هنا ، نقدم بروتوكولا لإنشاء كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء (HPLC) ، إلى جانب التعرف على بصمات الأصابع الكيميائية متعددة الأنماط ، والتي توفر استراتيجية جديدة لتحديد الأصناف الأصلية من Clematidis Armandii Caulis وزناتها بشكل فعال.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
HPLC إلى جانب البصمات الكيميائية للتعرف على الأنماط المتعددة لتحديد أصالة ياسمين أرماندي كوليس
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
تم إنشاء طريقة لتحديد المواد الطبية الصينية والزناة ذات الصلة بها عن طريق أخذ Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong ، وهو دواء صيني تقليدي مستخدم عالميا) كمثال. تم تحليل ومقارنة عشر دفعات من أصناف Chuanmutong الأصلية وخمس دفعات من الغش ذي الصلة بناء على بصمات الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC) جنبا إلى جنب مع القياسات الكيميائية ، بما في ذلك التحليل العنقودي (CA) ، وتحليل المكونات الرئيسية (PCA) ، وتحليل التمييز الجزئي المتعامد للمربعات الصغرى (OPLS-DA). بالإضافة إلى ذلك ، تم تحديد محتوى β-سيتوستيرول. تم إنشاء البصمة الكيميائية للتحكم في Chuanmutong ، وتم تحديد 12 قمة مشتركة. كان التشابه بين بصمة 10 دفعات من أصناف Chuanmutong الأصلية وبصمة التحكم 0.910-0.989 ، في حين أن تشابه خمس دفعات من الغش كان 0.133-0.720 فقط. استنادا إلى القمم الشائعة في مخطط الكروماتوجرام ، تم تصنيف 15 دفعة من العينات إلى ثلاثة مستويات محتوى بواسطة PCA ، وتم تجميعها في أربع فئات بواسطة CA ، مما حقق تمييزا واضحا بين Chuanmutong الأصلي والغش في Chuanmutong. علاوة على ذلك ، تم العثور على سبعة مكونات تفاضلية يمكنها تحديد Chuanmutong الأصلي والغش من Chuanmutong بشكل فعال من خلال OPLS-DA. كان محتوى β-سيتوستيرول من 10 دفعات من أصناف Chuanmutong الأصلية 97.53-161.56 ميكروغرام / غرام ، في حين أن محتوى β-سيتوستيرول للدفعات الخمس من الغش يختلف اختلافا كبيرا ، من بينها محتوى β-سيتوستيرول من Clematis peterae Hand.-Mazz. وياسمين غوريانا روكسب. Var. finetii Rehd. وآخرون ويلس. كان أقل بكثير من الأصناف الأصلية من Chuanmutong. يوفر محتوى مكون مؤشر HPLC وطريقة التعرف على بصمات الأصابع الكيميائية متعددة الأنماط التي تم إنشاؤها في هذه الدراسة استراتيجية جديدة لتحديد المواد الطبية الصينية الأصلية والغش ذي الصلة بشكل فعال.
المقدمة
تشوانموتونغ ، كوليس جاف من ياسمين أرماندي فرانش. أو Clematis montana Buch.-Ham. ، هو دواء صيني تقليدي شائع الاستخدام في العيادات1،2،3. يتم استخدامه لعلاج مشاكل المسالك البولية ، وذمة ، وتقرحات على اللسان والفم ، وانخفاض إفراز الحليب ، وتصلب المفاصل ، وآلام العضلات الناجمة عن الحرارة الرطبة4. تم الحصول على Chuanmutong دائما من الأصناف البرية ، الموزعة بشكل رئيسي في جنوب غرب الصين ، وخاصة في سيتشوان ، حيث يمكن العثور على أفضل جودة 5,6. من الصعب التمييز بين الأصناف الأصيلة والغش ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. طرق الكشف عن بصمات الأصابع الكيميائية
- الظروف الكروماتوغرافية
- تحضير الأسيتونيتريل (A) / الماء (B) المرحلة المتنقلة. قم بتعيين برنامج تدرج على النحو التالي في برنامج HPLC: 0-20 دقيقة ، 3٪ A-10٪ A ؛ 20-25 دقيقة ، 10٪ أ -13٪ أ ؛ 25-65 دقيقة ، 13٪ أ -25٪ أ ؛ 65-75 دقيقة ، 25٪ أ -40٪ أ ؛ 75-76 دقيقة ، 40٪ أ -3٪ أ ؛ 76-85 دقيقة ، 3٪ أ - 3٪ أ.
- حافظ على معدل تدفق المرحلة المتنقلة عند 1.0 مل / دقيقة.
- قم بإجراء الفصل الكروماتوجرافي على عمود C18 (250 مم × 4.6 مم ، 5 ميكرومتر) يتم الحفاظ عليه عند 30 درجة مئوية.
- اضبط حجم الحقن على 10 ميكرولتر.
- كشف العينات بطول موجي 205 نانومتر.
ملاحظة: للحصول على ال....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
البصمة الكروماتوغرافية ل Chuanmutong وتحليل التشابه (SA)
كانت قيم RSD لوقت الاحتفاظ النسبي للدقة والتكرار والاستقرار أقل من 0.46٪ و 1.65٪ و 0.53٪ على التوالي ؛ كانت قيم RSD لمنطقة الذروة النسبية أقل من 4.23٪ و 3.56٪ و 3.96٪ على التوالي. كما هو موضح في الأشكال 1A ، B ، كان هناك 12 قمة مشتركة مميزة (من الذروة 1 إلى الذروة 12) في بصمات HPLC في عينات Chuanmutong الأصلية العشرة. نظرا لأن منطقة الذروة رقم 10 كانت كبيرة نسبيا ، فقد كانت الدقة جيدة ؛ نظرا لأنه كا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
يعد جمع العينات للبحث الخطوة الرئيسية الأولى لبناء التعرف على الأنماط المتعددة في تحديد أصالة المواد الطبية الصينية. من خلال أبحاث السوق ، وجدنا أن سيتشوان يان وليانغشان وليشان هي مناطق الإنتاج الرئيسية للموارد البرية في تشوانموتونغ. الأصناف ذات الصلة من نفس الجنس لها أيضا نفس التوزيع الجغرافي 6,20 ؛ غالبا ما يساء استخدام CC و DC و DE و XS و SMT ك Chuangmutong16,21 ؛ لذلك ، في هذه الدراسة ، تم جمع 10 دفعا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
تم دعم هذا العمل من قبل مشروع إدارة الطب الصيني التقليدي في سيتشوان (رقم 2020JC0088 ، رقم 2021MS203).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| حمض الخليك | Zhiyuan الكاشف الكيميائي المحدودة ، تيانجين ، الصين | 2017381038 | |
| الأسيتونيتريل | سيجما ألدريتش ؛ شركة التجارة المحدودة ، شنغهاي ، الصين | WXBD5243V | |
| & بيتا ؛ - Sitosterol | Meisai Biological Technology Co.، Ltd. ، تشونغتشينغ ، الصين | 20210201 | |
| ؛ C18 العمود | Yuexu Material Technology Co.، Ltd.، شنغهاي، الصين | Welch Ultimate LP | |
| Chuanmutong | Guoqiang القطع العشبية الصينية المحدودة، سيتشوان، الصين ؛ | 19020103 | CMT-1 |
| Chuanmutong | Hongya Wawushan Pharmaceutical Co.، Ltd. ، سيتشوان ، الصين ؛ | 200701 | CMT-2 |
| Chuanmutong | Hongpu Pharmaceutical Co.، Ltd. ، سيتشوان ، الصين ؛ | 200701 | CMT-3 |
| Chuanmutong | Hongpu Pharmaceutical Co.، Ltd. ، سيتشوان ، الصين & nbsp ؛ | 200901 | CMT-4 |
| Chuanmutong | Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China | 210701 | CMT-5 |
| Chuanmutong | Haobo Pharmaceutical Co.، Ltd. ، سيتشوان ، الصين ؛ | 210401 | CMT-6 |
| Chuanmutong | Xinrentai Pharmaceutical Co.، Ltd. ، سيتشوان ، الصين ؛ | 200901 | CMT-7 |
| Chuanmutong | Wusheng Pharmaceutical Group Co., Ltd., Sichuan, China | 201201 | CMT-8 |
| Chuanmutong | Limin القطع العشبية الصينية المحدودة ، سيتشوان ، الصين ؛ | 201001 | CMT-9 |
| Chuanmutong | Yuhetang Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China | 210501 | CMT-10 |
| Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. Wang | Madzi Bridge, Sanlang Township, Tianquan County, Sichuan, China | - | CC |
| ياسمين في البر apiifolia var. obtusidentata Rehd. وآخرون ويلز. | قرية هايلين ، بلدة Qiliping ، مقاطعة Hongya ، سيتشوان ، الصين ؛ | - | DC |
| ياسمين بيترا اليد.-Mazz. | قرية هوانغمو ، بلدة هوانغمو ، مقاطعة هانيوان ، سيتشوان ، الصين ؛ | - | DE |
| Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils | Mixedang Mountain ، بلدة هوانغوان ، مقاطعة إيمي ، سيتشوان ، الصين ؛ | - | XS |
| ياسمين فينتيانا ليفل وآخرون فانيوت. | قرية وانيان ، بلدة هوانغوان ، مقاطعة إيمي ، سيتشوان ، الصين ؛ | - | SMT |
| التوازن الإلكتروني | Haozhuang Hengping Scientific Instrument Co.، Ltd. ، شنغهاي ، ؛ الصين | FA1204 | |
| Ergosterol | Meisai Biological Technology Co.، Ltd ، تشونغتشينغ ، الصين | 20210201 | |
| الإيثانول | كيلون الكيميائية المحدودة ، تشنغدو ، الصين | 2021112602 | |
| أسيتات الإيثيل | Zhiyuan الكاشف الكيميائي المحدودة ، تيانجين ، الصين | 2017042043 | |
| حمض الفورميك | كيلون الكيميائية المحدودة ، تشنغدو ، الصين | 2016062901 | |
| كروماتوغرافيا السائل عالية الأداء | Agilent ، الولايات المتحدة الأمريكية. | 1260 | |
| IBM SPSS Statistics الإصدار 26.0 | International Business Machines Corporation, | USA-Methanol | |
| Sigma-Aldrich شركة التجارة المحدودة ، شنغهاي ، الصين | WXBD6409V | ||
| الميثانول | كيلون الكيميائية المحدودة ، تشنغدو ، الصين | 202010302 | |
| ن-بوتيل الكحول | Zhiyuan الكاشف الكيميائي المحدودة ، تيانجين ، الصين | 2020071047 | |
| الأثير البترولي | Zhiyuan الكاشف الكيميائي المحدودة ، تيانجين ، الصين | 2020090125 | |
| حامض الفوسفوريك | كوميو الكاشف الكيميائي المحدودة ، تيانجين ، الصين | 20200110 | |
| إصدار SESCF-TCM 2012 | اللجنة الوطنية لدستور الأدوية ، الصين | http://114.247.108.158:8888/login | |
| Stigmasterol | Meisai Biological Technology Co.، Ltd. ، Chongqing ، الصين | 20210201 | |
| Trichloromethane | Sinopharm Group Chemical Reagent Co.، Ltd. ، شنغهاي ، الصين | 20200214 | |
| إصدار Umetrics SIMCA 14.1.0.2047 | Umetrics ، السويد | https://www.sartorius.com/en/products/process-analytical-technology/data-analytics-software/mvda-software/simca/simca-free-trial-download | |
| آلة المياه فائقة النقاء | Youpu Ultrapure Technology Co.، Ltd. ، سيتشوان ، الصين | UPH-II-10T | |
| منظف بالموجات فوق الصوتية | Kunshan Hechuang Ultrasound Instrument Co.، Ltd. ، Jiangsu ، الصين | KH3200E |
المراجع
- Chen, C. R. Chinese Medicine Specimen Picture Book. , Shanghai World Book Company. Shanghai. 116(1935).
- Xiong, J., et al. Lignans from the stems of Clematis armandii ("Chuan-Mu-Tong") and their anti-neuroinflammatory activities. Journal of ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
