يتم توفير خط أنابيب تجريبي لوصف النمط الحركي للفئران التي تمشي بحرية باستخدام صندوق أدوات MouseWalker (MW) ، بدءا من تسجيلات الفيديو الأولية والتتبع إلى التحليل الكمي اللاحق. يتم استخدام نموذج إصابة كدمة الحبل الشوكي في الفئران لإثبات فائدة نظام MW.
Method Article
يتم توفير خط أنابيب تجريبي لوصف النمط الحركي للفئران التي تمشي بحرية باستخدام صندوق أدوات MouseWalker (MW) ، بدءا من تسجيلات الفيديو الأولية والتتبع إلى التحليل الكمي اللاحق. يتم استخدام نموذج إصابة كدمة الحبل الشوكي في الفئران لإثبات فائدة نظام MW.
يعتمد تنفيذ البرامج الحركية المعقدة والمنسقة للغاية ، مثل المشي والجري ، على التنشيط الإيقاعي للدوائر الشوكية وفوق الشوكية. بعد إصابة الحبل الشوكي الصدري ، يكون الاتصال بالدوائر الأولية ضعيفا. وهذا بدوره يؤدي إلى فقدان التنسيق ، مع إمكانية استرداد محدودة. وبالتالي ، لتقييم درجة الشفاء بشكل أفضل بعد تناول الأدوية أو العلاجات ، هناك حاجة إلى أدوات جديدة أكثر تفصيلا ودقة لتحديد المشي وتنسيق الأطراف والجوانب الدقيقة الأخرى للسلوك الحركي في النماذج الحيوانية لإصابة الحبل الشوكي. تم تطوير العديد من المقايسات على مر السنين لتقييم سلوك المشي الحر في القوارض كميا. ومع ذلك ، فإنها عادة ما تفتقر إلى القياسات المباشرة المتعلقة باستراتيجيات المشي التدريجي وأنماط البصمة والتنسيق. لمعالجة أوجه القصور هذه ، يتم توفير نسخة محدثة من MouseWalker ، والتي تجمع بين ممر الانعكاس الداخلي الكلي المحبط (fTIR) مع برنامج التتبع والقياس الكمي. تم تكييف هذا النظام مفتوح المصدر لاستخراج العديد من المخرجات الرسومية والمعلمات الحركية ، ويمكن أن تكون مجموعة من أدوات ما بعد القياس الكمي لتحليل بيانات المخرجات المقدمة. توضح هذه المخطوطة أيضا كيف تصف هذه الطريقة ، المتحالفة مع الاختبارات السلوكية المحددة بالفعل ، كميا، العجز الحركي بعد إصابة الحبل الشوكي.
التنسيق الفعال لأربعة أطراف ليس فريدا للحيوانات الرباعية. يظل التنسيق بين الأطراف الأمامية والخلفية في البشر مهما لإنجاز العديد من المهام ، مثل السباحة وتغيرات السرعة أثناء المشي1. يتم الحفاظ على مختلف الأطرافالحركية 2 والبرنامج الحركي1،3،4 ، وكذلك دوائر التغذية المرتدة الحس العميق5 ، بين البشر والثدييات الأخرى ويجب أخذها في الاعتبار عند تحليل الخيارات العلاجية للاضطرابات الحركية ، مثل إصابة الحبل الشوكي (SCI)6،7،8.
من أجل المشي ، يجب توصيل العديد من وصلات العمود الفقري من الأطراف الأمامية والخلفية بشكل صحيح وتنشيطها بشكل إيقاعي ، الأمر الذي يتطلب مدخلات من الدماغ وردود فعل من النظام الحسي الجسدي2،9،10. تبلغ هذه الوصلات ذروتها في مولدات النمط المركزي (CPGs) ، والتي تقع على مستوى عنق الرحم وأسفل الظهر للأطراف الأمامية والخلفية ، على التوالي1،9،10. في كثير من الأحيان ، بعد اصابات النخاع الشوكي ، يحد انقطاع الاتصال العصبي وتشكيل ندبة دبقية مثبطة12 من استعادة الوظيفة الحركية ، مع اختلاف النتائج من الشلل التام إلى الوظيفة المقيدة لمجموعة من الأطراف اعتمادا على شدة الإصابة. تعد أدوات القياس الكمي للوظيفة الحركية بدقة بعد اصابات النخاع الشوكي ضرورية لمراقبة التعافي وتقييم آثار العلاجات أو التدخلات السريرية الأخرى6.
المقايسة المترية القياسية لنماذج كدمة الماوس ل SCI هي مقياس باسو للماوس (BMS) 13,14 ، وهي درجة غير بارامترية تأخذ في الاعتبار استقرار الجذع ، وموضع الذيل ، والخطوة الأخمصية ، والتنسيق بين الأطراف الأمامية والخلفية في ساحة المجال المفتوح. على الرغم من أن BMS موثوق للغاية في معظم الحالات ، إلا أنه يتطلب اثنين على الأقل من المقيمين ذوي الخبرة لمراقبة جميع زوايا حركة الحيوانات من أجل حساب التباين الطبيعي وتقليل التحيز.
كما تم تطوير فحوصات أخرى لتقييم الأداء الحركي بعد اصابات النخاع الشوكي كميا. وتشمل هذه اختبار الروتارود ، الذي يقيس الوقت المستغرق في أسطوانة دوارة15 ؛ السلم الأفقي ، الذي يقيس عدد السور المفقود والاستيلاء على السلم الإيجابي16,17 ؛ واختبار المشي بالشعاع ، الذي يقيس الوقت الذي يستغرقه الحيوان وعدد حالات الفشل التي يرتكبها عند عبور شعاع ضيق18. على الرغم من أنها تعكس مزيجا من العجز الحركي ، إلا أن أيا من هذه الاختبارات لا تنتج معلومات حركية مباشرة حول التنسيق بين الأطراف الأمامية والخلفية.
لتحليل سلوك المشي بشكل محدد وأكثر شمولا ، تم تطوير فحوصات أخرى لإعادة بناء دورات الخطوة واستراتيجيات المشي. أحد الأمثلة على ذلك هو اختبار البصمة ، حيث ترسم الكفوف المحبرة لحيوان نمطا على ورقة بيضاء19. على الرغم من بساطة تنفيذه ، إلا أن استخراج المعلمات الحركية مثل طول الخطوة أمر مرهق وغير دقيق. وعلاوة على ذلك، فإن الافتقار إلى بارامترات دينامية، مثل مدة دورة الخطوة أو التنسيق المحدد بتوقيت الساق، يحد من تطبيقاتها؛ في الواقع ، لا يمكن الحصول على هذه المعلمات الديناميكية إلا من خلال تحليل مقاطع الفيديو إطارا تلو الآخر للقوارض التي تمشي عبر سطح شفاف. بالنسبة لدراسات اصابات النخاع الشوكي ، قام الباحثون بتحليل سلوك المشي من وجهة نظر جانبية باستخدام جهاز المشي ، بما في ذلك إعادة بناء دورة الخطوة وقياس الاختلافات الزاوية لكل مفصل ساق4،20،21. على الرغم من أن هذا النهج يمكن أن يكون مفيدا للغاية6 ، إلا أنه يظل يركز على مجموعة محددة من الأطراف ويفتقر إلى ميزات المشي الإضافية ، مثل التنسيق.
لسد هذه الفجوات، طور هامرز وزملاؤه اختبارا كميا يعتمد على مستشعر اللمس البصري باستخدام الانعكاس الداخلي الكلي المحبط (fTIR)22. في هذه الطريقة ، ينتشر الضوء عبر الزجاج عبر الانعكاس الداخلي ، وينتشر عند الضغط على المخلب ، وأخيرا ، يتم التقاطه بواسطة كاميرا عالية السرعة. في الآونة الأخيرة ، تم توفير نسخة مفتوحة المصدر من هذه الطريقة ، تسمى MouseWalker ، ويجمع هذا النهج بين ممر fTIR وحزمة برامج التتبع والقياسالكمي 23. باستخدام هذه الطريقة ، يمكن للمستخدم استخراج مجموعة كبيرة من المعلمات الكمية ، بما في ذلك أنماط الخطوة والمكانية والمشي ، وتحديد موضع البصمة ، والتنسيق بين الأطراف الأمامية والخلفية ، بالإضافة إلى المخرجات المرئية ، مثل أنماط البصمة (محاكاة مقايسة المخلبالمحبر 6) أو مراحل الوقوف بالنسبة لمحور الجسم. الأهم من ذلك ، نظرا لطبيعتها مفتوحة المصدر ، يمكن استخراج معلمات جديدة عن طريق تحديث حزمة البرنامج النصي MATLAB.
هنا ، يتم تحديث التجميع المنشور مسبقا لنظام MouseWalker23 . يتم توفير وصف لكيفية إعداده ، مع جميع الخطوات المطلوبة لتحقيق أفضل جودة للفيديو وظروف التتبع واكتساب المعلمات. كما تتم مشاركة أدوات إضافية لما بعد القياس الكمي لتعزيز تحليل مجموعة بيانات مخرجات MouseWalker (MW). أخيرا ، يتم توضيح فائدة هذه الأداة من خلال الحصول على قيم قابلة للقياس الكمي للأداء الحركي العام ، وتحديدا دورات الخطوة والتنسيق بين الأطراف الأمامية والخلفية ، في سياق إصابة الحبل الشوكي (SCI).
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
تمت الموافقة على جميع إجراءات المناولة والرعاية الجراحية وما بعد الجراحة من قبل اللجنة الداخلية الجزيئية لمعهد الطب (ORBEA) ولجنة أخلاقيات الحيوان البرتغالية (DGAV) وفقا لإرشادات الجماعة الأوروبية (التوجيه 2010/63 / EU) والقانون البرتغالي بشأن رعاية الحيوان (DL 113/2013) بموجب الترخيص 0421/000/000/2022. تم استخدام إناث الفئران C57Bl / 6J التي تتراوح أعمارها بين 9 أسابيع في الدراسة الحالية. تم بذل كل الجهود لتقليل عدد الحيوانات وتقليل معاناة الحيوانات المستخدمة في الدراسة. البرنامج النصي MATLAB والإصدار المستقل من برنامج MW مفتوح المصدر ومتوفر في GitHub
مستودع (https://github.com/NeurogeneLocomotion/MouseWalker). بينما تم تطوير برنامج MW في MATLAB R2012b ، فقد تم تكييفه للتشغيل في MATLAB R2022b. يوضح الشكل 1 سير عمل تحليل MW.
1. إعداد جهاز MouseWalker (MW)
2. اقتناء الفيديو
3. إعداد مقاطع الفيديو لبرنامج تتبع MW
4. التتبع
5. سير عمل تحليل البيانات الحركية
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
يصف نظام BMS القياسي العجز الحركي الإجمالي بعد SCI14. نظرا لطبيعتها الذاتية ، يتم إجراء فحوصات كمية أخرى بشكل عام جنبا إلى جنب مع BMS لإنتاج تقييم أكثر تفصيلا ودقة للحركة. ومع ذلك ، تفشل هذه الاختبارات في إظهار معلومات محددة حول دورات الخطوة ، وأنماط الخطوة ، والتنسيق بين الأطراف الأمامية والخلفية ، وهو أمر مهم للغاية في فهم كيفية حفاظ الدوائر الشوكية على وظيفتها وتكيفها مع اصابات النخاع الشوكي غير المكتملة. يوضح هذا القسم كيف يمكن أن يساعد صندوق أدوات MW في مراقبة استعادة الوظيفة الحركية بعد اصاب...
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
هنا ، يتم توضيح إمكانات طريقة MouseWalker من خلال تحليل السلوك الحركي بعد اصابات النخاع الشوكي. يوفر رؤى جديدة حول تعديلات محددة في أنماط الخطوات والبصمة والمشي التي قد تفوتها الاختبارات القياسية الأخرى. بالإضافة إلى توفير إصدار محدث من حزمة MW ، يتم أيضا وصف أدوات تحليل البيانات باستخدام نصوص Python النصية المرفقة (انظر الخطوة 5).
نظرا لأن MW يولد مجموعة بيانات كبيرة ومجموعة من المعلمات الحركية التي تعكس عملية حركية عالية الأبعاد ، فقد تم استخدام PCA. في الواقع ، تم استخدام PCA على نطاق واسع ...
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
ويعلن صاحبا البلاغ أنه ليس لهما مصالح مالية متنافسة.
يشكر المؤلفان لورا تاكر وناتاسا لونكاريفيتش على تعليقاتهما على المخطوطة والدعم الذي قدمه مرفق القوارض التابع لمعهد الطب الجزيئي جواو لوبو أنتونيس. يريد المؤلفون الاعتراف بالدعم المالي المقدم من Prémios Santa Casa Neurociências - جائزة Melo e Castro لأبحاث إصابات الحبل الشوكي (MC-36/2020) إلى L.S. و CSM تم دعم هذا العمل من قبل Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT) (PTDC / BIA-COM / 0151/2020) ، iNOVA4Health (UIDB / 04462/2020 و UIDP / 04462/2020) ، و LS4FUTURE (LA / P / 0087/2020) إلى C.S.M. L.S. تم دعمه بعقد باحث رئيسي فردي من CEEC (2021.02253.CEECIND). تم دعم AFI من خلال زمالة الدكتوراه من FCT (2020.08168.BD). تم دعم A.M.M. من خلال زمالة الدكتوراه من FCT (PD / BD / 128445 / 2017). تم دعم IM من خلال زمالة ما بعد الدكتوراه من FCT (SFRH / BPD / 118051 / 2016). تم دعم D.N.S. من خلال زمالة الدكتوراه من FCT (SFRH / BD / 138636 / 2018).
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
|---|---|---|---|
| <قوي>45 & ordm; مرآة بثق ألومنيوم < / قوي > | |||
| 2 (2 × 2 سم) ، ارتفاع 16 سم ، 1 على كل جانب | ميسومي | ||
| 2 بثق ألومنيوم (2 × 2 سم) ، 23 سم ، @ 45 درجة ؛ 1 على كل جانب | ميسومي | ||
| 1 بثق ألومنيوم (2 × 2 سم) ، 83 سم | بطول ميسومي | ||
| 87 × 23 سم مرآة | مورد زجاج عام ؛ | ||
| حشو الورق المقوى الأسود | القرطاسية العامة | استخدمنا 2 ، أحدهما بحجم 69 × 6 سم والآخر بحجم 69 × 3 سم للحد من الانعكاس على المرآة | |
| < قوية > إضاءة خلفية < / قوية > | |||
| 109 × 23 سم زجاج شبكي (0.9525 سم) مورد | الأجهزة | ||
| 2 بثق جانبي من الألومنيوم (4 × 4 سم) ، بطول 20 سم ، 1 على كل جانب | Misumi | ||
| شريط LED متعدد الألوان | الأجهزة | ||
| ورق أبيض غير شفاف لتغطية زجاج شبكي | مورد | ||
| العامة < قوي > fTIR قاعدة دعم ومشاركات < / قوي > | |||
| 2 بثق الألومنيوم (4 × 4 سم) ، ارتفاع 100 سم | ميسومي | ||
| 60 × 30 سم لوح تجارب متري | إدموند للبصريات & nbsp ؛ | # 54-641 | |
| M6 مسامير 12 مم | Edmund Optics ؛ | ||
| M6 عرافة المكسرات والواهر | إدموند للبصريات | ||
| fTIR Walkway زجاج شبكي < / قوي> | |||
| 109 × 8.5 سم (سمك 1.2 سم) | مورد | زجاج شبكي 109 × 8.5 سم (سمك 1.2 سم) بطول | |
| 109 سم من الألومنيوم ذو القناة الأساسية على شكل حرف U بارتفاع 1.6 سم × عمق 1.9 سم طيات سميكة (لتثبيت زجاج شبكي) | مورد | ||
| 2 بثق جانبي من الألومنيوم (4 × 4 سم) بطول 20 سم ، 1 على كل جانب | Misumi | ||
| حشو الورق المقوى الأسود | القرطاسية العامة | استخدمنا 2 حشو على كل جانب لتغطية حدود زجاج شبكي ، وتجنب الحواف الساطعة | |
| M6 مسامير 12 مم | Edmund Optics ؛ | ||
| <قوية>كاميرا عالية السرعة (على حامل ثلاثي القوائم) < / قوي> Blackfly | |||
| S USB3 | FLIR | #BFS-U3-32S4M-C | هذه توصية الشرط هو تسجيل ما لا يقل عن 100 إطار في الثانية |
| Infinite Horizon Impactor | |||
| Infinite Horizon Impactor | الدقة للأنظمة والأجهزة ، ذ م م. | # 0400 | |
| Lens< / strong> | |||
| Nikon AF Zoom-Nikkor 24-85mm | نيكون | # 1929 | يوصى بهذه العدسة ، ولكن يمكن استخدام عدسة أخرى. تأكد من احتوائه على فتحة عدسة كبيرة (أي قيم F-stop أصغر) ، لالتقاط إشارات fTIR |
| Software | |||
| MATLAB R2022b | MathWorks | ||
| Python 3.9.13 | بايثون للبرمجيات | ||
| أناكوندا نافيجيتور 2.1.4 | أناكوندا ، إنك. | ||
| سبايدر 5.1.5 | المساهمون | ||
| SpyderWalkway wall < / قوي> | |||
| 2 أكريليك كبير مستقيم مع 100 × 15 سم | أي متجر | ||
| 2 جوانب شبه منحرفة أكريلية بطول 6-10 × 15 سم | ارتفاع أي متجر صغير bricolage | ||
| GitHub Materials< / strong > | |||
| Folder name < / strong > | URL < / strong> | ||
| Boxplots | https://github.com/NeurogeneLocomotion/MouseWalker/tree/main/Boxplots | Script لإنشاء Boxplots | |
| Docs | https://github.com/NeurogeneLocomotion/MouseWalker/tree/main/Docs | مستندات إضافية | |
| خريطة التمثيل اللوني | https://github.com/NeurogeneLocomotion/MouseWalker/tree/main/Heatmaps | النصي لإنشاء خريطة التمثيل اللوني | |
| برنامج نصي Matlat | https://github.com/NeurogeneLocomotion/MouseWalker/tree/main/Matlab%20Script | برنامج نصي MouseWalker matlab | |
| PCA | https://github.com/NeurogeneLocomotion/MouseWalker/tree/main/PCA%20plots | Script لتنفيذ مخططات البيانات الأولية لتحليل المكونات الرئيسية | |
| https://github.com/NeurogeneLocomotion/MouseWalker/tree/main/Rawdata%20Plots | برنامج نصي لإنشاء مخططات البيانات | ||
| التحليل المتبقي | https://github.com/NeurogeneLocomotion/MouseWalker/tree/main/Residual_Analysis | التعليمات البرمجية لحساب المخلفات من البيانات الأولية |
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request Permission