يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

حماية خلايا عضلة القلب H9c2 من الإجهاد التأكسدي بواسطة الكروسيتين عبر PINK1 / Parkin Pathway بوساطة الميتوفاجي

2.2K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/65105

⸱

مايو 26, 2023

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1School of Traditional Chinese Medicine, Beijing University of Chinese Medicine, 2Fangshan Chinese Medicine Hospital, Beijing University of Chinese Medicine

في هذه المقالة

ملخص

استنادا إلى التجارب المختبرية ، كشفت هذه الدراسة عن آلية الكروسيتين في إصلاح تلف الإجهاد التأكسدي لخلايا عضلة القلب من خلال التأثير على الميتوفاجي ، حيث يلعب مسار إشارات PINK1 / Parkin دورا مهما.

الملخص

تهدف هذه الدراسة إلى استكشاف التأثير التأكسدي الوقائي للكروسيتين على خلايا عضلة القلبH2 O2 بوساطة H9c2 من خلال التجارب في المختبر ، واستكشاف ما إذا كانت آليتها مرتبطة بتأثير الميتوفاجي. تهدف هذه الدراسة أيضا إلى إظهار التأثير العلاجي لحمض القرطم على الإجهاد التأكسدي في خلايا عضلة القلب واستكشاف ما إذا كانت آليته مرتبطة بتأثير الميتوفاجي. هنا ، تم بناء نموذج الإجهاد التأكسدي القائم على H 2 O2وتقييم درجة إصابة الإجهاد التأكسدي لخلايا عضلة القلب من خلال الكشف عن مستويات نازعة هيدروجين اللاكتات (LDH) ، كيناز الكرياتين (CK) ، malondialdehyde (MDA) ، ديسموتاز الفائق (SOD) ، الكاتلاز (CAT) ، والجلوتاثيون بيروكسيديز (GSH Px). تم استخدام أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) - صبغة الفلورسنت المكتشفة DCFH-DA ، JC-1 dye ، وصبغة TUNEL لتقييم تلف الميتوكوندريا وموت الخلايا المبرمج. تم قياس تدفق الالتهام الذاتي عن طريق نقل الفيروس الغدي Ad-mCherry-GFP-LC3B. ثم تم الكشف عن البروتينات المرتبطة بالميتوفاجي عن طريق النشاف الغربي والتألق المناعي. ومع ذلك ، يمكن للكروسيتين (0.1-10 ميكرومتر) أن يحسن بشكل كبير من صلاحية الخلية ويقلل من موت الخلايا المبرمج وتلف الإجهاد التأكسدي الناجم عن H 2 O2. في الخلايا ذات التنشيط المفرط للالتهام الذاتي ، يمكن أن يقلل الكروسيتين أيضا من تدفق الالتهام الذاتي والتعبير عن البروتينات المرتبطة بالميتوفاجي PINK1 و Parkin ، وعكس نقل Parkin إلى الميتوكوندريا. يمكن أن يقلل الكروسيتين من تلف الإجهاد التأكسدي بوساطة H2O2 وموت الخلايا المبرمج لخلايا H9c2 ، وكانت آليته مرتبطة ارتباطا وثيقا بالميتوفاجي.

المقدمة

احتشاء عضلة القلب الحاد (AMI) هو نخر عضلة القلب الذي يهدد الحياة والناجم عن نقص التروية الشديد والمستمر ونقص الأكسجة في الشرايين التاجية 1,2. التدخل التاجي عن طريق الجلد (PCI) هو أحد استراتيجيات الخط الأول العلاجية ل AMI ، وعادة ما يحمي خلايا عضلة القلب من التلف الإقفاري 3,4. ستفتقر عضلة القلب البعيدة إلى إمدادات الدم والأكسجين إذا لم يتم علاجها على الفور وبشكل فعال بعد AMI ، مما يؤدي إلى نخر نقص تروية ومضاعفات القلب والأوعية الدمويةالأخرى 5,6. كان تعزيز تعافي خلايا عضلة القلب وتقليل تلف عضلة القلب الذي لا رجعة فيه بعد تفويت الفرصة الجراحية PCI نقطة ساخنة للبحث. بعد AMI ، تكون خلايا عضلة القلب في حالة نقص التروية ونقص الأكسجة ، مما يؤدي إلى تثبيط الفسفرة التأكسدية للميتوكوندريا ، وتقليل NAD + إلى NADPH ، وزيادة تقليل الإلكترون الفردي7. نتيجة لذلك ، يولد تفاعل الاختزال غير المكتمل للأكسجين فائضا من أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) ويؤدي في النهاية إلى تلف الإجهاد التأكسدي لخلايا عضلة القلب8. يؤدي التراكم المفرط لأنواع الأكسجين التفاعلية إلى بيروكسيد الدهون ، مما يزيد من تعطيل بنية ووظيفة أغشية الميتوكوندريا. والنتيجة هي فتح مستمر للمسام الانتقالية لنفاذية الميتوكوندريا وانخفاض في إمكانات غشاء الميتوكوندريا ، مما يؤدي إلى موت الخلايا المبرمج والنخر.

يمكن أن تساعد مثبطات الإنزيم المحول للأنجيوتنسين (ACE) ، وحاصرات مستقبلات الأنجيوتنسين (ARBs) ، ومثبطات مستقبلات β الأدرينالين ، ومضادات الألدوستيرون ، والأدوية القياسية الأخرى في AMI في تعزيز وظائف القلب بعد احتشاء عضلة القلب ومنع حدوث الأحداث الخبيثة ، مثل عدم انتظام ضربات القلب وإعادة تشكيل البطين الأيسر9. ومع ذلك ، يتأثر البقاء على قيد الحياة والتشخيص بعد الاحتشاء بشكل كبير بحجم الاحتشاء ، ولم يتم تحقيق نتائج مرضية للحد من موت الخلايا المبرمج في عضلة القلب10,11. وبالتالي ، أصبح تطوير الأدوية لتعزيز انتعاش عضلة القلب بعد احتشاء عضلة القلب قضية ملحة.

كان الطب التقليدي مصدر إلهام للبحوث الصيدلانية الحديثة لسنواتعديدة 12،13،14،15. الطب الصيني التقليدي (TCM) له تاريخ طويل في علاج AMI ، وقد أكدت سلسلة من تجارب التحكم العشوائية في السنوات الأخيرة أن الطب الصيني التقليدي يمكن أن يحسن بالفعل تشخيص المرضى16,17. وفقا لنظرية الطب الصيني التقليدي ، يحدث AMI بسبب ركود الدم18,19 ، لذلك عادة ما تستخدم أدوية تعزيز الدورة الدموية لعلاج AMI في المرحلة الحادة20. من بينها ، يعتقد أن الزعفران له تأثير قوي على تنشيط الدم والركود ، وغالبا ما يستخدم في العلاج الحاد ل AMI. قد يلعب الكروسيتين ، وهو مكون رئيسي للزعفران ، دورا رئيسيا في حماية خلايا عضلة القلب21.

في هذه الدراسة ، تم تحفيز خلايا عضلة القلب H9c2 بواسطة H 2 O2لمحاكاة نقص تروية عضلة القلب / إعادة التروية ، والتي تسبب إصابة عضلة القلب في AMI ، وتم استخدام الكروسيتين كتدخل للتحقيق في تأثيره الوقائي ضد إصابة عضلة القلب الناجمة عن الإجهاد التأكسدي. تم استكشاف آلية حماية الكروسيتين لخلايا عضلة القلب من خلال الميتوفاجي. الأهم من ذلك ، توفر هذه المقالة مرجعا للنهج التقني لدراسة الميتوفاجي وتصف الإجراء التجريبي بأكمله بالتفصيل.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

أجريت التجارب في مختبر علم وظائف الأعضاء في جامعة بكين للطب الصيني ، الصين. تم تنفيذ جميع طرق الدراسة وفقا للمبادئ التوجيهية واللوائح ذات الصلة بجامعة بكين.

1. ثقافة الخلية

  1. أضف 10٪ مصل بقري جنيني و 1٪ بنسلين / ستربتومايسين إلى وسط النسر المعدل (DMEM) من Dulbecco (مع 4.5 جم / لتر D-glucose و 4.g.g / L L-glutamine و 110 mg / L pyruvate الصوديوم ؛ انظر جدول المواد) لتحضير وسط DMEM الكامل.
  2. قم بإذابة خلايا عضلة القلب H9c2 المجمدة بالنيتروجين السائل (انظر جدول المواد) في ماء دافئ عند 37 درجة مئوية مع تحريك سريع وموحد حتى يذوب الجليد.
  3. نقل الخلايا إلى أنبوب الطرد المركزي وإضافة أربعة أضعاف حجم وسط DMEM الكامل. جهاز طرد مركزي عند 358 × جم لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة وتخلص من المادة الطافية باستخدام ماصة.
  4. تمييع تعليق الخلية التي تم الحصول عليها مع وسط الثقافة ، ضربة بلطف ، وتلقيح الخلايا في قارورة الثقافة. الثقافة في حاضنة عند 37 درجة مئوية مع 5٪ CO2.

2. تحديد صلاحية الخلية

  1. إذابة الكروسيتين (انظر جدول المواد) في ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) إلى تركيزات 0.05 ملليمول، 0.1 ملليمول، 0.5 ملليمول، 1 ملي مول، 5 ملليمول، 10 ملليمول، 50 ملي مول، 100 ملليمول، 200 ملليمول.
  2. فصل خلايا عضلة القلب H9c2 عن طريق التربسين ، ثم تحييد الخليط مع DMEM وسط كامل.
  3. نقل الخلايا إلى أنبوب الطرد المركزي وأجهزة الطرد المركزي في 179 × غرام لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. تخلص من المادة الطافية واخلط الخلايا في وسط DMEM الكامل عن طريق النفخ برفق.
  4. عد الخلايا باستخدام لوحة عد خلايا الدم22 (انظر جدول المواد) وقم بتخفيفها إلى 5 × 104 خلايا / مل مع وسط DMEM الكامل.
  5. قسم الخلايا إلى تسعة أجزاء متساوية. أضف DMSO (مخفف بنسبة 1: 1000 مع وسط DMEM الكامل) إلى المجموعة الضابطة وأضف تركيزات مختلفة من الكروسيتين إلى المجموعات المتبقية بنسبة 1: 1000.
  6. بذر الخلايا في 96 لوحة بئر عند 100 ميكرولتر لكل بئر. تخلص من المادة الطافية بعد الحضانة لمدة 24 ساعة واغسل الخلايا ثلاث مرات باستخدام برنامج تلفزيوني.
  7. بعد إضافة 100 ميكرولتر من الوسط القاعدي DMEM ، احتضان الخلايا لمدة 4 ساعات وإضافة 20 ميكرولتر من MTS (انظر جدول المواد).
  8. احتضان الخلايا لمدة 2 ساعة أخرى ، وقياس الامتصاص بطول موجي 490 نانومتر ، وحساب صلاحية الخلية.
    ملاحظة: صلاحية الخلية = (معالجة OD - OD فارغة) / (تحكم OD - OD فارغ) × 100.

3. تحديد نازعة هيدروجين اللاكتات (LDH) ، الكرياتين كيناز (CK) ، مالوندالديهيد (MDA) ، ديسموتاز الفائق (SOD) ، الجلوتاثيون بيروكسيديز (GSH Px) ، والكاتلاز (CAT)

  1. زرع خلايا H9c2 في لوحة 6 آبار بكثافة 1 × 105 خلايا. اجمع المادة الطافية بعد التدخل واكتشف مستويات LDH و SOD ، وفقا لتعليمات الشركة الصانعة (انظر جدول المواد).
  2. اجمع المادة الطافية واغسلها بمحلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) مرة واحدة. أضف الخلية المحللة إلى طبق الاستزراع واتركها تجلس على الثلج لمدة 20 دقيقة. جمع السائل من طبق الثقافة في أنبوب الطرد المركزي.
  3. اكتشف مستويات CK و MDA و GSH-Px و CAT وفقا لتعليمات الشركة المصنعة23 (انظر جدول المواد والملف التكميلي 1).
  4. الكشف عن تركيز البروتين الكلي للتحلل بطريقة حمض bicinchoninic (BCA) لتصحيح تركيز CK و MDA و GSH-Px و CAT24 (انظر جدول المواد).

4. تحديد أنواع الأكسجين التفاعلية

  1. زرع خلايا H9c2 في صفيحة 48 بئرا بكثافة 5 × 103 خلايا. خفف DCFH-DA (انظر جدول المواد) بنسبة 1: 1000 مع الوسط الخالي من المصل. تخلص من طافية الخلية واغسل الخلية مرتين بوسط خال من المصل.
  2. أضف 150 ميكرولتر من DCFH-DA المخفف في كل بئر واحتضانها على حرارة 37 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. اغسل الخلايا ثلاث مرات بوسط خال من المصل والتقط الصور تحت مجهر مضان (انظر جدول المواد).

5. الكشف عن إمكانات غشاء الميتوكوندريا

  1. اكتشف إمكانات غشاء الميتوكوندريا باستخدام مجموعة مقايسة جهد غشاء الميتوكوندريا JC-125 (انظر جدول المواد). تخلصي من وسط الاستزراع واغسليه مرة واحدة بوسط خال من المصل.
  2. أضف حل عمل JC-1 إلى كل أنبوب واخلطهم جيدا. احتضان على حرارة 37 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة وغسل الخلايا مرتين مع العازلة تلطيخ JC-1. أضف وسيطا كاملا لكل بئر والتقط صورا تحت المجهر الفلوري.

6. مقايسة تلطيخ TUNEL

  1. استخدم مجموعة مقايسة موت الخلايا المبرمج TUNEL (انظر جدول المواد) لتحديد معدلات موت الخلايا المبرمج26. تخلص من المادة الطافية واغسل الحبيبات مرة واحدة بوسط خال من المصل.
  2. أضف محلول تثبيت الخلايا واغسله ب PBS مرة واحدة بعد الحضانة في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة.
  3. أضف 0.3٪ تريتون -100 إلى كل بئر واحتضانها في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق. اغسل الخلايا باستخدام برنامج تلفزيوني مرتين. أضف محلول عمل الكشف TUNEL واحتضنه على حرارة 37 درجة مئوية في الظلام لمدة 60 دقيقة.
  4. أضف قرصا مانعا للتسرب مضادا للتألق يحتوي على 4 ′ ، 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI ؛ انظر جدول المواد) والتقط صورا تحت مجهر مضان.

7. مراقبة تدفق الالتهام الذاتي عن طريق نقل الفيروس الغدي mCherry GFP-LC3B

  1. استبدل نصف الوسط في كل بئر بوسط جديد. أضف الفيروس الغدي Ad-mCherry GFP-LC3B (تعدد العدوى [MOI] من 2) إلى وسط الاستزراع وأضف 5 ميكروغرام / مل من البوليبرين (انظر جدول المواد) لتحسين كفاءة العدوى.
  2. استبدل الوسط الطازج بعد 24 ساعة ولاحظ تعبير البروتين الفلوري تحت المجهر متحد البؤر.
  3. استزرع الخلايا بنفس ظروف القسم 1 بعد التأكد من نجاح الإصابة بالفيروس والتقاط الصور تحت المجهر متحد البؤر27.
    ملاحظة: أظهر أكثر من 20٪ من الخلايا مضان البروتين الفلوري الأخضر (GFP) ، مما يشير إلى وجود عدوى ناجحة.

8. تحليل اللطخة الغربية

  1. اجمع الخلايا لاستخراج البروتين الكامل وحللها (RIPA ، مثبط الأنزيم البروتيني ، ومثبط الفوسفاتيز = 100: 1: 1 ؛ انظر جدول المواد) على الجليد لمدة 30 دقيقة.
  2. أضف 5x مخزن مؤقت لتحميل البروتين إلى عينة البروتين بعد القياس الكمي للبروتين وقم بغلي العينات لمدة 10 دقائق.
  3. الكهربائي العينات التي تحتوي على كميات متساوية من البروتين مع الصوديوم دوديسيل كبريتات بولي أكريلاميد هلام الكهربائي (SDS-PAGE) المواد الهلامية28. بعد ذلك ، انقل العينات إلى أغشية البولي فينيليدين ثنائي فلوريد (PVDF).
  4. سد أغشية PVDF لمدة 1 ساعة مع مسحوق الحليب الخالي من الدسم 5٪ واحتضانها مع الجسم المضاد الأساسي (PINK1 ، Parkin ؛ انظر جدول المواد) عند 4 درجات مئوية طوال الليل والجسم المضاد الثانوي في درجة حرارة الغرفة لمدة 1 ساعة.
  5. اكتشف النطاقات المستهدفة باستخدام محلول التلألؤ الكيميائي المحسن (ECL) ونظام الكشف عن التلألؤ الكيميائي. استخدم برنامج Image J لتحديد النطاقات عبر قياس الكثافة28.

9. الكشف عن إزفاء الميتوكوندريا باركين عن طريق التألق المناعي

  1. مراقبة colocalization من Parkin مع الميتوكوندريا عن طريق تلطيخ المناعي المزدوج. تخلص من طافي الخلية من كل مجموعة واغسلها ثلاث مرات باستخدام برنامج تلفزيوني.
  2. ثبت الخلايا لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة باستخدام 4٪ بارافورمالدهايد وأضف 0.1٪ تريتون -100 في برنامج تلفزيوني.
  3. كتلة بمحلول كتلة خالية من الحيوانات (انظر جدول المواد) لمدة 1 ساعة لمنع الارتباط غير المحدد بين البروتينات والأجسام المضادة وتقليل خلفية التألق.
  4. احتضان مع الجسم المضاد الأولي (Parkin and Tom20 ؛ انظر جدول المواد) عند 4 درجات مئوية طوال الليل.
  5. أضف جسما مضادا ثانويا فلوريا (انظر جدول المواد) واحتضانه في الظلام لمدة 1 ساعة.
  6. أضف أقراص التبريد المضادة للتألق المحتوية على DAPI والتقط الصور تحت المجهر متحد البؤر.

10. التحليل الإحصائي

  1. إجراء التحليل الإحصائي باستخدام الرسوم البيانية وبرامج التحليل (انظر جدول المواد).
  2. قارن المتغيرات المستمرة بين المجموعات باستخدام ANOVA. P < 0.05 اعتبرت ذات دلالة إحصائية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

آثار الكروسيتين على صلاحية الخلية
كان للكروسيتين عند 0.1 ميكرومتر و 0.5 ميكرومتر و 1 ميكرومتر و 5 ميكرومتر و 10 ميكرومتر و 50 ميكرومتر و 100 ميكرومتر تأثير تكاثري كبير على الخلايا ، بينما منع الكروسيتين بتركيزات أعلى من 200 ميكرومتر بشكل كبير تكاثر خلايا H9c2 (الشكل 1 أ). بعد 4 ساعات من العلاج ب 400 ميكرومتر H 2 O2، تم تقليل صلاحية الخلية بشكل كبير ، ويمكن للكروسيتين عكس هذا التغيير إلى حد ما (الشكل 1B). نظرا لعدم ملاحظة...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

كان استكشاف المكونات الفعالة من المركبات المعقدة للعقاقير الطبيعية من خلال التكنولوجيا المتقدمة نقطة ساخنة لأبحاث الطب الصيني التقليدي29 ، ويمكن أن يوفر أدلة مختبرية لتطوير الأدوية في المستقبل بعد التحقق. القرطم هو دواء تمثيلي في علاج "تعزيز الدورة الدموية وتقليل ركود الدم" ويستخدم على نطاق واسع في علاج احتشاء عضلة القلب30,31. يعتقد أن الزعفران له تأثيرات مماثلة للقرطم ، وتأثيره في تعزيز الدورة الدموية وإزالة ركود الدم أفضل بكثير من القرطم...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإعلان عنه.

شكر وتقدير

تم دعم هذه الدراسة من قبل مؤسسة بكين للعلوم الطبيعية (رقم 7202119) والمؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (رقم 82274380).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
0.25٪ تريبسينجيبكو2323363
1٪ بنسلين ستربتومايسينسيجماV900929
5x عازلة تحميل البروتينبكين بوليلاي جين تكنولوجيB1030-5
Ad-mCherry GFP-LC3B الفيروس الغديBeyotimeC3011
Alexa Fluor 488 الماعز المترافق المضاد للأرانب IgG (H + L)   ؛تشونغشان الجسر الذهبي التكنولوجيا الحيوية المحدودةZF-0514
Alexa Fluor 594 الماعز المترافق المضاد للفأر IgG (H + L)Zhongshan Golden Bridge Biotechnology Co.، Ltd.ZF-0513
محلول حجب خال منCST15019s
الأجسام المضادة للباركينسانتا كروزsc-32282
الأجسام المضادة المضادة PINK1ABclonalA11435
الأجسام المضادة المضادة ل TOM20ABclonalA19403
المضادABclonalAC026
مجموعة فحص البروتين BCAKeyGEN BiotechKGP902
لوحة عد خلايا الدمServicebiobioWG607
CAT مجموعاتنانجينغ جيانتشنغ الهندسة الحيويةA007-1-1
نظام الكشف عن التلألؤ الكيميائيشنغهاي Qinxiang مصنع الأدوات العلميةChemiScope 6100
CK مجموعات الفحصنانجينغ جيانتشنغ معهد الهندسة الحيويةA032-1-1
الإنزيم المساعد Q10 (CoQ 10)MacklinC6129
CrocetinChengdu Ruifensi Biotechnology Co.، Ltd.المحتوية على RFS-Z01802006012
DAPIZhongshan Golden Bridge Biotechnology Co.، Ltd.ZLI-9557
DCFH-DABeyotimeS0033S
DMSOSolarbioD8371
وسط النسر المعدل من Dulbecco (DMEM)حل Gibco8122091
التلألؤ الكيميائي المحسن (ECL)NCM BiotechP10100
مصل الأبقار الجنينية (FBS)Corning-Cellgro35-081-CV
GraphPad Prism 7.0 https://www.graphpad.com/
مجموعات فحص GSH-Px معهدنانجينغ جيانتشنغ للهندسةالحيوية A005-1-2
H9c2 خلايا عضلة القلببكين Dingguochangsheng Biotech Co.، Ltd.CS0062
بيروكسيداز الفجل الحار (HRP) الماعز المترافق المضاد للماعز IgG (H + L)  تشونغشان الجسر الذهبي التكنولوجيا الحيوية المحدودةZB-2305
بيروكسيداز الفجل الحار (HRP) - الماعز المترافق المضاد للفأر IgG (H + L)   ؛تشونغشان الجسر الذهبي التكنولوجيا الحيوية المحدودةZB-2301
JC-1 مجموعة فحص إمكانات غشاء الميتوكوندرياLABLEADJ22202
مجموعات فحص LDH معهدنانجينغ جيانتشنغ للهندسةالحيوية A020-2-2
مجموعات فحص MDAمعهد نانجينغ جيانتشنغ للهندسة الحيويةA003-2-2
الميثانولعلاء الدينA2114057
اختبار MTSPromegaG3581
PerhydrolG-cloneCS7730
مثبط الفوسفاتيزCWBIOCW2383
PolybreneBeyotimeC0351
أغشية ثنائي فلوريد البولي فينيلدين (PVDF) ميليبورISEQ00010
مقايسة الترسيب المناعي الإشعاعي (RIPA) عازلة تحللSolarbioR0010
المواد الهلامية SDS-PAGEشنغهاي Epizyme التكنولوجيا الطبية الحيويةPG112
SDS-PAGE تشغيل مسحوق العازلةServicebioG2018-1L
SDS-PAGE مسحوق عازلة نقلServicebioG2017-1L
مجموعات فحص SODمعهد نانجينغ جيانتشنغ للهندسة الحيويةA001-2-2
مسحوق محلول ملحي مخزنة ثلاثيةServicebioG0001-2L
Triton X-100SigmaSLCC9172
TUNELBeyotimeC1086
Tween-20SolarbioT8220
للجسم المضاد فحص أقراص التبريد المضادة للفلورة مجموعة فحص موت الخلايا المبرمج

المراجع

  1. Anderson, J. L., Morrow, D. A. Acute myocardial infarction. The New England Journal of Medicine. 376 (21), 2053-2064 (2017).
  2. Samsky, M. D., et al. Cardiogenic shock after acute myocardial infarction: a review. JAMA. 326 (18), 1840-1850 (2021).
  3. Abbate, A., et al. Survival and cardiac remodeling benefits in patients undergoing late percutaneous coronary intervention of the infarct-related artery: evidence from a meta-analysis of randomized controlled trials. Journal of the American College of Cardiology. 51 (9), 956-964 (2008).
  4. Santoro, G. M., Carrabba, N., Migliorini, A., Parodi, G., Valenti, R. Acute heart failure in patients with acute myocardial infarction treated with primary percutaneous coronary intervention. European Journal of Heart Failure. 10 (8), 780-785 (2008).
  5. Dhruva, S. S., et al. Association of use of an intravascular microaxial left ventricular assist device vs intra-aortic balloon pump with in-hospital mortality and major bleeding among patients with acute myocardial infarction complicated by cardiogenic shock. JAMA. 323 (8), 734-745 (2020).
  6. Wang, Y., et al. Risk factors associated with major cardiovascular events 1 year after acute myocardial infarction. JAMA Network Open. 1 (4), e181079(2018).
  7. Jou, M. J., et al. Melatonin protects against common deletion of mitochondrial DNA-augmented mitochondrial oxidative stress and apoptosis. Journal of Pineal Research. 43 (4), 389-403 (2007).
  8. La Piana, G., Fransvea, E., Marzulli, D., Lofrumento, N. E. Mitochondrial membrane potential supported by exogenous cytochrome c oxidation mimics the early stages of apoptosis. Biochemical and Biophysical Research Communications. 246 (2), 556-561 (1998).
  9. De Filippo, O., et al. Impact of secondary prevention medical therapies on outcomes of patients suffering from Myocardial Infarction with NonObstructive Coronary Artery disease (MINOCA): A meta-analysis. International Journal of Cardiology. 368, 1-9 (2022).
  10. Davidson, S. M., et al. Multitarget strategies to reduce myocardial ischemia/reperfusion injury: JACC review topic of the week. Journal of the American College of Cardiology. 73 (1), 89-99 (2019).
  11. Caricati-Neto, A., Errante, P. R., Menezes-Rodrigues, F. S. Recent advances in pharmacological and non-pharmacological strategies of cardioprotection. International Journal of Molecular Sciences. 20 (16), 4002(2019).
  12. Chen, G. Y., et al. Network pharmacology analysis and experimental validation to investigate the mechanism of total flavonoids of rhizoma drynariae in treating rheumatoid arthritis. Drug Design, Development, and Therapy. 16, 1743-1766 (2022).
  13. Wei, Z., et al. Traditional Chinese medicine has great potential as candidate drugs for lung cancer: A review. Journal of Ethnopharmacology. 300, 115748(2023).
  14. Zhi, W., Liu, Y., Wang, X., Zhang, H. Recent advances of traditional Chinese medicine for the prevention and treatment of atherosclerosis. Journal of Ethnopharmacology. 301, 115749(2023).
  15. Liu, M., et al. Hypertensive heart disease and myocardial fibrosis: How traditional Chinese medicine can help addressing unmet therapeutical needs. Pharmacological Research. 185, 106515(2022).
  16. Zhang, X. X., et al. Traditional Chinese medicine intervenes ventricular remodeling following acute myocardial infarction: evidence from 40 random controlled trials with 3,659 subjects. Frontiers in Pharmacology. 12, 707394(2021).
  17. Hao, P., et al. Traditional Chinese medicine for cardiovascular disease: evidence and potential mechanisms. Journal of the American College of Cardiology. 69 (24), 2952-2966 (2017).
  18. Delgado-Montero, A., et al. Blood stasis imaging predicts cerebral microembolism during acute myocardial infarction. Journal of the American Society of Echocardiography. 33 (3), 389-398 (2020).
  19. Lu, C. Y., Lu, P. C., Chen, P. C. Utilization trends in traditional Chinese medicine for acute myocardial infarction. Journal of Ethnopharmacology. 241, 112010(2019).
  20. Gao, Z. Y., Xu, H., Shi, D. Z., Wen, C., Liu, B. Y. Analysis on outcome of 5284 patients with coronary artery disease: the role of integrative medicine. Journal of Ethnopharmacology. 141 (2), 578-583 (2012).
  21. Huang, Z., et al. Crocetin ester improves myocardial ischemia via Rho/ROCK/NF-kappaB pathway. International Immunopharmacology. 38, 186-193 (2016).
  22. Green, M. R., Sambrook, J. Estimation of cell number by hemocytometry counting. Cold Spring Harbor Protocols. 2019 (11), (2019).
  23. Zeng, Q., et al. Assessing the potential value and mechanism of Kaji-Ichigoside F1 on arsenite-induced skin cell senescence. Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2022, 9574473(2022).
  24. Chazotte, B. Labeling mitochondria with JC-1. Cold Spring Harbor Protocols. 2011 (9), (2011).
  25. Kyrylkova, K., Kyryachenko, S., Leid, M., Kioussi, C. Detection of apoptosis by TUNEL assay. Methods in Molecular Biology. 887, 41-47 (2012).
  26. Yuan, Y., et al. Palmitate impairs the autophagic flux to induce p62-dependent apoptosis through the upregulation of CYLD in NRCMs. Toxicology. 465, 153032(2022).
  27. Kurien, B. T., Scofield, R. H. Western blotting. Methods. 38 (4), 283-293 (2006).
  28. Chen, G. Y., et al. Total flavonoids of rhizoma drynariae restore the MMP/TIMP balance in models of osteoarthritis by inhibiting the activation of the NF-κB and PI3K/AKT pathways. Evidence-Based Complementary and Alternative. 2021, 6634837(2021).
  29. Amin, A., Hamza, A. A., Bajbouj, K., Ashraf, S. S., Daoud, S. Saffron: a potential candidate for a novel anticancer drug against hepatocellular carcinoma. Hepatology. 54 (3), 857-867 (2011).
  30. Kamalipour, M., Akhondzadeh, S. Cardiovascular effects of saffron: an evidence-based review. The Journal of Tehran Heart Center. 6 (2), 59-61 (2011).
  31. Mani, V., Lee, S. K., Yeo, Y., Hahn, B. S. A metabolic perspective and opportunities in pharmacologically important safflower. Metabolites. 10 (6), 253(2020).
  32. Broadhead, G. K., Chang, A., Grigg, J., McCluskey, P. Efficacy and safety of saffron supplementation: current clinical findings. Critical Reviews in Food Science and Nutrition. 56 (16), 2767-2776 (2016).
  33. Gao, H., et al. Insight into the protective effect of salidroside against H2O2-induced injury in H9C2 cells. Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2021, 1060271(2021).
  34. Chen, G. Y., et al. Prediction of rhizoma drynariae targets in the treatment of osteoarthritis based on network pharmacology and experimental verification. Evidence-Based Complementary and Alternative. 2021, 5233462(2021).
  35. Reers, M., et al. Mitochondrial membrane potential monitored by JC-1 dye. Methods in Enzymology. 260, 406-417 (1995).
  36. Radovits, T., et al. Poly(ADP-ribose) polymerase inhibition improves endothelial dysfunction induced by reactive oxidant hydrogen peroxide in vitro. European Journal of Pharmacology. 564 (1-3), 158-166 (2007).
  37. Song, M., et al. Interdependence of parkin-mediated mitophagy and mitochondrial fission in adult mouse hearts. Circulation Research. 117 (4), 346-351 (2015).
  38. Gan, Z. Y., et al. Activation mechanism of PINK1. Nature. 602 (7896), 328-335 (2022).
  39. Nguyen, T. N., Padman, B. S., Lazarou, M. Deciphering the molecular signals of PINK1/Parkin mitophagy. Trends in Cell Biology. 26 (10), 733-744 (2016).
  40. Yamada, T., Dawson, T. M., Yanagawa, T., Iijima, M., Sesaki, H. SQSTM1/p62 promotes mitochondrial ubiquitination independently of PINK1 and PRKN/parkin in mitophagy. Autophagy. 15 (11), 2012-2018 (2019).
  41. Klionsky, D. J., et al. Guidelines for the use and interpretation of assays for monitoring autophagy (4th edition). Autophagy. 17 (1), 1(2021).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

العلاج بالكروسيتينتنظيم الميتوفاجيجهد الغشاء الميتوكوندريأنواع الأكسجين التفاعليةالتدفق البلعومي الذاتيلطخة ويسترنالمجهر البؤري
حماية خلايا عضلة القلب H9c2 من الإجهاد التأكسدي بواسطة الكروسيتين عبر PINK1 / Parkin Pathway بوساطة الميتوفاجي
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.