$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
في العقد الماضي ، كانت هناك أبحاث مكثفة حول دور الحويصلات خارج الخلية (EV) كمؤشرات حيوية تشخيصية وتنبؤية ، أو أهداف علاجية ، أو ناقلات توصيل الأدوية أو حتى كمرشحين للطب التعويضي أو التجديدي في عدد كبير من الأمراض. EV عبارة عن مركب من الجسيمات غير المتجانسة المحاطة بطبقة ثنائية الفوسفوليبيد يتراوح قطرها بين 30 و 5000 نانومتر ، وهي الإكسوسومات والحويصلات الدقيقة والأجسام المبرمج ، والتي تتوافق مع مجموعة فريدة من وسطاء الاتصال من خلية إلى خلية ، وذلك بفضل عبوتها الانتقائية للجزيئات النشطة بيولوجيا (مثل الدهون والبروتينات والحمض النووي الريبي والمستقلبات). نظرا لأن جميع الخلايا تقريبا (بدائية النواة وحقيقية النواة) تطلق EV ، فقد تشارك في الفيزيولوجيا المرضية لجميع الأمراض تقريبا. في الواقع ، فإن الشحنة الجزيئية ل EV التي يتم إطلاقها بعد حافز معين ، تحدد آلية عملها وتعكس حالة الخلية الأبوية.
على الرغم من كل الجهود العلمية والتقدم التقني ، لا يزال البحث في خصائص وهيكل وتكوين ونشاط الفيزيولوجيا المرضية والتمثيل الغذائي / إزالة المركبات الكهربائية يواجه تحديا تقنيا من خلال منهجية استخراج وتنقية المركبات الكهربائية. في هذا السياق ، يهدف جمع الطريقة هذا إلى الإبلاغ عن طرق عزل وتنقية EV ، لمزيد من التطبيقات النهائية.
في هذا العدد ، يصف العتاوي وزملاؤه1 عزل EV المشتق من خلايا الطحال في نموذج فئران للعدوى بواسطة Porphyromonas gingivalis. يقوم المؤلفون بعزل EV عن طريق الطرد المركزي التفاضلي من تعليق خلية الطحال ، وبعد ذلك يحصدون EV لدراسة آثاره في الجسم الحي . ومع ذلك ، يذكر المؤلفون أنه يجب تكييف طريقتهم مع الخلايا الملتصقة.
جونز والمؤلفون المشاركون2 ، عزل EV الذي نشأ بواسطة الخلايا قليلة التغصن المستزرعة التي تجمع بين كروماتوغرافيا استبعاد الحجم (SEC) والترشيح الفائق 3-KDa ، وبالتالي ضمان نقاء EV مناسب مع الحد الأدنى من تلوث البروتين في مستخلصاتها. يمكن استخدام هذه الطريقة شبه الآلية تقريبا لجميع التطبيقات النهائية مثل المقايسات الوظيفية والتوصيف الجزيئي للتصوير EV أو EV.
تم اقتراح لجنة الأوراق المالية والبورصات أيضا من قبل Ryan et al. 3, لعزل EV من المتفطرة السل, من أجل فهم فسيولوجيا البكتيريا, التفاعل مع المضيف, والشحنة الجزيئية EV. في هذه المخطوطة المنهجية ، يقارن المؤلفون أداء الطرد المركزي الفائق لتدرج الكثافة و SEC ، وخلصوا إلى أن استرداد EV ونقاء EV يتم تحسينه عند إجراء SEC. يقترح المؤلفون أيضا أنه يمكن تطبيق المنهجية الموصوفة على EV الأخرى المشتقة من البكتيريا الفطرية.
فالي تامايو وآخرون. 4 ، وصف طريقة سهلة من خطوتين للحصول على EV مشتق من الخلايا النجمية عن طريق ترسيب قائم على البوليمر والتقاط المناعة مع جسم مضاد لسطح الخلية النجمية -1 (ACSA-1) مقترن بحبيبات دقيقة مغناطيسية. يقترح المؤلفون أنه يمكن دمج الالتقاط المناعي مع SEC بدلا من الترسيب البوليمري ، وأنه يمكن اقتران الخرزات الدقيقة المغناطيسية مع الأجسام المضادة الأخرى لعزل EV عن أنواع الخلايا الأخرى. قد يكون تذكر هذه المركبات الكهربائية من البلازما البشرية أو السوائل الحيوية الأخرى ذات قيمة عالية في مجال الأمراض العصبية أو الاضطرابات ذات الصلة.
في المخطوطة الأخيرة من العدد ، يقترح كوه وزملاؤه5 طريقة ترشيح فائق لعزل EV الصغيرة (sEV) من الخلايا الجذعية الوسيطة البشرية المستنبتة. يذكر المؤلفون أنه يمكن استخدام مستخلصات EV المعزولة بالترشيح الفائق للتطبيقات العلاجية وغيرها من التحليلات النهائية. في حين أن هذه طريقة بسيطة وسريعة يمكن تطبيقها على السوائل الحيوية الأخرى وأنواع مختلفة من الخلايا الأصلية ، يقر المؤلفون بأنها قد لا تكون مناسبة على نطاق واسع للتطبيقات الصناعية.
بشكل عام ، يوفر هذا العدد الخاص طرقا معملية مختلفة بسيطة وسهلة نسبيا لعزل المركبات الكهربائية من أحجام مختلفة ، ومن مجموعة متنوعة من العينات ، مثل البكتيريا والأعضاء الحيوانية والخلايا البشرية. يختلف عائد الاستخراج والنقاء بين الطرق ، ويجب أخذه في الاعتبار لاختيار الطريقة الأكثر فعالية من حيث التكلفة والوقت وفقا للاستخدام النهائي للمركبات الكهربائية المعزولة.
أخيرا ، أود أن أختتم كلمتي بشكر جميع المؤلفين والمراجعين على مساهماتهم ، وهيئة تحرير مجلة التجارب المرئية على مساعدتهم القيمة في مثل هذه العملية. آمل مخلصا أن يكون هذا العدد الخاص مفيدا لمحققي المركبات الكهربائية في أبحاثهم المستقبلية.