Method Article

AMEBaS: استخراج خط الوسط التلقائي وطرح الخلفية للفواصل الزمنية الفلورية النسبية للخلايا المفردة المستقطبة

DOI:

10.3791/64857

June 23rd, 2023

In This Article

Summary

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

غالبا ما تكون الطرق الحالية لتحليل الديناميات داخل الخلايا للخلايا المفردة المستقطبة يدوية وتفتقر إلى التوحيد القياسي. تقدم هذه المخطوطة خط أنابيب جديدا لتحليل الصور لأتمتة استخراج خط الوسط للخلايا المستقطبة المفردة وتحديد السلوك الزماني المكاني من الفترات الزمنية في واجهة سهلة الاستخدام عبر الإنترنت.

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

قطبية الخلية هي ظاهرة عيانية أنشأتها مجموعة من الجزيئات والهياكل المركزة مكانيا والتي بلغت ذروتها في ظهور مجالات متخصصة على المستوى دون الخلوي. يرتبط بتطوير الهياكل المورفولوجية غير المتماثلة التي تكمن وراء الوظائف البيولوجية الرئيسية مثل انقسام الخلايا والنمو والهجرة. بالإضافة إلى ذلك ، تم ربط اضطراب قطبية الخلية بالاضطرابات المرتبطة بالأنسجة مثل السرطان وخلل التنسج المعدي.

غالبا ما تتضمن الطرق الحالية لتقييم الديناميات الزمانية المكانية لمراسلي الفلورسنت في الخلايا المستقطبة الفردية خطوات يدوية لتتبع خط الوسط على طول المحور الرئيسي للخلايا ، والذي يستغرق وقتا طويلا وعرضة للتحيزات القوية. علاوة على ذلك ، على الرغم من أن التحليل النسبي يمكن أن يصحح التوزيع غير المتكافئ لجزيئات المراسل باستخدام قناتين مضان ، إلا أن تقنيات الطرح الخلفية غالبا ما تكون تعسفية وتفتقر إلى الدعم الإحصائي.

تقدم هذه المخطوطة خط أنابيب حسابي جديد لأتمتة وقياس السلوك الزماني المكاني للخلايا المفردة باستخدام نموذج لقطبية الخلية: أنبوب حبوب اللقاح / نمو شعر الجذر وديناميكيات الأيونات الخلوية. تم تطوير خوارزمية من ثلاث خطوات لمعالجة الصور التناسبية واستخراج تمثيل كمي للديناميكيات داخل الخلايا والنمو. تقوم الخطوة الأولى بتقسيم الخلية من الخلفية ، مما ينتج قناعا ثنائيا من خلال تقنية الحد الأدنى في مساحة كثافة البكسل. الخطوة الثانية تتبع مسارا عبر خط الوسط للخلية من خلال عملية الهيكل العظمي. أخيرا ، توفر الخطوة الثالثة البيانات المعالجة كفاصل زمني نسبي وتنتج كيموغراف نسبي (أي ملف تعريف مكاني 1D عبر الزمن). تم استخدام البيانات من الصور النسبية التي تم الحصول عليها باستخدام مراسلي الفلورسنت المشفرة وراثيا من أنابيب حبوب اللقاح المتنامية لقياس الطريقة. يسمح خط الأنابيب هذا بتمثيل أسرع وأقل تحيزا وأكثر دقة للديناميكيات الزمانية المكانية على طول خط الوسط للخلايا المستقطبة ، وبالتالي تطوير مجموعة الأدوات الكمية المتاحة للتحقيق في قطبية الخلية. الكود المصدري AMEBaS Python متاح على: https://github.com/badain/amebas.git

Introduction

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

قطبية الخلية هي عملية بيولوجية أساسية يتوج فيها العمل المتضافر لمجموعة من الجزيئات والهياكل المركزة مكانيا بإنشاء مجالات تحت خلوية مورفولوجية متخصصة1. يعتمد انقسام الخلايا ونموها وهجرتها على مواقع القطبية هذه ، في حين ارتبط فقدانها بالسرطان في الاضطرابات المرتبطة بالأنسجة الظهارية2.

تعد الخلايا النامية قميا مثالا مثيرا على القطبية ، حيث يقوم موقع القطبية عند الطرف عادة بإعادة التوجيه إلى إشارات خارج الخلية3. وتشمل هذه الخلايا العصبية النامية ، والخيوط الفطرية ، وشعيرات الجذر ، وأنابيب حبوب اللقاح ، حيث تظهر العمليات الخلوية المتعددة اختلافات واضحة من طرف الخلية نحو السا....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. بروتوكول دفتر الملاحظات التفاعلي

يمكن استخدام دفتر ملاحظات Jupyter مباشرة على الويب باستخدام Google Colab في https://colab.research.google.com/github/badain/amebas/blob/main/AMEBAS_Colab.ipynb ، حيث تستند الإرشادات أدناه. بدلا من ذلك ، يتوفر دفتر Jupyter في https://github.com/badain/amebas ، حيث يمكن تنزيله وتكوينه للتشغيل محليا في Jupyter (يمكن أن يوفر Anaconda عملية تثبيت سهلة وعبر الأنظمة الأساسية). يمكن العثور على بيانات اختبار كاملة في Zenodo (https://doi.org/10.5281/zenodo.7975350) ، تحتوي على بيانات أحادية ومزدوجة القناة لأنابيب حبوب اللقاح Arabidopsis التي تعبر إما عن الرقم الهيدروجيني أو Ca2+

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعمل خط أنابيب AMEBaS على أتمتة استخراج ديناميكيات خط الوسط للخلايا المفردة المستقطبة من مكدسات الصور المجهرية الفلورية ، مما يجعلها أقل استهلاكا للوقت وأقل عرضة للأخطاء البشرية. تحدد الطريقة هذه الفترات الزمنية عن طريق إنشاء مخططات كيموجرافية ومكدسات صور نسبية (الشكل 1) في الخلايا المفردة النامية. يمكن تعديله للعمل على ترحيل الخلايا المفردة ، ولكن من الضروري إجراء المزيد من التجارب. يتم تنفيذ AMEBaS في Python كدفتر ملاحظات Jupyter تفاعلي (موصوف في القسم بروتوكول دفتر الملاحظات التفا.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الطريقة الجديدة المعروضة هنا هي أداة قوية لتبسيط وأتمتة تحليل مكدسات الصور المجهرية الفلورية للخلايا المستقطبة. تتطلب الطرق الحالية الموضحة في الأدبيات ، مثل المكونات الإضافية ImageJ Kymograph ، تتبعا يدويا لخط الوسط للخلية المستقطبة محل الاهتمام ، وهي مهمة لا تستغرق وقتا طويلا فحسب ، بل إنها أيضا عرضة للأخطاء البشرية. نظرا لأن تعريف خط الوسط في خط الأنابيب هذا مدعوم بطريقة عددية18,19 تؤدي إلى الهيكل العظمي ، تتم إزالة التقييم الذاتي ، مما يقدم معيارا كميا للإجرا.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعلن مؤلفو هذه المخطوطة عدم وجود مصالح مالية متنافسة أو تضارب مصالح آخر.

Acknowledgements

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعرب المؤلفون عن امتنانهم لمنح FAPESP 2015/22308-2 و 2019/23343-7 و 2019/26129-6 و 2020/06744-5 و 2021/05363-0 و CNPq و NIH R01 Grant GM131043 ومنح NSF MCB1714993 MCB1930165 للدعم المالي. تم إنتاج بيانات الشعر الجذري باستخدام البنية التحتية وتحت إشراف البروفيسور أندريا باسي والبروفيسور أليكس كوستا.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
GithubGithubhttps://github.com/badain/amebas
Google ColabGooglehttps://colab.research.google.com/github/badain/amebas/blob/main/AMEBAS_Colab.ipynb

References

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Drubin, D. G., Nelson, W. J. Origins of cell polarity. Cell. 84 (3), 335-344 (1996).
  2. Wodarz, A., Näthke, I. Cell polarity in development and cancer. Nature Cell Biology. 9 (9), 1016-1024 (2007).
  3. Palanivelu, R., Preuss, D.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Cell PolarityRatiometric FluorescenceMidline ExtractionBackground SubtractionSingle Cell AnalysisFluorescence Time LapseCell SegmentationSkeletonizationKymograph GenerationPolarized Cells

Related Articles