هنا ، نقدم خط أنابيب قياسي للحصول على أورام ATC الفئران بواسطة نماذج الفئران العفوية المعدلة وراثيا. علاوة على ذلك ، نقدم ديناميات الورم والمعلومات المرضية حول الآفات الأولية والمنتشرة. سيساعد هذا النموذج الباحثين على فهم تكوين الأورام وتسهيل اكتشاف الأدوية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نموذج الفئران العفوية لسرطان الغدة الدرقية الكشمي
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
سرطان الغدة الدرقية الكشمي (ATC) هو ورم خبيث نادر ولكنه مميت مع تشخيص كئيب. هناك حاجة ملحة لمزيد من البحث المتعمق حول التسرطن وتطوير ATC ، وكذلك الأساليب العلاجية ، حيث يتم استنفاد العلاجات القياسية بشكل أساسي في مرضى ATC. ومع ذلك ، فقد أعاق الانتشار المنخفض الدراسات السريرية الشاملة وجمع عينات الأنسجة ، لذلك لم يتم إحراز تقدم يذكر في إنشاء علاجات فعالة. استخدمنا الهندسة الوراثية لإنشاء نموذج فأر ATC قابل للتحفيز المشروط (mATC) في خلفية C57BL / 6. تم التنميط الجيني لنموذج الفئران ATC بواسطة TPO-cre / ERT2. برافCA / بالوزن ؛ Trp53ex2-10 / ex2-10 والناجم عن الحقن داخل الصفاق مع عقار تاموكسيفين. باستخدام نموذج الفئران ، قمنا بالتحقيق في ديناميكيات الورم (تراوح حجم الورم من 12.4 مم 2 إلى 32.5 مم2 بعد 4 أشهر من التحريض) ، والبقاء على قيد الحياة (كان متوسط فترة البقاء على قيد الحياة 130 يوما) ، وورم خبيث (حدثت نقائل الرئة في 91.6٪ من الفئران) منحنيات والسمات المرضية (تتميز ب Cd8 و Foxp3 و F4 / 80 و Cd206 و Ki67 و Caspase-3 تلطيخ كيميائي مناعي). أشارت النتائج إلى أن mATC العفوي يمتلك ديناميكيات ورم متشابهة للغاية وبيئة دقيقة مناعية لأورام ATC البشرية. في الختام ، مع التشابه الكبير في السمات الفيزيولوجية المرضية والأنماط الجينية الموحدة ، حل نموذج mATC النقص في أنسجة ATC السريرية وعدم تجانس العينة إلى حد ما. لذلك ، فإنه سيسهل الآلية والدراسات الانتقالية ل ATC ويوفر نهجا للتحقيق في إمكانات العلاج للعقاقير الجزيئية الصغيرة وعوامل العلاج المناعي ل ATC.
المقدمة
سرطان الغدة الدرقية هو واحد من الأورام الخبيثة الغدد الصماءالأكثر شيوعا 1 ، والتي تنشأ من ظهارة الغدة الدرقية. في السنوات الأخيرة ، زاد معدل الإصابة بسرطان الغدة الدرقية بسرعة في جميع أنحاء العالم2. يمكن تقسيم سرطان الغدة الدرقية إلى أنواع متميزة وفقا لدرجة تمايز الخلايا السرطانية. على أساس السلوك السريري والأنسجة ، تنقسم سرطانات الغدة الدرقية إلى سرطانات متمايزة جيدا ، بما في ذلك سرطان الغدة الدرقية الحليمي (PTC) وسرطان الغدة الدرقية الجريبي (FTC) ، وسرطان ضعيف التمايز (PDTC) ، وسرطان الغدة الدرقية غير المتمايز أو الكشمي (ATC) 3. على عكس PTC ، وهو نوع شائع مع سلوك معتدل وتشخيص أفضل
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تم تنفيذ الإجراءات الحيوانية الموصوفة هنا بموافقة لجنة أخلاقيات الحيوان في مستشفى غرب الصين ، جامعة سيتشوان ، تشنغدو ، سيتشوان ، الصين.
1. تحريض الفئران TBP
- تحديد النمط الجيني للفئران
- في حوالي 3 أسابيع ، افصل الفئران الإناث عن ذكور الفئران. في الوقت نفسه ، استخدم مشبك علامة الأذن لإصلاح علامة الأذن. ضع علامات الأذن في النصف السفلي وعلى الثلث الأوسط من الأذن ، مع التأكد من تجنب المنطقة ذات أعلى تركيز للشعيرات الدموية.
- كبح الفئران بلطف ولكن بشكل آمن. فهم بقوة في قاعدة ذيل الماوس. ضع الفئران على سطح يسمح لها بالإمساك بها.
- ضع اليد الحرة برفق ولكن بحزم على الكتفين ، ثم أمسك بسرعة قشرة الرقب....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
لقد حثثنا mATC على التحقيق في نمو الورم ، ووقت بقاء الفئران ، والخصائص المرضية. بعد الحث ، تم التضحية بالفئران على الفور ، وتم جمع العينات (الغدة الدرقية والرئة والكبد) بمجرد العثور على أحد الحالات التالية: 1) الضائقة التنفسية الناجمة عن ضغط الورم. 2) انخفاض الشهية والنطق غير الطبيعي. 3) الخمول بشكل غير عادي. و 4) فقدان وزن الجسم لأكثر من 20٪. أثناء عملية أخذ العينات ، وجدنا أن جميع الفئران (12/12) نجحت في تشكيل الأورام بعد التحريض. سجلنا وقت بقاء الفأر ، وميزات / حجم الورم ، والآفات المنتشرة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الخطوات الحاسمة ضمن بروتوكول تشريح ورم الغدة الدرقية
أثناء التشريح ، يجب فهم الموقع التشريحي للغدة الدرقية بشكل صحيح. الغدة الدرقية هي غدة على شكل فراشة تقع على الجانب الظهري من الغدة تحت الفك السفلي بالقرب من غضروف الغدة الدرقية والقصبة الهوائية. أثناء العملية ، تم تجنب قطع شرايين الدم على جانبي الرقبة بعناية.
تعديل واستكشاف الأخطاء وإصلاحها من سلالة mATC
ATC هو ورم خبيث نادر وعدواني للغاية. الخصائص السريرية لمرضى mATC و ATC لها بعض أوجه التشابه. على وج.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإعلان عنه.
شكر وتقدير
تم دعم هذا العمل من قبل البرنامج الوطني لتطوير البحوث الرئيسية في الصين (2021YFA1301203) ؛ المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (82103031 ، 82103918 ، 81973408 ، 82272933) ؛ مشروع حضانة البحوث السريرية ، مستشفى غرب الصين ، جامعة سيتشوان (22HXFH019) ؛ مشروع التعاون الدولي لمكتب العلوم والتكنولوجيا لبلدية تشنغدو (2020-GH02-00017-HZ) ؛ مؤسسة العلوم الطبيعية في سيتشوان ، 2022NSFSC1314 ؛ "مشروع 1.3.5 لتخصصات التميز ، مستشفى غرب الصين ، جامعة سيتشوان" (ZYJC18035 ، ZYJC18025 ، ZYYC20003 ، ZYJC18003) ؛ وبرنامج سيتشوان للعلوم والتكنولوجيا (2023YFS0098).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 100x محلول استرجاع مستضد السترات (PH 6.0) | MXB | Cat # MVS-0101 | |
| 50x EDTA محلول استرجاع مستضد (درجة الحموضة 9.5) | ZSGB-GIO | Cat # ZLI-9071 | |
| Braf flox / wt < / sup>< em > الفئران | التعاون مع معهد علوم الحياة ، eBond Pharmaceutical Technology Ltd ، تشنغدو ، الصين | ||
| Caspase-3 | Beyotime | Cat # AC033 | |
| إشارات الخلية | CD8 | Cat # 98941 ؛ RRID: AB_2756376 | |
| إشارات الخلية | CD206 | Cat # 24595 ؛ RRID: غرفة AB_2892682 | |
| لتحريض التخدير | RWDlifescience | ||
| طقم كروموجينيك DAB | المحسن MXB | Cat # DAB-2031 | |
| محلول تلطيخ Eosin | ZSGB-GIO | Cat # ZLI-9613 | |
| F4 / 80 | Abcam | Cat # 100790 ؛ RRID: AB_10675322 | |
| إشارات الخلية | Foxp3 | Cat # 12653 ؛ RRID: AB_2797979 | |
| مجفف الأنسجة المغلق بالكامل | Leica Biosystems | ASP300S | |
| محلول تلطيخ الهيماتوكسيلين | ZSGB-GIO | Cat # ZLI-9610 | |
| HistoCore Arcadia آلة تضمين الأنسجة الأوتوماتيكية بالكامل | Leica Biosystems | ||
| Ki67 | Beyotime | Cat # AF1738 | |
| القطاعة الدوارة | RWDlifescience | مجموعات الكشف Minux S700 | |
| SPlink (أنظمة الكشف عن البيوتين والستربتافيدين HRP) | ZSGB-GIO | Cat # SP-9001 | |
| TPO-cre / ERT2< / em> | تعاون الفئران مع معهد علوم الحياة ، eBond Pharmaceutical Technology Ltd ، تشنغدو ، الصين | ||
| Trp53flox / wt < / sup>< / em> الفئران | التعاون مع معهد علوم الحياة ، eBond Pharmaceutical Technology Ltd ، تشنغدو ، الصين | ||
| كسارة الخلايا بالموجات فوق الصوتية | نينغبو Xinyi معدات الموجات فوق الصوتية المحدودة | JY92-IIN | |
| جل الموجات فوق الصوتية | Keppler | KL-250 | |
| نظام الموجات فوق الصوتية | VisualSonics | Vevo 3100 |
المراجع
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics, 2019. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 69 (1), 7-34 (2019).
- Parenti, R., Salvatorelli, L., Magro, G. Anaplastic thyroid carcinoma: Current treatments and potenti....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
