تم تنفيذ جميع الإجراءات الحيوانية وفقا للتوجيه 2010/63 / EU. تمت الموافقة على الإجراءات من قبل هيئة رعاية المؤسسية ، المرخصة من قبل DGAV ، السلطة البرتغالية المختصة بحماية (ترخيص رقم 0421/000/000/2021). تم استخدام ذكور فئران Wistar Han IGS (Crl: WI (Han) (400-500 جم) في عمر 12-14 أسبوعا في الدراسة الحالية. تم الحصول على من مصدر تجاري (انظر جدول المواد).
1. إعداد الحلول
- محلول مخدر
- املأ حقنة سعة 3 مل ب 2.3 مل من ميديتوميدين (1 مجم / مل ؛ 0.715 مجم / كجم من وزن الجسم) وانقلها إلى أنبوب طرد مركزي سعة 15 مل.
- املأ حقنة سعة 3 مل ب 1.55 مل من الفنتانيل (0.05 مجم / مل ؛ 0.02 مجم / كجم من وزن الجسم) وانقلها إلى نفس أنبوب الطرد المركزي سعة 15 مل.
- املأ حقنة سعة 10 مل ب 6.15 مل من الميدازولام (5 مجم / مل ؛ 9.5 مجم / كجم من وزن الجسم) وانقلها إلى نفس أنبوب الطرد المركزي سعة 15 مل ، مما يجعل محلول مخدر سعة 10 مل.
- قم بتسمية الأنبوب وتخزينه في درجة حرارة 4 درجات مئوية في الظلام.
ملاحظة: يوفر هذا المزيج المخدر (ميديتوميدين وفنتانيل وميدازولام) نافذة جراحية مخدرة تصل إلى 3 ساعات. إدارة أتيباميزول وفلومازينيل قد يعيد التأثير.
- محلول مضاد للمهدئات
- املأ حقنة سعة 1 مل ب 0.7 مل من أتيباميزول (5 مجم / مل ؛ 3.72 مجم / كجم من وزن الجسم) وانقلها إلى أنبوب طرد مركزي سعة 15 مل.
- املأ حقنة سعة 10 مل ب 9.3 مل من فلومازينيل (0.1 مجم / مل ؛ 1.56 مجم / كجم من وزن الجسم) وانقلها إلى نفس أنبوب الطرد المركزي سعة 15 مل ، مما يجعل محلول مضاد للمهدئات سعة 10 مل.
- قم بتسمية الأنبوب وتخزينه في درجة حرارة 4 درجات مئوية في الظلام.
- حلول تسكين ما بعد الجراحة
- املأ حقنة سعة 1 مل ب 0.5 مل من الكاربروفين (50 مجم / مل ؛ 5 مجم / كجم من وزن الجسم) وانقلها إلى أنبوب طرد مركزي سعة 15 مل.
- أضف 9.5 مل من محلول كلوريد الصوديوم (0.9٪) ، واحصل على محلول كاربروفين سعة 10 مل.
- املأ حقنة سعة 1 مل ب 1 مل من البوبرينورفين (0.3 مجم / مل ؛ 0.01-0.05 مجم / كجم من وزن الجسم) وانقلها إلى أنبوب طرد مركزي سعة 15 مل.
- أضف 9 مل من محلول كلوريد الصوديوم (0.9٪) ، واحصل على محلول البوبرينورفين 10 مل.
- قم بتسمية الأنابيب وتخزينها في درجة حرارة 4 درجات مئوية في الظلام.
- المضادات الحيوية المحيطة بالجراحة
- املأ حقنة سعة 2.5 مل ب 2.5 مل من إنروفلوكساسين (25 مجم / مل ؛ 10 مجم / كجم من وزن الجسم) وانقلها إلى أنبوب طرد مركزي سعة 15 مل.
- أضف 7.5 مل من محلول كلوريد الصوديوم (0.9٪) ، للحصول على محلول إنروفلوكساسين سعة 10 مل.
- قم بتسمية الأنبوب وتخزينه في درجة حرارة 4 درجات مئوية في الظلام.
ملاحظة: يتم سرد تفاصيل جميع الكواشف لإعداد الحلول المذكورة أعلاه في جدول المواد.
2. الحث الجراحي لتضيق مجرى البول
ملاحظة: تم إجراء العمليات الجراحية باستخدام مجهر ستيريو (10x) (انظر جدول المواد).
- تعقيم جميع الأدوات الجراحية قبل الاستخدام: شفرة المشرط (رقم 11) ، ملقط مدبب ، مقص زنبركي ، ملقط جراحي ، حامل إبرة عيون ، مقص جراحي ، وحامل إبرة. استخدم كرات قطنية معقمة لتنظيف المجال الجراحي.
- قم بتحميل المحقنة بمحلول التخدير قبل إمساك الفئران.
- كبح جماح باستخدام أنبوب أو منشفة ورفع الذيل لفضح البطن.
- الحفاظ على ضبط النفس وإجراء حقن داخل الصفاق من محلول التخدير (أعدت في الخطوة 1.1).
- اختبر ردود فعل انسحاب دواسة الفئران لتقييم التخدير.
- تطبيق هلام العين واقية في كلتا العينين من. إجراء حقن تحت الجلد من محلول المضاد الحيوي (المحضر في الخطوة 1.1) ، عند 10 ملغم / كغم من وزن الجسم.
- ضع الجرذ في وضع الاستلقاء الظهري على وسادة ساخنة واستخدم مجهر تشريح بتكبير 10x أو 20x لإجراء العملية الجراحية.
- نظف القضيب وجلد البطن المحيط به باستخدام البوفيدون اليود (100 مجم / مل).
- اسحب القلفة يدويا وضع خياطة إقامة سطحية (7.0 خياطة ؛ انظر جدول المواد) في الجانب الظهري من حشفة القضيب لتطبيق الجر على القضيب ، وترك حامل الإبرة في مكانه للحفاظ على تراجع القضيب.
- ضع قسطرة وريدية 22 جيجا في مجرى البول للقسطرة باستخدام هلام مواد التشحيم.
- باستخدام شفرة مشرط جراحية (رقم 11) ، قم بإجراء شق بطني طولي 1 سم في جلد القضيب.
- باستخدام الملقط المدبب والمقص الربيعي ، قم بتشريح طبقات أنسجة القضيب حتى تعريض مجرى البول عند مستوى منتصف العمود.
- باستخدام جهاز الكي الكهربائي (انظر جدول المواد) ، قم بتطبيق تيار بقدرة 10 واط ، لمدة 1 ثانية ، في الجوانب الجانبية للإحليل (في مكان واحد على كل جانب) ، بطنيا على مستوى العمود الأوسط للقضيب.
- أغلق الشق بخياطة جري قابلة للامتصاص 6.0 (انظر جدول المواد).
- إزالة قسطرة مجرى البول. إزالة خياطة الجر القضيب.
- إجراء الحقن تحت الجلد من التسكين: كاربروفين في 5 ملغ / كغ من وزن الجسم ، والبوبرينورفين في 0.03 ملغ / كغ من وزن الجسم.
- قم بتحميل المحقنة بمحلول مضاد للمهدئات (تم إعداده في الخطوة 1.2) ، ومع وجود في الاستلقاء البطني ، قم بخيمة الجلد المترهل لإدارة حقنة تحت الجلد من المحلول المضاد للمهدئات.
3. الإجراء الجراحي لرأب الإحليل مع طعم الغشاء المخاطي الشدقي
ملاحظة: تم إجراء العمليات الجراحية باستخدام مجهر ستيريو (10x) (انظر جدول المواد).
- تعقيم جميع الأدوات الجراحية اللازمة لهذا التدخل: ملقط مدبب ، مقص زنبركي ، حامل إبرة عينية ، مقص جراحي ، حامل إبرة ، ثلاثة ملقط للبعوض ، وشفرة مشرط (رقم 11). استخدم إسفنجات صغيرة لتنظيف المجال الجراحي.
- تطبيق المخدر والمضاد الحيوي وضبط النفس ووضع كما هو موضح سابقا (الخطوات 2.2-2.8).
- نظف الغشاء المخاطي الشدقي للشفة السفلى والقضيب وجلد البطن المحيط باستخدام البوفيدون اليود (100 مجم / مل).
- ضع ثلاث خيوط (7.0 غرز) في الشفة السفلى ، على كلا الجانبين وفي المنتصف ، واترك البعوضة في كل واحدة لسحب الشفة السفلية وكشف الغشاء المخاطي الداخلي.
- باستخدام مقص زنبركي وملقط مدبب ، احصد طعما قطره 4 مم من الغشاء المخاطي الشدقي الداخلي للشفة السفلية ، وضعه في مستقبل صغير بمحلول ملحي معقم (0.9٪ كلوريد الصوديوم).
- ضع ضغطا في المنطقة المانحة باستخدام اسفنجة للإرقاء.
- قم بإزالة خيوط البقاء الموضوعة مسبقا في الشفة السفلى.
- كشف القضيب كما هو موضح سابقا (الخطوة 2.9).
- ضع قسطرة وريدية 22 جيجا في مجرى البول للقسطرة باستخدام هلام مواد التشحيم.
- باستخدام مقص الربيع ، قم بإجراء شق محيطي شبه إكليلي وأزل قفاز القضيب إلى القاعدة.
- باستخدام الملقط المدبب ومقص الربيع ، قم بتشريح الطبقات المتبقية وفضح مجرى البول.
- باستخدام شفرة مشرط جراحي (رقم 11) ومقص زنبركي ، قم بإجراء شق بطني طولي ، يبدأ من 3 مم بعيدا إلى التلم الإكليلي في امتداد 4 مم ، مع تباعد مجرى البول على مستوى التضيق الذي تم تحريضه مسبقا (الخطوة 2).
- ضع خيطين من مادة 7.0 ، واحدة على كل جانب من الملعقة ، واترك البعوضة في كل واحدة لسحب مجرى البول.
- ضع غرزتين 7.0 غير قابلة للامتصاص ، واحدة في كل طرف من طرفي الملعقة.
- ضع طعم الغشاء المخاطي الشدقي بطريقة بطانة بطنية بحيث يواجه جانب الغشاء المخاطي تجويف مجرى البول.
- مرر إحدى الغرز من خلال نهاية الكسب غير المشروع وقم بإجراء نصف قطع ناقص مع خياطة جارية.
- كرر الخطوتين 3.15 و 3.16 مع الخيط الآخر على الجانب الآخر من الكسب غير المشروع.
- إزالة قسطرة مجرى البول. تغيير موضع جلد القضيب.
- أغلق الشق المحيطي شبه الإكليلي بخياطة متقطعة قابلة للامتصاص 6.0.
- إزالة خياطة الجر القضيب.
- تطبيق التسكين متبوعا بالمحلول المضاد للمهدئات، كما هو موضح في الخطوات 2.16-2.17.
4. مراقبة ما بعد الجراحة
- مراقبة الفئران ثلاث إلى أربع مرات كل ساعة ، مما يؤكد تعافيها من التخدير. مراقبة التنفس وتقييم ردود فعل الدواسة والعين.
- حقن التسكين تحت الجلد كل 12 ساعة لمدة 48 ساعة.
ملاحظة: تم إعطاء كاربروفين عند 1 مل / 500 مجم من وزن الجسم ، وتم إعطاء البوبرينورفين عند 0.5 مل / 500 مجم من وزن الجسم (انظر جدول المواد).
- توفير الطعام اللين لمدة 48 ساعة بعد كل إجراء والماء الإعلاني.
- مراقبة الفئران يوميا بعد الجراحة وتسجيل حالتها الصحية ومظهر موقع الجراحة. تشمل العلامات التي تم تقييمها تعبيرات الوجه ، والنطق ، وحالة النشاط ، وأي علامة على الألم ، وتناول الطعام والشراب ، والإفراغ ، والنزيف.
5. تقييم نضح الدم
ملاحظة: يتم قياس تدفق الدم مباشرة قبل تحريض التضيق ، وقبل رأب الإحليل مباشرة ، وبعد رأب الإحليل مباشرة.
- إجراء تصوير التروية دوبلر بالليزر.
- تخدير الفئران باستخدام محلول التخدير (الخطوة 1.1).
- ضع مستلق الفئران على وسادة تسخين 37 درجة مئوية مع جر القضيب ، كما هو موضح في الخطوة 2.9.
- ابدأ تشغيل جهاز تصوير التروية دوبلر بالليزر (انظر جدول المواد) للحصول على البيانات. اضبط مسبقا منطقة الاهتمام المراد قراءتها بواسطة شعاع الليزر.
- ضع المحلول المضاد للمهدئات (الخطوة 1.2) لإعادة التخدير.
- باستخدام برنامج تحليل الصور ، ارسم منطقة الاهتمام (ROI) حول منطقة القضيب وسجل قيم التدفق بمرور الوقت.
6. التقييم الشعاعي
ملاحظة: يتم تأكيد تأكيد تحريض التضيق وحل التضيق بعد رأب الإحليل باستخدام مخطط الإحليل الرجعي. يتم إجراء هذا التقييم 1 أسبوع بعد تحريض تضيق (قبل رأب الإحليل) و 2 أسابيع بعد رأب الإحليل.
- قم بإجراء تصوير مجرى البول الرجعي باستخدام نظام تصوير الأوعية أحادي المخطط (انظر جدول المواد).
- تخدير الفئران باستخدام محلول التخدير.
- ضع على فراش تصوير الأوعية في استلقاء مائل يمين ، مع جر القضيب ، كما هو موضح في الخطوة 2.9.
- ركز الحزمة المخروطية على منطقة حوض الحيوان ، بما في ذلك القضيب.
- ضع قسطرة وريدية 22 جم متقدمة 2 مم في مجرى البول البعيد.
- ابدأ بغرس 1 مل من مادة التباين الشعاعي لليود (نسبة 1: 1 من محلول يوبروميد 623 مجم / مل و 0.9٪ كلوريد الصوديوم) في مجرى البول.
- في الوقت نفسه ، قم بإجراء التصوير الشعاعي العادي لتحديد التباين الشعاعي الذي يحقق تجويف مجرى البول وتقييم قطر مجرى البول.
- عند الانتهاء من التصوير ، أعد التخدير بمحلول مضاد للمهدئات.
7. القتل الرحيم
ملاحظة: يتم إجراء القتل الرحيم بعد 3 أسابيع من رأب الإحليل (4 أسابيع بعد تحريض التضيق) ، مباشرة بعد تقييم التروية الأخير.
- املأ حقنة سعة 2.5 مل ب 2 مل/كغ من صوديوم بنتوباربيتال (400 ملغ/مل).
- إجراء حقن داخل الصفاق من الحل للقتل الرحيم للحيوان.