصوير الخلايا الحية السابقة لأنسجة القرنية خارج الجسم الحي . يوفر هذا البروتوكول العديد من المزايا لتصوير الخلايا الحية للكرات الأرضية السليمة. يقلل بشكل كبير من تلف الأنسجة غير الضروري الذي يمكن أن يتداخل مع استجابة التئام الجروح لجروح الخدش المستحثة تجريبيا. وهذا يشمل تلف الأعصاب والظهارة من التشريح والتعرض للأشعة فوق البنفسجية. علاو...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدينا تضارب في المصالح للإفصاح عنه.

شكر وتقدير

نود أن نعترف بالمعاهد الوطنية للصحة لدعم المنح التالية: RO1EY032079 (VTR) و R21EY029097-01 (VTR) و 1F30EY033647-01 (KS) و 5T32GM008541-24 (KS). نود أيضا أن نعرب عن تقديرنا لصندوق ماساتشوستس ليونز لأبحاث العيون وصندوق نيو إنجلاند لزراعة القرنية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
1.75 حمض بولي اللاكتيك الأزرق (PLA) البلاستيكCreality (Shenzen ، الصين)N / Aمادة لحامل
35 مم طبق ، رقم 1.5 غطاء ، قطر زجاج 14 مم ، Poly-D-Lysine CoatedMatTek Corporation (Ashland ، MA)P35GC-1.5-14-CWell للتصوير.
برنامج Autodesk Fusion 360Autodesk (سان رافائيل ، كاليفورنيا).برنامج غيريستخدم لطباعة الحوامل.
د.ب 25 جم 7/8 إبر معقمة للاستخدام الفردي 100 إبرة / صندوقثيرمو فيشر العلمي (والثام ، ماساتشوستس)305124للجروح المستحثة تجريبيا على الكرات الأرضية
CellMask DeepRedInvitrogen (Carlsbad ، CA)C10046غشاء الخلية. مؤشر الكالسيوم. تركيز 1: 10،000 مع تركيز نهائي 1٪ (v / v) DMSO و 0.1٪ (وزن / حجم) حمض البلورونيك
الكامل المنزل سوبر غراءWalgreens (ديرفيلد ، إلينوي)N / Aلربط الحامل بطابعة
Ender 3 Pro 3D بئر التصوير   ؛Creality (Shenzen ، الصين)N / Aلطباعة حامل
FIJI / ImageJImageJ (Bethesda ، MD)رقم الترخيص: GPL2Softwareused لتأكيد اتساق عمق الجرح وقطره بين الكرات الأرضية المستقلة باستخدام تحليل منطقة الاهتمام
Fluo-4Invitrogen (Carlsbad ، CA)مؤشر الكالسيوم F14201. تركيز 1: 100 بتركيز نهائي 1٪ (حجم / حجم) DMSO و 0.1٪ (وزن / حجم) حمض البلورونيك
متوسط خال من مصل الكيراتينيات(والثام ، ماساتشوستس)1700504225 مجم / مل مستخلص الغدة النخامية البقري ، 0.02 نانومتر EGF ، 0.3 ملي CaCl 2< / sub> ، والبنسلين الستربتومايسين (100 وحدة / مل ، 100 ميكرو ؛ جم / مل ، على التوالي) تمت إضافته إلى محلول
ملحي متوسط Phophate-Buffered (PBS)Corning ، Medlabtech (Manassas ، VA)21-040-CVيستخدم لغسل البقع الزائدة من القرنيات قبل التصوير
Zeiss Confocal 880 Microscope باستخدام AiryScanZeiss (Thornwood ، NY)N / Aتم استخدام هدف التكبير 20x
متاح جيبكو

المراجع

  1. Kneer, K., et al. High fat diet induces pre-type 2 diabetes with regional changes in corneal sensory nerves and altered P2X7 expression and localization. Experimental Eye Research. 175, 44-55 (2018).
  2. Lee, Y., et al. Sustained Ca2+ mobilizations: A quantitative approach to predict their importance in cell-cell communication and wound healing. PLoS One. 14 (4), 0213422(2019).
  3. Stepp, M. A., et al. Wounding the cornea to learn how it heals. Experimental Eye Research. 121, 178-193 (2014).
  4. Klepeis, V. S., Cornell-Bell, A., Trinkaus-Randal, V. Growth factors but not gap junctions play a role in injury-induced Ca2+ waves in epithelial cells. Journal of Cell Science. 114 (23), 4185-4195 (2001).
  5. Lee, A., et al. Hypoxia-induced changes in Ca(2+) mobilization and protein phosphorylation implicated in impaired wound healing. American Journal of Physiology. Cell Physiology. 306 (10), 972-985 (2014).
  6. Boucher, I., Rich, C., Lee, A., Marcincin, A., Trinkaus-Randall, V. The P2Y2 receptor mediates the epithelial injury response and cell migration. American Journal of Physiology. Cell Physiology. 299 (2), 411-421 (2010).
  7. Awal, M. R., Wirak, G. S., Gabel, C. V., Connor, C. W. Collapse of global neuronal states in Caenorhabditis elegans under isoflurane anesthesia. Anesthesiology. 133 (1), 133-144 (2020).
  8. Burnett, K., Edsinger, E., Albrecht, D. R. Rapid and gentle hydrogel encapsulation of living organisms enables long-term microscopy over multiple hours. Communications Biology. 1, 73(2018).
  9. Rhodes, G., et al. Pannexin1: Role as a sensor to injury is attenuated in pretype 2 corneal diabetic epithelium. Analytical Cellular Pathology. 2021, 4793338(2021).
  10. Segars, K. L., et al. Age dependent changes in corneal epithelial cell signaling. Frontiers in Cell and Developmental Biology. 10, 886721(2022).
  11. Xu, P., Londregan, A., Rich, C., Trinkaus-Randall, V. Changes in epithelial and stromal corneal stiffness occur with age and obesity. Bioengineering. 7 (1), 14(2020).
  12. Minns, M. S., Teicher, G., Rich, C. B., Trinkaus-Randall, V. Purinoreceptor P2X7 regulation of Ca(2+) mobilization and cytoskeletal rearrangement is required for corneal reepithelialization after injury. The American Journal of Pathology. 186 (2), 285-296 (2016).
  13. Tadvalkar, G., Pal-Ghosh, S., Pajoohesh-Ganji, A., Stepp, M. A. The impact of euthanasia and enucleation on mouse corneal epithelial axon density and nerve terminal morphology. The Ocular Surface. 18 (4), 821-828 (2020).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

تصوير الخلايا الحية للكرات الأرضية خارج الجسم الحي السليمة باستخدام حامل مطبوع 3D جديد
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.