يمكن أن تستفيد المقايسات المختبرية من القيمة النذير من التصوير المقطعي متعدد الوسائط القائم على التصوير المقطعي للتماسك البصري الطولي (OCT) للتنكس البقعي المرتبط بالعمر (AMD). يتم تصوير عيون المتبرعين البشريين مع AMD وبدونه باستخدام OCT ، واللون ، وتنظير العين بالليزر لمسح انعكاس الأشعة تحت الحمراء القريبة ، والتألق الذاتي عند طولين موجيين للإثارة قبل تقسيم الأنسجة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
إكس فيفو التصوير متعدد الوسائط القائم على OCT لعيون المتبرعين البشريين للبحث في التنكس البقعي المرتبط بالعمر
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يمكن أن يضيف تسلسل التقدم للتنكس البقعي المرتبط بالعمر (AMD) المستفاد من التصوير المقطعي متعدد الوسائط (MMI) القائم على التماسك البصري (OCT) قيمة تنبؤية إلى النتائج المختبرية. في هذا العمل ، تم تطبيق OCT و MMI خارج الجسم الحي على عيون المتبرعين البشريين قبل تقسيم أنسجة الشبكية. تم استرداد العيون من متبرعين بيض غير مصابين بالسكري تتراوح أعمارهم بين ≥80 عاما ، مع وقت الموت حتى الحفظ (DtoP) ≤6 ساعة. تم انتشال الكرات الأرضية في الموقع ، وتم تسجيلها باستخدام تريفين 18 مم لتسهيل إزالة القرنية ، وغمرها في 4٪ بارافورمالدهيد مخزن. تم الحصول على صور قاع العين الملونة بعد إزالة الجزء الأمامي باستخدام نطاق تشريح وكاميرا SLR باستخدام إضاءة عبر و epi وفلاش عند ثلاثة تكبيرات. تم وضع الكرات الأرضية في مخزن مؤقت داخل غرفة مصممة خصيصا مع عدسة ديوبتر 60. تم تصويرها بالمجال الطيفي OCT (مكعب بقعة 30 درجة ، تباعد 30 ميكرومتر ، متوسط = 25) ، انعكاس قريب من الأشعة تحت الحمراء ، 488 نانومتر ذاتي التألق ، و 787 نانومتر تألق ذاتي. أظهرت عيون AMD تغيرا في ظهارة الشبكية الصبغية (RPE) ، مع رواسب drusen أو drusenoid تحت الشبكية (SDDs) ، مع أو بدون الأوعية الدموية الجديدة ، ودون دليل على وجود أسباب أخرى. بين يونيو 2016 وسبتمبر 2017 ، تم استرداد 94 عينا يمنى و 90 عينا يسرى (DtoP: 3.9 ± 1.0 ساعة). من بين 184 عينا ، كان 40.2٪ مصابين ب AMD ، بما في ذلك المتوسط المبكر (22.8٪) ، والضموري (7.6٪) ، والأوعية الدموية الحديثة (9.8٪) AMD ، و 39.7٪ لديهم بقع غير ملحوظة. تم تحديد Drusen و SDDs والبؤر شديدة الانعكاس والضمور والندوب الوعائية الليفية باستخدام OCT. تضمنت القطع الأثرية عتامة الأنسجة ، والانفصال (العصوي ، والشبكية ، و RPE ، والمشيمية) ، والتغيير الكيسي النقري ، و RPE المتموج ، والأضرار الميكانيكية. لتوجيه المقطع بالتبريد ، تم استخدام مجلدات OCT للعثور على معالم النقرة ورأس العصب البصري وأمراض محددة. تم تسجيل مجلدات ex vivo مع مجلدات في الجسم الحي عن طريق تحديد الوظيفة المرجعية لتتبع العين. تعتمد الرؤية خارج الجسم الحي لعلم الأمراض الذي يظهر في الجسم الحي على جودة الحفظ. في غضون 16 شهرا ، تم استرداد 75 عينا من المتبرعين ب DtoP السريع في جميع مراحل AMD وتنظيمها باستخدام طرق MMI السريرية.
المقدمة
خمسة عشر عاما من إدارة التنكس البقعي المرتبط بالعمر الوعائي الجديد (AMD) مع العلاج المضاد ل VEGF تحت إشراف التصوير المقطعي للتماسك البصري (OCT) قد قدمت رؤى جديدة حول تسلسل التقدم والبنية الدقيقة لهذا السبب السائد لفقدان البصر. الاعتراف الرئيسي هو أن AMD هو مرض ثلاثي الأبعاد يشمل شبكية العين الحسية العصبية ، وظهارة صبغة الشبكية (RPE) ، والمشيمية. نتيجة لتصوير OCT لمرضى التجربة وعيون زملائهم من مرضى العيادة المعالجين ، تم التعرف الآن على ميزات علم الأمراض التي تتجاوز تلك التي شوهدت من خلال التصوير الفوتوغرافي الملون لقاع العين ، وهو معيار سريري لعقود. وتشمل هذه الأوعية الدموية داخل الشبكية (النوع 3 الأوعية الدموية الحديثةالبقعية 1 ، الانتشار الوع....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وافق مجلس المراجعة المؤسسية في جامعة ألاباما في برمنغهام على الدراسات المختبرية ، التي التزمت بالممارسات المختبرية الجيدة ومستوى السلامة الأحيائية 2/2+. تتوافق جميع بنوك العيون الأمريكية مع قانون الهدايا التشريحية الموحد لعام 2006 وإدارة الغذاء والدواء الأمريكية. تتوافق معظم بنوك العيون الأمريكية ، بما في ذلك Advance Sight Network ، مع المعايير الطبية لجمعية بنك العيون الأمريكية.
يسرد جدول المواد اللوازم والمعدات. توفر المادة التكميلية 1 نظرة عامة على التشريح ، والتصوير الفوتوغرافي الملون لقاع العين ، و MMI القائم على OCT. توفر المادة التكميلية 2 تفاصيل MMI المستندة إلى OCT.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يوضح الجدول 1 أنه خلال الفترة 2016-2017 ، تم استرداد 184 عينا من 94 متبرعا أبيض غير مصاب بالسكري >80 عاما. كان متوسط وقت الموت إلى الحفظ 3.9 ساعة (النطاق: 2.0-6.4 ساعة). من بين 184 عينا تمت مراجعتها ، كان لدى 75 (40.2٪) بعض AMD. تم تحديد الفئات التالية: غير ملحوظ (39.7٪) ، مشكوك فيه (11.4٪) ، AMD المبكر المتوسط (22.8٪) ، ضامر (7.6٪) ، الأوعية الدموية الحديثة (9.8٪) ، أخرى (8.7٪) ، وغير معروف / غير مسجل / غير قابل للتصنيف (<1٪). يوضح الشكل 2 والشكل 3 والشكل
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
باستخدام نهج الفحص القائم على السكان خلال فترة 16 شهرا في حقبة ما قبل COVID ، كان من الممكن شراء 75 عينا من المتبرعين المصابين ب AMD. تم استردادها جميعا باستخدام DtoP قصير وتم تنظيمها باستخدام MMI المرتبط ب OCT. معيار العمر (>80 سنة) خارج النطاق العمري النموذجي لاستعادة الأنسجة المخصصة للقرنية القابلة للزرع. على الرغم من تقدم العمر ، أدت معاييرنا إلى عيون في جميع مراحل AMD. العديد من الأنماط الظاهرية RPE شائعة في جميع مراحل AMD ، وبعضها حصري ل AMD 3,46 الوعائي ال.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
تتلقى C.A.C. دعما بحثيا من شركة هايدلبرغ للهندسة وتقدم استشارات ل Apellis و Astellas و Boehringer Ingelheim و Character Bioscience و Osanni. يتلقى TA دعما بحثيا من Novartis ويقدم استشارات لشركة Roche و Novartis و Bayer و Nidek و Apellis. K.B.F. هو مستشار لشركة Genentech و Zeiss و Heidelberg Engineering و Allergan و Bayer و Novartis.
شكر وتقدير
نشكر شركة هايدلبرغ الهندسية على الأجهزة وتصميم حامل العين الأصلي ، وريتشارد إف سبايد دكتوراه في الطب لمقدمة التصوير متعدد الوسائط القائم على OCT ، وكريستوفر جيركين MD لتسهيل الوصول إلى أجهزة التصوير السريري ، وديفيد فيشر للشكل 1. تم دعم استعادة عيون المتبرعين البشريين للبحث من خلال منح المعاهد الوطنية للصحة (NIH) R01EY06019 (C.A.C.) ، P30 EY003039 (Pittler) ، R01EY015520 (Smith) ، R01EY027948 (C.A.C. ، T.A.) R01EY030192 (Li) و R01EY031209 (Stambolian) و U54EY032442 (Spraggins) و IZKF Würzburg (N-304 ، TA) ، ومؤسسة EyeSight في ألاباما ، والمؤسسة الدولية لأبحاث الشبكية (C.A.C.) ، ومبادرة أرنولد ومابل بيكمان لأبحاث البقعة الصفراء (C.A.C.....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| أكواب ، 250 مل | زجاجات فيشر | # 02-540 كيلو | |
| ، 1 لتر ، بيركس ؛ | فيشر | # 10-462-719 | للمواد الحافظة |
| موقد بنسن أو مصدر الحرارة | Eisco | # 17-12-818 | لإذابة الشمع |
| الكاميرا ، كمبيوتر | رقمي نيكون D7200 | D7200 | |
| وتخزين | Apple | iMac Pro ؛ 14 تيرابايت محرك أقراص صلبة خارجي | تخزين |
| الصور ، معزول | فيشر | # 02-591-45 | للثلج |
| الرطبحاويات ، 2 لكل متبرع ، 40 مل | فيشر | ساميكو بيو تيت ؛ 40 مل # 13-711-86 | لبوتقة المواد الحافظة |
| ، كوارتز 30 مل | فيشر | # 08-072D | عقد كرة أرضية للتصوير الفوتوغرافي |
| اسطوانة ، خريج ، 250 مل | فيشر | # 08-549G | |
| مستلزمات تنظيف مطهرة ؛ | https://www.cardinalhealth.com/en/product-solutions/medical/infection-control/antiseptics.html | ||
| حامل العين مع عدسة وقوس التثبيت | الاتصال J. Messinger | jeffreymessinger@uabmc.edu | تعديل مخصص للتصميم الأصلي لهندسة هايدلبرغ |
| أقنعة حماية الوجه | فيشر | # 19-910-667 | |
| ملقط ، هارمون فيكس | روبوز ؛ | # RS-8247 | |
| ملقط ، مايكرو أدسون | روبوز | # RS-5232 | |
| ملقط ، مناديل | Roboz | # RS-5172 | |
| طبق بتري زجاجي ، Kimax | Fisher | # 23064 | |
| قفازات Diamond Grip | Fisher # MF-300 | ||
| فساتين GenPro | Fisher | # 19-166-116 | |
| برنامج تحرير الصور | Adobe | Photoshop 2021 ، Creative Suite | |
| KimWipes | فيشر | # 06-666 | |
| مصابيح ، 3 معقوفة | Schott التصوير | # A20800 | |
| مجهر ، ستيريو | نيكون | SMZ 1000 | لتشريح |
| المجهر ، ستيريو | أوليمبوس ؛ | SZX9 | لون قاع العين التصوير |
| الفوتوغرافي بارافورمالدهايد ، 20٪ ؛ | EMS | # 15713-S | للمواد الحافظة ؛ مخفف لمقياس |
| الأس الهيدروجيني | للتخزين فيشر ؛ | # 01-913-806 | |
| عازلة الفوسفات ، سورنسون s ، 0.2 M درجة الحموضة 7.2 ؛ | EMS | # 11600-10 | |
| حلقة فلاش | B & H صور فيديو | سيجما EM-140 DG | |
| حبة روبي ، قطرها 1 مم | ميلر للبصريات | # نظارات السلامة MRB10MD | |
| 3M | فيشر | # 19-070-940 | |
| منظار العين بالليزر | هايدلبرغ الهندسية | HRA2 | |
| مقص ، زنبرك منحني | Roboz | # RS-5681 | |
| حاويات حادة | فيشر | # 1482763 | |
| سلك مصراع ، جهاز OCT | الطيفي من نيكون | MC-DC2 | |
| هايدلبرغ الهندسية | Spectralis HRA & OCT | https://www.heidelbergengineering.com/media/e-learning/Totara-US/files/pdf-tutorials/2238-003_Spectralis-Training-Guide.pdf | |
| محمل كروي من الفولاذ المقاوم للصدأ ، قطر 25.4 مم | McMaster-Carr | # 9529K31 | |
| صبغة وسم الأنسجة ، أسود | Cancer Diagnostics Inc | # 0727-1 | |
| شفرات تقطيع الأنسجة | Thomas Scientific | # 6767C18 | |
| Trephine ، | Stratis Healthcare | # 6718L | |
| (HDMI) بقطر 18 مم وسلك للكاميرا الرقمية | B& H Photo Video | BH # COHD18G6PROB | للعرض المباشر وعرض الكاميرا عن بعد ميزات |
| الشمع والوردي الأسنان | EMS | # 72670 | |
| أدوات تطبيق خشبية | بيوريتان | # 807-12 |
المراجع
- Spaide, R. F., et al. Consensus nomenclature for reporting neovascular age-related macular degeneration data: Consensus on neovascular age-related macular degeneration nomenclature study group. Ophthalmology. 127 (5), 616-636 (2020).
- Spaide, R. F., Ooto, S., Curcio, C. A.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
