Method Article

بناء وتوصيف وتطبيق متجدد لمجاميع الخلايا الجذعية الوسيطة البشرية ذاتية التجميع

DOI:

10.3791/64697

⸱

March 24th, 2023

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1State Key Laboratory of Military Stomatology & National Clinical Research Center for Oral Diseases & Shaanxi International Joint Research Center for Oral Diseases, Center for Tissue Engineering, The Fourth Military Medical University, 2Department of Preventive Dentistry, School of Stomatology, The Fourth Military Medical University, 3College of Life Science, Northwest University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تصف هذه الدراسة طريقة لبناء المجاميع بناء على التجميع الذاتي للخلايا الجذعية الوسيطة البشرية وتحدد الخصائص المورفولوجية والنسيجية للعلاج التجديدي لعيوب العظام القحفية.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يمكن اشتقاق الخلايا الجذعية الوسيطة (MSCs) ، التي تتميز بقدرتها على التجديد الذاتي وإمكانية التمايز متعدد السلالات ، من مصادر مختلفة وتظهر كمرشحين واعدين للطب التجديدي ، خاصة لتجديد الأسنان والعظام والغضاريف والجلد. يسمح النهج المجمع ذاتيا لتجميع MSC ، والذي يبني بشكل خاص مجموعات الخلايا التي تحاكي التكثيف الوسيط النامي ، بتوصيل الخلايا الجذعية عالية الكثافة جنبا إلى جنب مع تفاعلات الخلايا الخلوية المحفوظة والمصفوفة خارج الخلية (ECM) كمكانة للبيئة المكروية. لقد ثبت أن هذه الطريقة تمكن من نقش الخلايا بكفاءة والبقاء على قيد الحياة ، وبالتالي تعزيز التطبيق الأمثل للخلايا الجذعية الجذعية الخارجية في هندسة الأنسجة وحماية تجديد الأعضاء السريرية. توفر هذه الورقة بروتوكولا مفصلا لبناء وتوصيف الركام ذاتي التجميع بناء على الخلايا الجذعية الوسيطة للحبل السري (UCMSCs) ، بالإضافة إلى مثال على التطبيق التجديدي للعظام القحفية. سيساعد تنفيذ هذا الإجراء في توجيه إنشاء استراتيجية فعالة لزراعة MSC لهندسة الأنسجة والطب التجديدي.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعد تكثيف الخلايا الجذعية الوسيطة (MSC) مرحلة أساسية لضمان النمو والتطور الطبيعي للجسم في تكوين الأعضاءالمبكر 1،2 ، خاصة في تكوين العظام والغضاريف والأسنان والجلد1،3،4. في العقود القليلة الماضية ، حققت علاجات هندسة الأنسجة باستخدام الخلايا الجذعية الجذعية المستنبتة بعد الولادة جنبا إلى جنب مع السقالات القابلة للتحلل تطورا مهما في التجديد العظمي5 والغضروف6. ومع ذلك ، قد يكون لاستخدام السقالات بعض العيوب ، مثل الرفض المناعي ، فضلا عن انخفا....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ملاحظة: تمت الموافقة على جميع الإجراءات الحيوانية من قبل لجنة رعاية واستخدامه في الجامعة الطبية العسكرية الرابعة وتم إجراؤها وفقا لدليل المعاهد الوطنية للصحة لرعاية واستخدام المختبر. تم استخدام UCMSCs البشرية المحفوظة بالتبريد التي تم الحصول عليها من مصدر تجاري في هذه الدراسة (انظر جدول المواد). تمت الموافقة على استخدام الخلايا البشرية من قبل لجنة الأخلاقيات التابعة للجامعة الطبية العسكرية الرابعة. تم أخذ UCMSCs كمثال لوصف الإجراء. تم أخذ عيب الجمجمة كمثال لإظهار الحاجة إلى الإصلاح لوصف إجراء الزرع. تكررت جميع التجارب ثلاث مرات.

1. بناء مجاميع UCMSC

  1. إعداد وثقافة....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يمكن إنشاء المجاميع بنجاح من UCMSCs وفقا لسير العمل التجريبي (الشكل 1). يجب تقييم جودة الركام قبل الاستخدام ، من خلال الملاحظة المورفولوجية والتحليل النسيجي. يجب أن يكون الهيكل الرقائقي المتشكل كاملا وكثيفا ، مع تشابك الخلايا لتشكيل نمط منسوج عن طريق الملاحظة المجهرية (الشكل 2 أ). يمكن اكتشاف تجعيد الحواف أثناء التجميع ؛ تشير حواف التجعيد الزائد إلى التجميع غير الناجح الذي يترك فجوات خلوية (الشكل 2 ب). يمكن عرض الركام النها.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مع تقدم التكنولوجيا الحيوية لهندسة الأنسجة ، كانت استراتيجيات بناء هيكل قابل للزرع مع مرونة عالية وتحتوي على خلايا باقية على المدى الطويل يمكنها تحقيق التجديد الأمثل محور تركيز العديد من العلماء. هناك مجموعة متنوعة من طرق الزرع الحالية للخلايا الجذعية الجذعية ، مثل طرق الخلايا فقط ، والسقالات المكملة بالسيتوكينات6،24 ، أو مزيج من الخلايا الجذعية والسقالات5. تقدم هذه الورقة طريقة فعالة لبناء وزرع ركام MSC ،.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإفصاح عنه.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم دعم هذا العمل من خلال منح من المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (81930025 و 82100969 و 82071075) والبرنامج الوطني للبحث والتطوير الرئيسي في الصين (2022YFA1104400 و 2021YFA1100600). نحن ممتنون للمساعدة التي قدمها المركز الوطني للتعليم التجريبي للطب الأساسي (AMFU).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
0.25٪ Trypsin-EDTA (1x)SigmaT4049ممر الخلية
آلة التجفيف الأوتوماتيكيةLEICAASP200sمجفف
الطرد المركزيEppendorf5418R
أنبوب الطرد المركزيThermo Nunc339650الطرد المركزي
صحن ثقافة150466 الحراريةثقافة UCMSCs
الإيثانولSCR10009218تجفيف الركام
مصل الأبقار القاتلSijiqing11011-8611ثقافة UCMSCs
ForcepJZJD1080حصاد الركام
GlutaraldehydeProandy10217-1تثبيت مجموعة
تلطيخ الهيماتوكسيلين والإيوسينالركام beyotimeC0105SHE تلطيخ
HexamethyldisilazaneSCR80068416سطح الركام الجاف
Hoechst33342Sigma14533صبغة نوى الخلية
L-glutamineSigmaG5792ثقافة UCMSCs
مجموعة البقاء / السمية الخلوية الحية / الميتة   ؛InvitrogenL3224وصمة عار الخلايا الحية / الميتة
مجموعة تلطيخ ماسونZHCCD069تلطيخ ماسون
الحد الأدنى الأساسي المتوسط ألفا الأساسي (1x)GibcoC12571500BTثقافة UCMSCs
البارافينلايكا39601006تضمين الأنسجة
بارافورمالديهايدSaint-BioD16013الركام
PBS (1x)MeilunbioMA0015إعادة تعليق وتنقية UCMSCs
البنسلين / الستربتومايسينبروسيل علوم الحياةPB180120ثقافة UCMSCs
Pentobarbital الصوديومSigmaP3761التخدير الحيواني
البوليسبورينPfizerمنع جفاف العين
المجهر الإلكترونيالمسح الضوئي هيتاشيs-4800SEM المراقبة
مقصJZY00030شق جراحي للحيوانات
ستة آبار صفيحةحرارية140675ثقافة UCMSCs
غرزةJinhuanF603خياطة إغلاق الجروح
Xy4-0إغلاق الجروح
المعدات الحراريةمنحةv-0001-0005حمام مائي
UCMSCsBai'ao & نب سب.UKK220201تجاريا UCMSCs
فيتامين CDiyibioDY40138-25 جمالركام الذي يحفز
الزيلينSCR10023418تجفيف الركام
الكلي تثبيت

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Hall, B. K., Miyake, T. Divide, accumulate, differentiate: cell condensation in skeletal development revisited. The International Journal of Developmental Biology. 39 (6), 881-893 (1995).
  2. Hall, B. K., Miyake, T.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Mesenchymal Stem CellsStem Cell AggregatesSelf Assembled AggregatesTissue EngineeringRegenerative MedicineCell EngraftmentExtracellular MatrixCell Cell InteractionsUmbilical Cord MSCsCranial Bone Regeneration
Video Coming Soon

Related Articles