الطرق المحسنة لتثبيت سطح الكولاجين وفحوصات ربط الكولاجين

Nadia Chaher; Giuseppe Digilio; Sara Lacerda; René M. Botnar; Alkystis Phinikaridou

doi:10.3791/64720

يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

الطرق المحسنة لتثبيت سطح الكولاجين وفحوصات ربط الكولاجين

1.4K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/64720

⸱

مارس 24, 2023

Nadia Chaher¹ , Giuseppe Digilio^*² , Sara Lacerda^*³ , René M. Botnar¹^,⁴^,⁵^,⁶ , Alkystis Phinikaridou¹^,⁴

¹School of Biomedical Engineering and Imaging Sciences, King’s College London, ²Dipartimento di Scienze e Innovazione Tecnologica, Università del Piemonte Orientale, ³Centre de Biophysique Moléculaire, CNRS UPR 4301, Université d'Orléans, ⁴BHF Centre of Research Excellence, Cardiovascular Division, King’s College London, ⁵Escuela de Ingeniería, Pontificia Universidad Católica de Chile, ⁶Instituto de Ingeniería Biológica y Médica, Pontificia Universidad Católica de Chile

^* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

يقدم هذا العمل بروتوكولا محسنا لتثبيت الكولاجين من النوع الأول والثالث بشكل متكرر وتحديده على الصفائح الدقيقة ، متبوعا ببروتوكول مقايسة ربط محسن في المختبر لدراسة تفاعلات مركبات الكولاجين باستخدام طريقة مضان تم حلها بمرور الوقت. يتم توفير تحليل البيانات اللاحق خطوة بخطوة وتفسير البيانات.

الملخص

يحدث التليف في أنسجة مختلفة كرد فعل تعويضي للإصابة أو التلف. ومع ذلك ، إذا كان التليف مفرطا ، يمكن أن يؤدي إلى تندب الأنسجة وفشل الأعضاء ، والذي يرتبط بارتفاع معدلات المراضة والوفيات. الكولاجين هو المحرك الرئيسي للتليف ، حيث يعتبر النوع الأول والنوع الثالث من الكولاجين من الأنواع الأساسية المشاركة في العديد من الأمراض الليفية. على عكس البروتوكولات التقليدية المستخدمة لشل حركة البروتينات الأخرى (على سبيل المثال ، الإيلاستين ، والألبومين ، والفيبرونكتين ، وما إلى ذلك) ، فإن البروتوكولات الشاملة لتثبيت أنواع مختلفة من الكولاجين بشكل متكرر من أجل إنتاج طلاءات مستقرة ليست متاحة بسهولة. يعد تثبيت الكولاجين أمرا صعبا بشكل مدهش لأن الظروف التجريبية المتعددة قد تؤثر على كفاءة الشلل ، بما في ذلك نوع الكولاجين ودرجة الحموضة ودرجة الحرارة ونوع الصفيحة الدقيقة المستخدمة. هنا ، يتم توفير بروتوكول مفصل لشل حركة الكولاجين من النوع الأول والثالث وتحديده بشكل متكرر مما يؤدي إلى مواد هلامية / أغشية مستقرة وقابلة للتكرار. علاوة على ذلك ، يوضح هذا العمل كيفية إجراء وتحليل وتفسير دراسات ربط التألق التي تم حلها بمرور الوقت في المختبر للتحقيق في التفاعلات بين الكولاجين والمركبات المرشحة المرتبطة بالكولاجين (على سبيل المثال ، الببتيد المترافق مع مخلب معدني يحمل ، على سبيل المثال ، اليوروبيوم [الاتحاد الأوروبي (III)]). يمكن تطبيق مثل هذا النهج عالميا على العديد من التطبيقات الطبية الحيوية ، بما في ذلك مجال التصوير الجزيئي لتطوير مجسات التصوير المستهدفة ، وتطوير الأدوية ، ودراسات سمية الخلايا ، ودراسات تكاثر الخلايا ، والمقايسات المناعية.

المقدمة

يعرف تراكم النسيج الضام الليفي كجزء من عملية التئام الجروح الطبيعية بعد إصابة الأنسجة بالتليف. ومع ذلك ، إذا فشل ترسب الأنسجة الليفية في الانتهاء واستمر إلى ما هو أبعد مما هو مطلوب لإصلاح الأنسجة ، فإن التليف يصبح مفرطا¹^،². يضعف التليف المفرط فسيولوجيا الأعضاء ووظيفتها ويمكن أن يؤدي إلى تلف الأعضاء وربما فشل الأعضاء³^،⁴^،⁵. هناك محركان رئيسيان للتليف هما بروتينات المصفوفة خارج الخلية (ECM) الكولاجين من النوع الأول والنوع الثالث⁶. الكولاجين هو بروتين هيكلي موجود ف....