يلخص البروتوكول أفضل الممارسات لتقليل الحمل البيولوجي الميكروبي في بيئة غرف الأبحاث ويتضمن استراتيجيات مثل المراقبة البيئية ومراقبة العمليات واختبار عقم المنتج. إنه مناسب لمرافق التصنيع والاختبار المطلوبة لتلبية معايير ممارسة الأنسجة الجيدة الحالية ومعايير ممارسات التصنيع الجيدة الحالية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
استراتيجيات التحكم في الميكروبات ومراقبتها لبيئات غرف الأبحاث والعلاجات الخلوية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يعد البرنامج الشامل الذي تم التحقق من صحته جيدا والذي يتضمن تدابير قوية للملابس والتنظيف والمراقبة البيئية ومراقبة الموظفين أمرا بالغ الأهمية لتقليل الحمل البيولوجي الميكروبي في أجنحة تصنيع العلاج الخلوي ومختبرات الاختبار المقابلة لضمان أن المرافق تعمل في حالة تحكم. يعد ضمان سلامة المنتج من خلال تدابير مراقبة الجودة ، مثل اختبار العقم ، مطلبا تنظيميا لكل من الحد الأدنى من التلاعب (القسم 361) وأكثر من الحد الأدنى من التلاعب (القسم 351) الخلايا البشرية والأنسجة والمنتجات الخلوية والأنسجة (HCT / Ps). في هذا الفيديو ، نقدم دليلا متدرجا لكيفية تطوير ودمج أفضل الممارسات المعقمة للعمل في بيئة غرف الأبحاث ، بما في ذلك ارتداء الملابس والتنظيف وتدريج المواد والمراقبة البيئية ومراقبة العمليات واختبار عقم المنتج باستخدام التلقيح المباشر ، المقدم من دستور الأدوية الأمريكي (USP<71>) وطريقة اختبار العقم البديلة للمعاهد الوطنية للصحة (NIH). يهدف هذا البروتوكول إلى أن يكون بمثابة دليل مرجعي للمنشآت المتوقع أن تلبي ممارسات الأنسجة الجيدة الحالية (cGTP) وممارسات التصنيع الجيدة الحالية (cGMP).
المقدمة
يعد تنفيذ برنامج قوي لمراقبة الميكروبات من خلال المراقبة البيئية (EM) ومراقبة العمليات واختبار عقم المنتج مطلبا تنظيميا لممارسات الأنسجة الجيدة الحالية (cGTP) وممارسات التصنيع الجيدة الحالية (cGMP) في مختبرات العلاج الخلوي1. بالإضافة إلى ذلك ، تتوقع إدارة الغذاء والدواء الأمريكية (FDA) أن المختبر الذي يقوم باختبار مراقبة الجودة (QC) للمنتج يجب أن يستخدم أيضا مرافق وضوابط مماثلة لتلك المستخدمة في عمليات التعبئةالمعقمة 2.
يحتوي هذا البروتوكول على أربعة أقسام رئيسية: 1) الممارسات المعقمة ، بما في ذلك ارتداء ملابس الأفراد والتنظيف وتنظيم المواد. 2) EM ، بما في ذلك ثقافات الهواء والسطح القابلة للحياة ومراقبة هواء الجسيمات غير القابلة للحياة ؛ 3) مراقبة العملية ، بما في ذلك تسوية الألواح وأخذ عينات من أطراف الأصابع ؛ و 4) اختبار عقم المنتج عبر دستور الأدوية الموجز للولايات المتحدة (USP) <71>الطريقة 3 أو طريقة اختبار العقم البديلة للمعاهد الوطنية للصحة4. عند استخدامها معا ، يمكن أن تكون هذه التدابير طريقة فعالة لضمان بقاء المرفق في حالة سيطرة.
التقنيات الموصوفة هنا ليست جديدة. ومع ذلك ، تفتقر المعايير الحالية من المنظمين والمنظمات المهنية إلى التفاصيل ، مما أدى إلى غياب المراقبة الميكروبية أو تنفيذ الممارسات غير الموحدة ، لا سيما في المراكز الأكاديمية حيث يظهر التصنيع في الموقع واختبار عقم المنتج بمعدل سريع 1,5,6 . يمكن استخدام هذا البروتوكول كدليل لإنشاء برنامج مراقبة ومراقبة ميكروبية يلبي المتطلبات التنظيمية عند استخدامه جنبا إلى جنب مع التحقق من صحة المستخدم النهائي وتقييم المخاطر.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. الممارسات المعقمة
- ملابس الموظفين لمساحة غرف الأبحاث
ملاحظة: يعتمد هذا الإجراء على ارتداء الملابس الأولية في مكان غير مصنف ، يليه الدخول إلى منطقة المنظمة الدولية للتوحيد القياسي (ISO) 8 ثم منطقة ISO7. هذا الإجراء مناسب للمختبرات التي تحاول تحويل المساحة الحالية إلى وظيفة غرف الأبحاث. من الناحية المثالية ، ستحدث جميع الملابس الأولية في مساحة مصنفة ISO8 (وليس في مساحة غير مصنفة).- تأمين الشعر المتساقط. اغسل يديك ، وتحولها إلى مقشرات (يفضل استخدام قمم فرك طويلة الأكمام وسراويل فرك كاملة الطول). اجمع واستبدل أحذية غرف الأبحاث بأغطية الأحذية.
- عقم اليدين باستخدام معقم اليدين الذي يحتوي على الكحول في البداية ثم مرة أخرى بين كل خطوة من الخطوات التالية: ارتداء قفازات غير معقمة ثم غطاء لحية (لأي كمية من شعر الوجه المرئي) ، إن أمكن. ارتد منتفاخا غير معقم ، وقم بتغطية الساعدين بأكمام غير معقمة إذا لم يتم استخدام قمم فرك طويلة الأكمام.
- قم بإزالة أغطية الأحذية ، وادخل على الحصيرة اللزجة أمام باب غرفة الانتظار ISO8 مع كل قدم بعد إزالة غطاء الحذاء. تأكد من ملامسة القدم بالكامل للحصيرة اللزجة قبل الدخول. تخلص من أغطية الأحذية ، وقم بإزالة التلوث من القفازات ومقبض الباب بنسبة 70٪ من كحول الأيزوبروبيل المعقم (sIPA). أدخل غرفة الانتظار ISO8.
- اجمع غطاء رأس معقم وقناع وجه معقم ومعاطف معقمة وأغطية أحذية معقمة ونظارات أمان. قم بتطهير القفازات بنسبة 70٪ sIPA. ارتد نظارات السلامة ، وقم بوضع المواد على سطح نظيف ، وفقا للخطوة 1.5.
- ارتد زوجا جديدا من أغطية الأحذية غير المعقمة فوق أحذية غرف الأبحاث المخصصة ، وادخل على الحصيرة اللزجة أمام غرفة الانتظار الثانوية. تأكد من أن كل قدم بالكامل تتلامس مع السجادة اللزجة. قم بتطهير القفازات بنسبة 70٪ sIPA. اجمع لوازم ارتداء الملابس المرحلية ، وادخل غرفة الانتظار الثانوية ISO7 ، وتبقى على الجانب المتسخ من خط الترسيم.
- ارتد غطاء الرأس المعقم والمعطف المعقم ، ولمس الجزء الداخلي فقط من مادة اللباس وتأكد من أن عنق الغطاء مدسوس داخل المعطف لإنشاء ختم كامل. ارتد أغطية الأحذية المعقمة الثانوية. قم بإزالة التلوث من القفازات باستخدام 70٪ sIPA بين كل خطوة ارتداء.
- تحقق من ارتداء الرداء بشكل مناسب ، وقم بإزالة التلوث من القفازات بنسبة 70٪ sIPA ، وأدخل مساحة ISO7.
ملاحظة: افحص مواد ارتداء الملابس بشكل دوري للتأكد من سلامتها. إذا تم اختراقها ، اخرج من غرفة الأبحاث على الفور وأعد ارتداء الملابس.
- ارتداء خزانة السلامة البيولوجية (BSC)
- ارتد الزي وفقا للخطوة 1.1 أعلاه مع هذه الممارسات الإضافية.
- جمع قفازات معقمة وأكمام معقمة. قم بتنظيف BSC وفقا للخطوة 1.4 ، وقم بترتيب المواد وفقا للخطوة 1.5. قم بتطهير القفازات بنسبة 70٪ sIPA.
- ارتدي الأكمام المعقمة فوق المعطف ، باستخدام حلقات الإبهام إذا كانت موجودة. ارتد قفازات معقمة فوق القفازات الموجودة ، مع التأكد من أن سوار القفاز يمتد فوق الأكمام المعقمة. قم بإزالة التلوث من القفازات باستخدام 70٪ sIPA بين كل خطوة. أدخل BSC.
ملاحظة: افحص مواد ارتداء الملابس بشكل دوري للتأكد من سلامتها. إذا تم اختراقها ، اخرج من غرفة الأبحاث على الفور وأعد ارتداء الملابس.
- خلع مواد اللباس
- اخرج من BSC ، وقم بإزالة الزوج العلوي من القفازات والأكمام المعقمة بعناية. قم بإزالة التلوث من القفازات الداخلية بنسبة 70٪ sIPA.
- أدخل غرفة الانتظار الثانوية ثم الأولية ، في انتظار إغلاق الباب بالكامل بين كل خطوة. قم بإزالة المواد بالترتيب التالي: أغطية التمهيد المعقمة الخارجية ، المعطف ، غطاء المحرك ، وقناع الوجه.
- اخرج من غرفة الانتظار الأساسية ، وقم بإزالة العباءة غير المعقمة.
ملاحظة: ترتيب الإزالة في المساحة غير المصنفة غير مهم ؛ ومع ذلك ، يجب أن تظل أغطية الأحذية الداخلية غير المعقمة على أحذية غرف الأبحاث للتخزين في الأماكن غير المصنفة. - عقم اليدين باستخدام معقم اليدين الذي يحتوي على الكحول ، والعودة إلى ملابس الشارع.
- تنظيف أسطح غرف الأبحاث و BSC
- قم بتجميع ممسحة تنظيف محمولة باليد ، أو احصل على منديل نظيف منخفض الوبر. في حالة استخدام منديل منخفض الوبر ، قم بطي المنديل إلى أرباع ، وقم بالتدوير بين كل سطح. قم بتشبع رأس الممسحة أو المسح منخفض الوبر بمطهر معتمد.
- عند العمل من الخلف إلى الأمام (أو من أعلى إلى أسفل) ، قم بتنظيف BSC باستخدام مناديل متداخلة بالترتيب التالي: شواية ناشر HEPA (الجزء العلوي من BSC) ، والجدار الخلفي ل BSC ، وكلا الجدارين الجانبيين ل BSC ، والوشاح ، وسطح العمل. أخيرا ، امسح وشاح BSC باستخدام 70٪ sIPA لإزالة أي مطهر متبقي. راجع الشكل 1 للحصول على نمط تنظيف BSC نموذجي.
- تنظيم المواد والمعدات في بيئات مصنفة
- تطهير (أي مرحلة) جميع المواد التي تتطلب النقل من منطقة غير مصنفة أو أقل تصنيفا إلى منطقة أعلى تصنيفا (على سبيل المثال ، من مساحة ISO8 إلى ISO7) لتقليل نقل الميكروبات. لا يتطلب نقل المواد بين مناطق من نفس مستوى تصنيف ISO التدريج.
ملاحظة: إذا تم تعقيم المواد نهائيا وكانت في أكياس متعددة ، فقم بإزالة الكيس / الحقيبة الخارجية ، وانقل المادة إلى المساحة المصنفة ؛ لا يلزم مسح الكيس / الحقيبة الداخلية. - احصل على منديل منخفض الوبر ، وقم بطي المنديل إلى أرباع لتدويره إلى جانب نظيف عندما يصبح المنديل متسخا. تشبع المنديل بنسبة 70٪ sIPA أو مطهر معتمد.
- امسح الجزء الخارجي من المادة / المعدات باستخدام مناديل متداخلة. تأكد من مسح جميع مناطق العنصر ، بما في ذلك الأجزاء الداخلية من أختام العبوة القابلة للسحب والزوايا / المسافات البادئة على المعدات وغيرها من المستلزمات غير المنتظمة. بالنسبة للمعدات الموجودة على عجلات ، تأكد من مسح العجلة بالكامل أثناء عملية التدريج (قد تحتاج المعدات إلى إمالة بلطف للسماح بتدوير العجلات).
- تطهير (أي مرحلة) جميع المواد التي تتطلب النقل من منطقة غير مصنفة أو أقل تصنيفا إلى منطقة أعلى تصنيفا (على سبيل المثال ، من مساحة ISO8 إلى ISO7) لتقليل نقل الميكروبات. لا يتطلب نقل المواد بين مناطق من نفس مستوى تصنيف ISO التدريج.
الشكل 1: مثال على نمط تنظيف BSC. عند العمل من الخلف إلى الأمام (أو من أعلى إلى أسفل) ، قم بتنظيف BSC باستخدام مناديل متداخلة بالترتيب التالي: شواية ناشر HEPA (الجزء العلوي من BSC) ، والجدار الخلفي ل BSC ، وكلا الجدارين الجانبيين ل BSC ، والوشاح ، وسطح العمل. أخيرا ، امسح وشاح BSC باستخدام 70٪ sIPA لإزالة أي مطهر متبقي. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
2. المراقبة البيئية (EM)
- أخذ عينات سطحية قابلة للحياة
- قم بتنظيم المواد اللازمة لجلسة أخذ العينات وفقا للخطوة 1.5 ، وارتدي ملابسها في المساحة المصنفة وفقا للقسم 1.
ملاحظة: يجب إجراء أخذ عينات السطح قبل أخذ عينات الهواء في أي مكان محدد. إذا كنت تستخدم ألواحا متعددة لأخذ عينات من منطقة ما ، فلا تأخذ عينة من نفس الموقع بالضبط. استخدم ألواح التلامس لأخذ عينات من الأسطح المستوية فقط لضمان التلامس الكامل ولتجنب التلف المحتمل للأجار. - جمع وتسمية أجار الصويا tryptic واحد مع لوحة الليسيثيناز و توين (TSALT) وأجار سكر العنب Sabouraud مع لوحة الليسيثيناز و توين (SABLT) لكل موقع أخذ العينات. أمسك الجزء السفلي من اللوحة بيد واحدة ، وقم بإزالة الغطاء بشكل معقم ، مع الحرص على عدم لمس سطح أجار المرتفع.
- المس الآجار المرتفع بالسطح الذي يتم أخذ عينات منه ، وتأكد من أن السطح بأكمله على اتصال ، وقم بالضغط بقوة على اللوحة. اترك اللوحة ملامسة للسطح لمدة 5 ثوان على الأقل.
- حرج: لا تحرك اللوحة بشكل جانبي فوق السطح الذي يتم أخذ عينات منه ، لأن هذا يمكن أن ينشر النمو المحتمل على مساحة السطح ، مما يجعل حل المستعمرات الفردية أمرا صعبا. لا تمارس قوة مفرطة على لوحة التلامس أثناء أخذ العينات ، حيث قد يتشقق سطح أجار.
- استبدل الغطاء بشكل معقم ، مع الحرص على عدم لمس سطح أجار المرتفع. أغلق الغطاء في مكانه إذا كانت لوحة التلامس بها نظام قفل. نظف منطقة أخذ العينات بنسبة 70٪ sIPA لإزالة أي وسط متبقي من السطح. ضع الأطباق في أكياس فضفاضة ، واحتضن الثقافات كما هو موضح في الجدول 1. يوضح الشكل 2 صورة تمثيلية توضح نمو ثلاث وحدات تشكيل مستعمرة (CFUs) مع مورفولوجيتين متميزتين للمستعمرة على لوحة أخذ عينات سطح TSALT. يوضح الشكل 3 تلوث صفيحة TSALT مع نمو على حافة اللوحة ، ويعزى ذلك إلى تقنية التعقيم السيئة أثناء جمع العينات.
- قم بتنظيم المواد اللازمة لجلسة أخذ العينات وفقا للخطوة 1.5 ، وارتدي ملابسها في المساحة المصنفة وفقا للقسم 1.
- أخذ عينات الهواء قابلة للحياة
- قم بتنظيم المواد اللازمة لجلسة أخذ العينات وفقا للخطوة 1.5 ، وارتدي ملابسها في المساحة المصنفة وفقا للقسم 1.
- جمع وتسمية لوحة واحدة من أجار الصويا (TSA) ولوحة واحدة من أجار سكر العنب Sabouraud (SAB) لكل موقع أخذ العينات. قم بإعداد جهاز أخذ عينات الهواء عن طريق إزالة رأس أخذ العينات بشكل معقم عن طريق الإمساك بالحافة الخارجية فقط لتجنب تلويث الرأس.
- أمسك رأس أخذ العينات بيد واحدة ، ضع الوسط بشكل معقم في حامل اللوحة على جهاز أخذ العينات. إذا كان هناك شق أطول من الآخرين ، فأدخل الوسط مقابل الشق الأطول أولا ، ثم ادفع اللوحة لأسفل إلى الشوكات المتبقية لتأمين اللوحة.
- قم بإزالة غطاء اللوحة بشكل معقم ، وضعه على سطح نظيف بعيدا عن الطريق حتى يتم الانتهاء من أخذ العينات. استبدل رأس أخذ العينات وثبته بشكل معقم ، مع الإمساك بالحافة الخارجية فقط لتجنب تلويث الرأس. كرر الخطوات 2-2-2-2-2-4 للوسط المتبقي في حالة استخدام جهاز أخذ عينات هواء متعدد الرؤوس.
- ضع جهاز أخذ عينات الهواء في موقع أخذ العينات بحيث تكون رؤوس أخذ العينات متجهة في الاتجاه السائد لحركة تدفق الهواء. تأكد من أن العادم من جهاز أخذ عينات الهواء غير القابل للحياة (في حالة أخذ العينات في وقت واحد) لا يتداخل مع جهاز أخذ العينات القابل للتطبيق. تأكد من ضبط جهاز أخذ عينات الهواء على الإعدادات التي تم التحقق من صحتها، وابدأ دورة أخذ العينات.
- عند اكتمال دورة أخذ العينات ، قم بإزالة رأس أخذ العينات بشكل معقم من جهاز أخذ العينات عن طريق إمساك الحافة الخارجية فقط لتجنب تلويث الرأس. امسك رأس أخذ العينات بيد واحدة ، واستبدل غطاء لوحة أجار بشكل معقم. قم بإزالة اللوحة من حامل اللوحة. ضع الأطباق في أكياس فضفاضة ، واحتضن الثقافات كما هو موضح في الجدول 1.
- قم بتطهير رأس أخذ العينات والمنطقة المحيطة بحامل اللوحة بنسبة 70٪ sIPA. قم بتأمين رأس أخذ العينات بشكل معقم ، مع إمساك الحافة الخارجية فقط. كرر الخطوتين 2-2-6 و2-2-7 للوسط المتبقي في حالة استخدام جهاز أخذ عينات هواء متعدد الرؤوس.
ملاحظة: يوضح الشكل 4 ثقافة أخذ عينات الهواء النشطة TSA مع النمو الناجم عن رأس أخذ العينات الملوث. على العكس من ذلك ، يمثل الشكل 5 ثقافة أخذ عينات الهواء النشطة TSA بدون نمو. يمكن رؤية المسافات البادئة لتأثير الهواء من رأس أخذ العينات على الصورة.
- أخذ العينات غير القابلة للتطبيق
- قم بإجراء فحص صفري على عداد جسيمات الليزر قبل أنشطة أخذ العينات لكل يوم من أيام الاستخدام. قم بتوصيل الرأس متساوي الحركة بمنفذ أخذ العينات لعداد الجسيمات إما مباشرة أو مثبتا بطول الأنبوب حسب الحاجة لموقع أخذ العينات.
- إذا تم تطبيق الأنبوب ، فاستخدم طولا قصيرا ، لأن الأنبوب الذي يبلغ طوله > مترا واحدا يمكن أن يسبب مشاكل في تعداد الجسيمات التي تبلغ ≥1 ميكرومتر وقد يؤدي أيضا إلى انحناءات غير ضرورية في الأنبوب. تأكد من ضبط عداد الجسيمات على الإعدادات التي تم التحقق من صحتها. يوصى بضبط تأخير لمدة 30 ثانية تقريبا للسماح بالخروج من منطقة أخذ العينات لتجنب انقطاع تدفق الهواء أثناء أخذ العينات.
- ضع الرأس متساوي الحركة لعداد جسيمات الليزر في موقع أخذ العينات بحيث يكون الرأس متساوي الحركة متجها إلى الاتجاه السائد لحركة تدفق الهواء. تأكد من أن العادم من جهاز أخذ عينات الهواء القابل للحياة (في حالة أخذ العينات في وقت واحد) لا يتداخل مع جهاز أخذ العينات غير القابل للتطبيق. بالنسبة للمناطق التي لا يكون فيها تدفق الهواء أحادي الاتجاه أو يكون نمط تدفق الهواء غير معروف ، تأكد من أن الرأس متساوي الحركة متجها رأسيا لأعلى.
ملاحظة: إذا تم رذاذ مطهر دوراني أو 70٪ sIPA بالقرب من جهاز أخذ عينات الهواء ، فانتظر 5 دقائق على الأقل قبل بدء دورة أخذ العينات. - ابدأ دورة أخذ العينات ، واخرج ببطء من منطقة أخذ العينات لتجنب تعطيل تدفق الهواء.
حرج: لا تقم برش السوائل بالقرب من جهاز أخذ عينات الهواء أثناء دورة أخذ العينات ، لأن ذلك سيؤدي إلى ارتفاع عدد السوائل غير القابلة للحياة. - عند اكتمال أخذ العينات ، استرجع عداد جسيمات الليزر. سجل متوسط عدد الجسيمات ل 0.5 ميكرومتر. قد تقوم بعض المرافق أيضا بتتبع واتجاه 5.0 ميكرومتر.
- كرر الخطوات 2.3.3-2.3.6 لموقع أخذ العينات التالي. في حالة التنقل بين الغرف أو BSCs ، امسح الجزء الخارجي من جهاز أخذ عينات الجسيمات غير القابل للحياة بنسبة 70٪ sIPA أو مطهر معتمد. تجنب الحصول على مطهر داخل الرأس متساوي الحركة ، لأن هذا قد يؤدي إلى عدد غير دقيق للجسيمات.
| باب | وسائط | ظروف الثقافة | مراقبة الثقافة | النتائج | ||||||
| الرصد البيئي | TSA (هواء قابل للحياة) | 30 °C -35 °C ، الهواء ، لمدة 3 أيام على الأقل | نهاية الحضانة | يجب أن تضع مجموعة ضمان الجودة في كل مرفق حدود التنبيه والعمل لكل نوع من أنواع العينات وموقعها. ويمكن الاسترشاد بحدود العمل للعينات القابلة للتطبيق استنادا إلى تصنيف المنظمة الدولية للتوحيد القياسي باستخدام PIC/S 009-16 (المرفقات) 18 وISO-14644-1 7. عادة ما يتم تعيين حدود العمل لعينات الهواء غير القابلة للحياة على نسبة مئوية من حد ISO (على سبيل المثال ، 99٪). عادة ما يتم تعيين حدود التنبيه للعينات القابلة للتطبيق على نسبة مئوية من حد الإجراء أو حد ISO (على سبيل المثال ، 95٪). راجع PDA TR-13 و USP<1116> لمزيد من التفاصيل حول إنشاء مستويات التنبيه والعمل والتحقق من صحة ظروف الثقافة المختارة 8,9. | ||||||
| SAB (هواء قابل للحياة) | 20 °C -25 °C ، الهواء ، لمدة 7 أيام على الأقل | |||||||||
| TSALT (سطح قابل للحياة) | 30 °C -35 °C ، الهواء ، لمدة 3 أيام على الأقل | يتم عرض الصور التمثيلية للوحات EM في الشكل 2 والشكل 3 والشكل 4 والشكل 5. | ||||||||
| SABLT (سطح قابل للحياة) | 20 °C -25 °C ، الهواء ، لمدة 7 أيام على الأقل | |||||||||
| مراقبة العملية | TSA (لوحة الترسيب) | 30 °C -35 °C ، الهواء ، لمدة 3 أيام على الأقل | للعلم فقط. يوفر معلومات مفيدة في حالة إجراء تحقيق OOS استجابة لاختبار عقم المنتج الفاشل. | |||||||
| SAB (لوحة الترسيب) | 20 °C -25 °C ، الهواء ، لمدة 7 أيام على الأقل | انظر الشكل 6 للحصول على مثال على لوحة ترسب موجبة. | ||||||||
| أخذ عينات من أطراف الأصابع القفاز | توست | 30 °C -35 °C ، الهواء ، لمدة 48 ساعة على الأقل أيام تليها 20 °C -25 °C لمدة 5 أيام على الأقل 19. | معايير القبول ل GFS هي <1 CFU / لوحة (أي لا نمو) وفقا ل PIC / S 009-16 (المرفقات) 18. يمكن تعديل معايير القبول وفقا لتقدير ضمان الجودة للمنشأة. | |||||||
| اختبار عقم المنتج | مكتب تقييس الاتصالات (USP<71>) | 20 °C -25 °C ، الهواء ، لمدة 14 يوما على الأقل | بشكل دوري طوال فترة الحضانة (الأيام 3 و 5 و 7 و 14) | لا نمو. | ||||||
| FTM (USP<71>) | 30 °C -35 °C ، الهواء ، لمدة 14 يوما على الأقل | |||||||||
| iFA + (طريقة المعاهد الوطنية للصحة) | 30 °C -35 °C ، الهواء ، لمدة 14 يوما على الأقل | المراقبة تلقائيا بواسطة جهاز BacT / ALERT Dual-T. يوصى بشدة بإجراء فحص بصري لكل زجاجة في نهاية الحضانة لكرات العفن. | انظر الشكل 8 للحصول على مثال لكرات العفن المرئية التي فشلت في اكتشافها تلقائيا بواسطة BacT / ALERT. | |||||||
| iFN + (طريقة المعاهد الوطنية للصحة) | ||||||||||
| SAB (طريقة المعاهد الوطنية للصحة) | 20 درجة مئوية -25 درجة مئوية لمدة 14 يوما على الأقل | بشكل دوري طوال فترة الحضانة (الأيام 3 و 5 و 7 و 14) | ||||||||
الجدول 1: ملخص لظروف الاستزراع الموصى بها والنتائج المتوقعة. شروط الثقافة الموضحة هنا هي توصيات تستند إلى برنامج تم التحقق من صحته يستخدم في المعاهد الوطنية للصحة. يطلب من كل مستخدم نهائي التحقق من صحة برنامج اختبار الأحياء الدقيقة الخاص به. قد تختلف استراتيجيات المكافحة والاختبار الميكروبية بين المعاهد اعتمادا على المتغيرات بما في ذلك تصميم المنشأة ونباتات المنشأة وتصنيف مخاطر المنتج.
الشكل 2: النمو على لوحة TSALT. لوحة أخذ العينات السطحية TSALT تظهر ثلاثة CFUs من اثنين من مورفولوجيا مستعمرة متميزة. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3: تلوث صفيحة TSALT أثناء التجميع. تظهر ثقافة سطح TSALT مستعمرة واحدة على حافة الصفيحة ، مما يدل على سوء التعامل المعقم أثناء عملية أخذ العينات. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 4: تم الحصول على مزرعة باستخدام رأس أخذ عينات هواء ملوث. مثال على ثقافة أخذ عينات الهواء النشطة TSA التي تظهر >100 وحدة تشكيل مستعمرة (CFU) من الأشكال المختلطة. يشير نمط النمو إلى تلوث رأس أخذ العينات. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 5: لا يوجد نمو على صفيحة هواء نشطة قابلة للحياة TSA. لوحة هوائية نشطة قابلة للحياة TSA توضح عدم وجود نمو بعد الحضانة. يمكن رؤية المسافات البادئة من رأس أخذ عينات الهواء النشط في الصورة. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
3. مراقبة العملية
- ألواح الترسيب (مراقبة الهواء السلبية)
- ضع لوحات TSA و SAB المصنفة بالقرب من منطقة العمل ولكن في منطقة لا تتداخل مع الاختبار. قم بتوثيق وقت بدء أخذ العينات ، وافتح كلا اللوحين بشكل معقم ، وضع الأغطية على سطح نظيف في BSC بعيدا عن منطقة العمل.
- قد تكون ألواح الترسيب مفتوحة لمدة أقصاها 4 ساعات لمنع الآجار من الجفاف. أغلق أغطية الألواح في نهاية المعالجة. ضع الأطباق في أكياس فضفاضة ، واحتضن الثقافات كما هو موضح في الجدول 1. يوضح الشكل 6 ملوثا واحدا للمستعمرة على صفيحة ترسيب الهواء TSA.
- أخذ عينات من أطراف الأصابع القفاز (GFS)
- احصل على لوحين من TSALT المصنفين. قم بإزالة غطاء إحدى اللوحات بشكل معقم ، وضعه على سطح عمل نظيف بعيدا عن منطقة أخذ العينات.
- لف برفق وسادة كل إصبع وإبهام يد واحدة على سطح اللوحة (الشكل 7). قم بأخذ عينة من أكبر مساحة سطح لكل إصبع / إبهام بدلا من الطرف. استخدم قوة كافية لعمل انخفاضات طفيفة على الآجار دون تكسير سطح الآجار.
- ضع الغطاء مرة أخرى على اللوحة ، وكرر الخطوة 3.2.2 للناحية الأخرى. عقم اليدين بنسبة 70٪ sIPA عند الانتهاء من أخذ العينات. ضع الأطباق في أكياس فضفاضة ، واحتضن الثقافات كما هو موضح في الجدول 1.
الشكل 6: النمو على لوحة ترسب الهواء TSA. لوحة ترسب هواء TSA توضح مستعمرة واحدة من الملوثات المزروعة أثناء مراقبة عملية الهواء السلبية في BSC. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 7: أخذ عينات من أطراف أصابع القفاز. يتم عرض الطريقة الصحيحة للحصول على عينات من أطراف الأصابع باستخدام أكبر مساحة سطح (أو وسادة) لكل إصبع / إبهام على اليسار. تظهر العملية غير الصحيحة حيث يتم أخذ عينات من طرف الإصبع فقط على اليمين. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
4. اختبار العقم عن طريق التلقيح المباشر للمنتج
- التلقيح المباشر بعد USP<71>
- احصل على زجاجة واحدة تحمل علامة مرق الصويا (TSB) وزجاجة واحدة ذات علامة ثايوغليكولات سائلة متوسطة (FTM) لكل مادة اختبار مقدمة. بالنسبة لجلسة الاختبار ، احصل على TSALT واحد و SABLT واحد لأخذ عينات سطحية قابلة للحياة ، ولوحة TSA واحدة ولوحة SAB واحدة لألواح الترسيب ، ولوحين TSALT ل GFS.
- ثوب للعمل داخل BSC وفقا للخطوة 1.2. قم بتنظيف BSC وفقا للخطوة 1.4. قم بمرحلة المواد في BSC وفقا للخطوة 1.5. قم بإجراء أخذ عينات التلامس لمنطقة العمل الحرجة وفقا للخطوة 2.1 ، مع مسح السطح بنسبة 70٪ sIPA بعد أخذ العينات. قم بإعداد ألواح الترسيب TSA و SAB بالقرب من منطقة العمل وفقا للخطوة 3.1.
- احصل على مقالة الاختبار وزجاجات TSB وFTM المرتبطة بها. إذا كانت زجاجات TSB و FTM تحتوي على حاجز ، فقم بإزالة الأغطية الواقية من كل زجاجة ، وامسح الحاجز بمسح كحولي معقم. إذا كانت زجاجات TSB وFTM تحتوي على سطح لولبي ، فقم بفك الغطاء من الزجاجات (ولكن لا تقم بإزالة الغطاء).
- دوامة المادة الاختبار لضمان تعليق متجانسة. قم بتلقيح الزجاجات بالحجم المصدق عليه لمادة الاختبار (حتى 10 مل / زجاجة) باستخدام حقنة معقمة وإبرة تحت الجلد (لأغطية الحاجز) أو ماصة (للأغطية اللولبية).
- بعد التلقيح ، امسح الحاجز بمسح كحول معقم ، وأدخل وحدة تنفيس معقمة للسماح بتبادل الهواء أثناء الحضانة. بالنسبة للزجاجات ذات السقف اللولبي ، أغلق الزجاجة ولكن اترك الغطاء 1/4 إلى 1/2 دورة فضفاضة للسماح بتبادل الهواء أثناء الحضانة. كرر الخطوات 4.1.3 إلى 4.1.5 لكل مقالة اختبار يتم اختبارها خلال تلك الجلسة.
- أغلق لوحات الترسيب TSA و SAB بشكل معقم ، وقم بتوثيق وقت انتهاء أخذ العينات. قم بإجراء "جي إف إس" وفقا للخطوة 3.2، وامسح القفازات بنسبة 70٪ من sIPA بعد أخذ العينات. ضع الأطباق في أكياس فضفاضة ، واحتضن الثقافات كما هو موضح في الجدول 1.
- انقل جميع مواد الاختبار خارج BSC ، وقم بتنظيف BSC وفقا للخطوة 1.4.
- التلقيح المباشر باتباع طريقة اختبار العقم البديلة للمعاهد الوطنية للصحة
- احصل على واحد يسمى i FA + ، وواحد يسمى iFN + ، ولوحة SAB واحدة لكل مقالة اختبار. بالنسبة لجلسة الاختبار ، احصل على TSALT واحد و SABLT واحد لأخذ عينات سطحية قابلة للحياة ، ولوحة TSA واحدة ولوحة SAB واحدة لألواح الترسيب ، ولوحين TSALT ل GFS.
- ثوب للعمل داخل BSC وفقا للخطوة 1.2. قم بتنظيف BSC وفقا للخطوة 1.4. قم بمرحلة المواد في BSC وفقا للخطوة 1.5. قم بإجراء أخذ عينات التلامس لمنطقة العمل الحرجة وفقا للخطوة 2.1 ، مع مسح السطح بنسبة 70٪ sIPA بعد أخذ العينات. قم بإعداد ألواح الترسيب TSA و SAB بالقرب من منطقة العمل وفقا للخطوة 3.1.
- احصل على مقالة الاختبار ولوحة i FA + و iFN + و SAB المرتبطة بها. قم بإزالة الأغطية الواقية من زجاجات i FA + و iFN + ، وامسح الحاجز بمنديل كحولي معقم.
- دوامة المادة الاختبار لضمان تعليق متجانسة. قم بتلقيح الزجاجات بالحجم الذي تم التحقق من صحته لمادة الاختبار (حتى 10 مل / زجاجة) باستخدام حقنة معقمة وإبرة تحت الجلد. امسح الحاجز بمسح كحول معقم بعد التلقيح. احتضان الزجاجات على أداة BacT / ALERT Dual-T كما هو موضح في الجدول 1.
- باستخدام الماصة ، قم بتلقيح لوحة SAB بالكمية التي تم التحقق من صحتها من مادة الاختبار (لا تزيد عن 500 ميكرولتر / لوحة) ، وخط للعزل باستخدام حلقة معقمة. اتركه لمدة 10 دقائق للتأكد من عدم تشغيل العينة على غطاء اللوحة عند قلبها للحضانة. ضع كل صفيحة SAB ملقحة بمادة الاختبار في كيس بلاستيكي ، واربطها بشكل غير محكم ، واحتضانها كما هو موضح في الجدول 1.
- أغلق لوحات الترسيب TSA و SAB بشكل معقم ، وقم بتوثيق وقت انتهاء أخذ العينات. قم بإجراء "جي إف إس" كما هو موضح في الخطوة 3.2، وامسح القفازات بنسبة 70٪ من sIPA بعد أخذ العينات. ضع الأطباق في أكياس فضفاضة ، واحتضن الثقافات كما هو موضح في الجدول 1. يعد الفحص البصري لزجاجات BacT / ALERT في نهاية فترة الحضانة أمرا ضروريا للكشف عن كرات العفن التي ربما لم تكتشفها الأداة (الشكل 8).
- انقل جميع مواد الاختبار خارج BSC ، وقم بتنظيف BSC وفقا للخطوة 1.4.
الشكل 8: نمو العفن الذي فشل في اكتشافه بواسطة BacT / ALERT. مثال على كرات العفن ، المرئية بالعين المجردة ، والتي فشلت في اكتشافها تلقائيا بواسطة نظام BacT / ALERT. بناء على هذه النتائج ، نوصي بالفحص البصري النهائي لجميع زجاجات BacT / ALERT وإضافة لوحة SAB للثقافة الفطرية باستخدام طريقة اختبار العقم البديلة للمعاهد الوطنية للصحة. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
ويرد وصف للنتائج المتوقعة في الجدول 1. يجب مراجعة بيانات EM ومتابعتها بالتحقيق المناسب والاستجابة للإجراءات أو التنبيه أو رحلات حد ISO. في حالة حدوث رحلة للجسيمات غير القابلة للحياة ، يجب المضي قدما وفقا ل ISO 14644-Annex A ، sec A.5.57. إذا كان من الممكن أن تعزى الرحلة إلى حدث غير طبيعي يمكن تحديده على الفور ، فيجب توثيق نتائج أخذ العينات الأصلية ، ويجب إضافة ملاحظة لتجاهل النتائج الأصلية ، ويجب تقديم وصف تفصيلي للحدث غير الطبيعي. يمكن أخذ عينة أخرى في الموقع المعني. إذا كان لا ي...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هناك العديد من المجالات الحرجة في هذا البروتوكول ، بما في ذلك الحفاظ على تقنية التعقيم وتدفق الهواء أحادي الاتجاه داخل غرف الأبحاث و BSCs. تشمل أفضل الممارسات التحرك ببطء وبشكل متعمد لتقليل الاضطرابات. يجب إجراء عمليات التلاعب المعقمة من جانب المنتج ، وليس من الأعلى. يوصى بمعالجة النظام المغلق واستخدام المواد الخام المعقمة نهائيا. يجب تجنب التحدث في المناطق الحرجة والاتكاء على الجدران أو المعدات. وبالمثل ، يجب تجنب اللمس غير الضروري للعناصر غير المعقمة والتقاط العناصر المتساقطة حتى تكتمل المعالجة المعقمة. يجب ترتيب الموا...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن أصحاب البلاغ عدم وجود تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
تم دعم هذا العمل من قبل برنامج البحوث الداخلية للمركز السريري للمعاهد الوطنية للصحة. المحتوى هو مسؤولية المؤلفين وحدهم ولا يمثل الآراء الرسمية للمعاهد الوطنية للصحة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 20-25 درجة ؛ تفضيل مختبر حاضنة | |||
| C 30-35 درجة ؛ C الحاضنة | تفضيل المختبر | ||
| معقم | المختبر | ||
| BacT / ALERT أداة Dual-T | BioMerieux غطاء اللحية | ||
| المختبر | |||
| وسط Fluidthioglycollate (FTM) | Hardy Diagnostics | U84 | USP |
| ممسحة تنظيف محمولة | Contec | 2665LF | |
| إبرة | تفضيل المختبر | ||
| iFA + BacT / ALERT زجاجة | Biomerieux | 412990 | |
| iFN + BacT / ALERT زجاجة | Biomerieux | 412991 | |
| رأس | تفضيل المختبر | ||
| عداد | الجسيمات بالليزرTSI Incorporated | 9500-01 | |
| LpH III | Steris | 1S16CX | |
| تفضيل المختبر | |||
| منتفخ | تفضيل المختبر | ||
| قفازات | تفضيلات المختبر | ||
| أغطية | تفضيلات المختبر | ||
| أغطية | الأكمام غير المعقمة | تفضيل المختبر | |
| تفضيل مختبر Parafilm | |||
| Peridox RTU | Contec | CR85335IR | |
| الأكياس | تفضيل المختبر | ||
| Sabouraud Dextrose Agar مع الليسيثيناز والتوين (SABLT) | هاردي التشخيص ؛ | P595 | USP ، مشع |
| Sabouraurd Dextrose Agar (SAB) Hardy | Diagnostics ؛ | W565 | USP ، |
| نظارات السلامة | المفضل في المختبر | ||
| (أعلى وأسفل) | تفضيل المختبر | ||
| Spor-Klenx RTU | Steris | 6525M2 | |
| معقم 70٪ كحول الأيزوبروبيل (IPA) | Decon CiDehol | 8316 | |
| مسح | تفضيل المختبر | ||
| حذاء معقم يغطي | كيمبرلي كلارك | Cat# يختلف بناء على الحجم | |
| المعاطف المعقمة | كيمبرلي كلارك | Cat# يختلف حسب الحجم | |
| قناع | تفضيلات المختبر | ||
| قفازات | تفضيلات المختبر | ||
| معقم | كيمبرلي كلارك | Cat# يختلف حسب الحجم | |
| مناديل معقمة منخفضة الوبر | Texwipe | TX3210 | |
| وسادات تنظيف ممسحة معقمة | Contec | MEQT0002SZ | |
| أغطية الأكمام | المعقمة كيمبرلي كلارك | 36077 | |
| قضيب نشر معقم | فيشر 14665231 | ||
| حقنة | تفضيل المختبر | ||
| حصائر | المختبر تفضيل المختبر | ||
| Tryptic Soy Agar ( TSA) | Hardy Diagnostics | W570R | USP ، |
| أجار الصويا الترهيب المشع مع الليسيثيناز والمراهقين (TSALT) | هاردي التشخيص ؛ | P520R | USP ، |
| مرق الصويا الترهيبي المشع (TSB) هاردي | التشخيص ؛ | U46 | USP |
| الأنابيب | مختبر التفضيل | ||
| Vesphene III | Steris | 1S15CX | |
| قابلة للتطبيق لأخذ عينات الهواء | هاردي التشخيص ؛ | BAS22K | |
| Vortex | Lab |
المراجع
- Cundell, T., Atkins, J. W., Lau, A. F. Sterility testing for hematopoietic stem cells. Journal of Clinical Microbiology. , 10.1128/jcm.01654-22 (2023).
- United States Food and Drug Administration. Guidance for Industry. Sterile Drug Products Produced by Aseptic Processing - Current Good Manufacturing Practice. United States Food and Drug Administration. , (2004).
- United States Pharmacopeia - National Formulary. USP<71> Sterility Tests in USP43-NF38. United States Pharmacopeia - National Formulary. , (2022).
- England, M. R., Stock, F., Gebo, J. E. T., Frank, K. M., Lau, A. F. Comprehensive evaluation of compendial USP<71>, BacT/Alert Dual-T, and Bactec FX for detection of product sterility testing contaminants. Journal of Clinical Microbiology. 57 (2), 01548(2019).
- Gebo, J. E. T., East, A. D., Lau, A. F. A side-by-side comparison of clinical versus current good manufacturing practices (cGMP) microbiology laboratory requirements for sterility testing of cellular and gene therapy products. Clinical Microbiology Newsletter. 43 (21), 181-191 (2021).
- Gebo, J. E. T., Lau, A. F. Sterility testing for cellular therapies: What is the role of the clinical microbiology laboratory. Journal of Clinical Microbiology. 58 (7), 01492(2020).
- International Organization for Standardization. ISO 14644-1:2015 Cleanrooms and associated controlled environments - Part 1: Classification of air cleanliness by particle concentration. International Organization for Standardization. , (2015).
- Parenteral Drug Association. PDA Technical Report No. 13 Revised 2022 (TR 13) Fundamentals of an Environmental Monitoring Program. Parenteral Drug Association, Inc. , (2022).
- United States Pharmacopeia - National Formulary. USP<1116> Microbiological Evaluation of Cleanrooms and Other Controlled Environments in USP43-NF38 2S. United States Pharmacopeia - National Formulary. , (2020).
- Guinet, R., et al. Multicenter study on incubation conditions for environmental monitoring and aseptic process simulation. PDA journal of pharmaceutical science and technology. 71 (1), 43-49 (2017).
- Gordon, O., Berchtold, M., Staerk, A., Roesti, D. Comparison of different incubation conditions for microbiological environmental monitoring. PDA Journal of Pharmaceutical Science and Technology. 68 (5), 394-406 (2014).
- Anders, H. J., et al. Multisite qualification of an automated incubator and colony counter for environmental and bioburden applications in pharmaceutical microbiology. PDA Journal of Pharmaceutical Science and Technology. , (2022).
- United States Pharmacopeia - National Formulary. USP<1072> Disinfectants and Antiseptics. United States Pharmacopeia - National Formulary. , (2020).
- United States Pharmacopeia - National Formulary. USP<1071> Rapid Microbial Tests for Release of Sterile Short-Life Products: A Risk-Based Approach in USP43-NF38 2S. United States Pharmacopeia - National Formulary. , (2020).
- United States Pharmacopeia - National Formulary. PUSP<1223> Validation of Alternative Microbiological Methods in USP43-NF38 2S. United States Pharmacopeia - National Formulary. , (2020).
- Parenteral Drug Association. PDA Technical Report No. 33, Revised 2013 (TR 33) Evaluation, Validation and Implementation of Alternative and Rapid Microbiological Methods. Parenteral Drug Association, Inc. , (2013).
- Putnam, N. E., Lau, A. F. Comprehensive study identifies a sensitive, low-risk, closed-system model for detection of fungal contaminants in cell and gene therapy products. Journal of Clinical Microbiology. 59 (11), 0135721(2021).
- Pharmaceutical Inspection Convention & Pharmaceutical Inspection Co-operation. Guide to Good Manufacturing Practice for Medicinal Products Annexes (PE 009-16 (Annexes)). Pharmaceutical Inspection Convention & Pharmaceutical Inspection Co-operation Scheme. , (2022).
- United States Pharmacopeia - National Formulary. USP<825> Radiopharmaceuticals - Preparation, Compounding, Dispensing, and Repackaging in USP43-NF38 2S. United States Pharmacopeia - National Formulary. , (2020).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
