يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

إنشاء نموذج للفئران الناسور الفموي الأنفي

2.3K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/65578

⸱

سبتمبر 8, 2023

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1State Key Laboratory of Oral Diseases and National Clinical Research Center for Oral Diseases and Department of Oral Maxillofacial Surgery, West China Hospital of Stomatology, Sichuan University, 2State Key Laboratory of Oral Diseases and National Clinical Research Center for Oral Diseases and Department of Head and Neck Oncology, West China Hospital of Stomatology, Sichuan University, 3State Key Laboratory of Oral Diseases and National Clinical Research Center for Oral Diseases and Eastern Clinic, West China Hospital of Stomatology, Sichuan University, 4State Key Laboratory of Oral Diseases and National Clinical Research Center for Oral Diseases and Department of Oral Prosthodontics, West China Hospital of Stomatology, Sichuan University

في هذه المقالة

ملخص

توضح هذه المقالة إجراء خطوة بخطوة لإنشاء نموذج الفئران مع الناسور الفموي. تم إنشاء الناسور الفموي الأنفي عن طريق استخدام الكي العيني الساخن لإتلاف جزء خط الوسط من الحنك الصلب ، مما أدى إلى تكوين فتحة بين تجاويف الفم والأنف.

الملخص

تقدم هذه الدراسة طريقة تستخدم الكي العيني الساخن لتطوير نموذج قابل للتطبيق لفحص الناسور الفموي الأنفي. تم استخدام الفئران C57BL / 6 لإنشاء نموذج الناسور الفموي الأنفي (ONF). لإنشاء ONF ، تم تخدير الفئران وشل حركتها وكشف حنكها الصلب. أثناء العملية الجراحية ، تم إحداث إصابة مخاطية كاملة السماكة 2.0 × 1.5 مم في خط الوسط من الحنك الصلب باستخدام الكي العيني. كان من الضروري التحكم في حجم ONF وتقليل النزيف من أجل ضمان نجاح التجربة. تم التحقق من فعالية نموذج ONF في اليوم 7 بعد العملية ، بما في ذلك التقييمات التشريحية والوظيفية. أكد وجود الحاجز الأنفي داخل تجويف الفم وتدفق الماء المعقم من الخياشيم عند الحقن في تجويف الفم الإنشاء الناجح لنموذج ONF. أظهر النموذج ناسور فموي أنفي عملي وناجح ، يتميز بمعدل وفيات منخفض ، وتغيرات كبيرة في الوزن ، واختلاف ضئيل في حجم ONF. قد تنظر الدراسات المستقبلية في اعتماد هذه المنهجية لتوضيح آليات التئام جروح الحنك واستكشاف علاجات جديدة للناسور الفموي الأنفي.

المقدمة

الناسور الفموي الأنفي (ONF) ، وهو فتحة غير طبيعية بين تجاويف الفم والأنف ، يظهر سريريا كعيب في منطقة هيكلية من العملية السنخية إلى اللهاة ، والتي تحدث عادة كمضاعفات بعد إصلاح الحنك المشقوق1. يعاني المرضى الذين يعانون من ONF من ارتجاع الطعام واضطرابات النطق وضعف وظيفة البلعوم ، مما يؤثر بشكل كبير على نوعية حياتهم2،3،4. يتراوح معدل ONF بعد الجراحة من 2.4٪ إلى 55٪ بسبب عوامل مثل عرض الشق ونوع Veau والطريقة الجراحية5،6،7،8. بالإضافة إلى ذلك ، فإن معدل التكرار بعد إصلاح ONF مرتفع ، يتراوح من 0٪ إلى 43٪ 9.

أظهرت العديد من العلاجات الجديدة مؤخرا واعدة في مجال ONF ، بما في ذلك المواد المختلفة والأدوية والتقنيات الجديدة 10،11،12،13،14،15،16،17. يعد التقييم الدقيق للآثار العلاجية أمرا ضروريا لأنه يوفر الأساس لاختيار علاجات ONF وتطويرها. ومع ذلك ، فإن الحصول على تقييم صالح على المدى القصير للآثار العلاجية بخلاف الجراحة يمثل تحديا ، حيث تختلف خصائص ONFs بين المرضى المختلفين. لذلك ، يعد إنشاء نموذج مرض ONF ضروريا للتحقق من فعالية طرق العلاج هذه.

لعدة عقود ، ابتكر الباحثون نموذج الناسور الفموي الأنفي (ONF) في أنواع حيوانية مختلفة ، بما في ذلك الفئران18،19 ، والخنازيرالصغيرة 20،21 ، والخنازيرالصغيرة 22 ، 23 ، حيث تمتلك هذه الأنواع حنكا صلبا كبيرا مناسبا للتلاعب الجراحي. ومع ذلك ، فإن الفئران لديها تسلسل جيني وجينوم كامل مشابه لجينوم البشر ، مما يجعلها نموذجا مهما للبحث وتطوير أدوية جديدة24،25،26. علاوة على ذلك ، تقدم الفئران اختلافا طفيفا من دفعة إلى أخرى ، مما يجعلها خيارا مناسبا لإنشاء نموذج ONF12،13،27.

ومع ذلك ، لم يتم وصف الخطوات التفصيلية لإنشاء ONF ، ولم يتم أخذ استقرار حجم ONF في الاعتبار. بالإضافة إلى ذلك ، اعتمد التحقق من تكوين ONF فقط على الملاحظة28 ، دون ضمان الاتصال المباشر بين تجاويف الفم والأنف. لم يتم إثبات ذلك من خلال وسائل أخرى ، مثل فقدان الفأر لوزن الجسم بسبب صعوبات في الأكل بسبب ONF. علاوة على ذلك ، لم يتم النظر في الاختلاف الطبيعي في حجم الجرح ، وهو أمر بالغ الأهمية للدراسات حول الأدوية أو المواد التي تعزز أو تمنع التئام الجروح. لذلك ، هناك حاجة ماسة لإنشاء نموذج ONF مستقر ومصدق عليه.

كان الهدف من هذه الدراسة هو تطوير نموذج عملي ل ONF يعالج القضايا المذكورة أعلاه ، على أمل أن يكون هذا البروتوكول بمثابة أساس للبحث المستقبلي حول آليات التئام الجروح الحنكية والعلاجات الجديدة ل ONF.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات الحيوانية في هذه الدراسة والموافقة عليها من قبل اللجنة الأخلاقية لكلية غرب الصين لطب الأسنان بجامعة سيتشوان. تم استخدام الفئران البالغة C57BL / 6 (إناث) في هذه الدراسة.

1. التحضير الجراحي

  1. اجمع الأدوات الجراحية اللازمة للإجراء: الإنبات ، الكي العيني ، المقص المجهري ، ملاقط الجراحة المجهرية ، المحاقن ، والإبر (26 جم × 0.63 بوصة) (الشكل 1 أ ، ب) (انظر جدول المواد).
    ملاحظة: قبل العملية الجراحية ، الأوتوكلاف الأدوات الجراحية ، بما في ذلك الكي العيني ، وملاقط الجراحة المجهرية ، ومقص الجراحة المجهرية ، عند 102.9 كيلو باسكال (1.05 كجم / سم2) و 121 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة.
  2. اجمع المستلزمات الجراحية المطلوبة: الستائر الجراحية ، وقفازات اللاتكس ، والقطن المعقم ، والصفائح المعقمة ، والرقائق المعدنية المعقمة ، ولوح الرغوة كمنصة جراحية ، والأربطة المطاطية (التي يمكن الحصول عليها عن طريق تمزيق قفاز اللاتكس الطبي) ، والشريط (الشكل 1 ج) (انظر جدول المواد).
    ملاحظة: استخدم مجموعة منفصلة من المستلزمات لكل ماوس ، بما في ذلك المحاقن والأغطية المعقمة للمجال الجراحي.
  3. نظف المنطقة الجراحية والجهاز (مصدر الضوء ، لوح الرغوة ، وجهاز صيانة درجة الحرارة ، انظر جدول المواد) باستخدام مناديل الكحول. قم بتغطية مقابض ومقابض الأدوات التي قد تكون مطلوبة أثناء الإجراء بورق معدني معقم.
  4. افتح الأدوات الفردية بشكل معقم وضعها بعناية في منطقة الجراحة. قم بتنشيط germinator (انظر جدول المواد) والأضواء للاستخدام أثناء الإجراء. ضع كي العيون في الإنبات وقم بتسخينه إلى 250 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة.

2. الإجراء الجراحي

  1. قم بإجراء تثبيت الماوس وافتح تجويف الفم باتباع الخطوات أدناه.
    1. حدد أنثى ماوس C57BL / 6J تزن 20-25 جم وتتراوح أعمارها بين 8 و 12 أسبوعا. منزل الماوس لمدة 7 أيام قبل إجراء أي إجراءات.
    2. تخدير الفأر عن طريق الحقن داخل الصفاق ل Zoletil50 (80 ملغم / كغم) و Xylazine (5 ملغ / كغ) (انظر جدول المواد). تطبيق مرهم العين العينية على عين الماوس. انتظر حتى لا يكون هناك استجابة قرصة إصبع القدم.
      ملاحظة: الماوس جاهز للإجراء عندما يكون غير قادر على الدوران بشكل مستقل.
    3. ثبت الماوس على لوح رغوي مبطن بألواح معقمة. استخدم الشريط لربط الماوس بالمنصة الجراحية في وضع ضعيف (الشكل 2 أ).
    4. افتح تجويف الفم للماوس. ضع إبرتين (26 جم × 0.63 بوصة) أمام مستوى الأذن المدارية واثنتين أخريين خلفها. ضع شريطا مطاطيا حول الإبر واعبر القواطع لإبقاء الفم مفتوحا. استخدم ملاقط الجراحة المجهرية لدعم فتح زوايا الفم (الشكل 2 ب).
      ملاحظة: تأكد من أن الحنك الصلب مكشوف بوضوح. ثبت اللسان تحت الشريط المطاطي لمنع انسداد مجال الرؤية والحرق أثناء التجارب اللاحقة.
  2. قم بإنشاء الناسور الفموي الأنفي (ONF) على الحنك الصلب (الشكل 3A-F).
    1. استرجع الكي العيني الذي تم تسخينه إلى 250 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. ضع طرف الكي على بعد 1 مم من تقاطع خط الوسط للحنك وخط الضاحك الأول ، مما يؤدي إلى إصابة مخاطية كاملة السماكة للحنك الصلب في خط الوسط.
      ملاحظة: تجنب حرق لسان الماوس.
    2. بعد بضع ثوان ، قم بإزالة الكي العيني عندما يتحول الغشاء المخاطي حول طرف الكي إلى اللون الأبيض.
    3. ضع الكي العيني في المنبت واستمر في تسخينه إلى 250 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. كرر الخطوة السابقة لتكبير الجرح حول الحواف حتى يصل طوله إلى 2.0 مم وعرضه 1.5 مم.
      ملاحظة: يجب أن يتبع كل امتداد حافة الإصابة الأخيرة. استخدم الفرجار ذو الورنية لقياس طول وعرض الإصابة. يجب أن تغطي الإصابة 10 ٪ من الحنك.
    4. استخدم مقص الجراحة المجهرية لإزالة أي أنسجة رخوة مشوهة زائدة حول الجرح. استخدم القطن المعقم لوقف النزيف ومنع اختناق الماوس بالاستنشاق. قم بقياس الجرح للتأكد من أنه يشكل إصابة مخاطية حنكية صلبة كاملة السماكة بقياس 2.0 × 1.5 مم في خط الوسط.

3. رعاية ما بعد الجراحة

  1. تطبيق ميلوكسيكام للفأر في وقت الاستيقاظ بعد العملية الجراحية، بجرعة 5 ملغ/كغ/يوم لمدة 3 أيام،تحت الجلد 29.
  2. ضع الماوس على جهاز صيانة درجة الحرارة حتى يستعيد وعيه بالكامل.
    ملاحظة: تأكد من وضع الماوس بطريقة تسهل التنفس. قم بتدوير الفئران كل 10-15 دقيقة لمنع تجمع الدم أو انهيار فصوص الرئة. بمجرد تسخين الماوس ، أعده إلى قفصه. توفير هلام معقم وتغذية مشعة في الجزء السفلي من القفص للفئران لتستهلك.

4. التحقق من خلق الناسور الفموي الأنفي

ملاحظة: يتم تقييم نجاح إنشاء الناسور الفموي الأنفي (ONF) في اليوم 7 بعد العملية الجراحية.

  1. تحضير المستلزمات الجراحية اللازمة: الشريط المطاطي ، الشريط ، المحاقن ، الستائر الجراحية ، قفازات اللاتكس ، الألواح المعقمة ، الرقائق المعدنية المعقمة ، ولوح الرغوة.
  2. ارتداء الستائر الجراحية والقفازات المعقمة للحفاظ على الظروف المعقمة. قم بتطهير لوح الرغوة ومصدر الضوء وجهاز صيانة درجة الحرارة بالكحول.
  3. تحفيز التخدير العام عن طريق الحقن داخل الصفاق من زوليتيل 50 (80 ملغ/كغ). انتظر حتى لا يكون هناك استجابة قرصة إصبع القدم. استخدم نفس الطريقة الموضحة في الخطوتين 2.1.3 و 2.1.4 لشل حركة الماوس وكشف الحنك الصلب.
  4. قم بإجراء التحقق الهيكلي التشريحي من خلال التأكد من أن الحاجز لا يزال مرئيا في موقع الجرح ، مما يشير إلى نجاح إنشاء ONF (الشكل 4 أ ، ب).
  5. إجراء التحقق الوظيفي: أغلق تجويف الفم للماوس وحقن الماء المعقم في تجويف الفم باستخدام حقنة معقمة. يتم تأكيد الإنشاء الناجح ل ONF عندما يتدفق السائل من أنف الماوس.
  6. ضع الماوس على جهاز صيانة درجة الحرارة (37 درجة مئوية) حتى يستعيد وعيه بالكامل. قم بتدوير الفئران كل 10-15 دقيقة لمنع تجمع الدم أو انهيار فصوص الرئة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

لتقييم جدوى واستقرار هذه الطريقة التجريبية ، تم تنفيذ نفس الإجراء على عشرة فئران ، وتم إجراء ملاحظات بشأن الوفيات ، والتغيرات في حجم الجرح ، ووزن الجسم ، والتحليل النسيجي. تم القتل الرحيم للفئران في اليوم 7.

أظهر الإجراء معدل وفيات منخفض. كان الكي العيني والإنبات ، الموضح في الشكل 1A-C ، الأدوات الرئيسية المستخدمة في هذه التجربة. تم إنشاء نموذج ONF وفقا للبروتوكول المقدم. من بين الفئران العشرة التي تم تشغيلها ، انتهت صلاحية واحدة ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

استكشف الباحثون العديد من المواد والأدوية والتقنيات الجديدة لعلاج ONF10،11،12،13،14،15،16،17. مع التقدم في العمليات الجراحية ، تم تقليل حدوث وتكرار ONF. ومع ذلك ، نظرا للخصائص الفريدة للمرض ، فإن عدد مرضى ONF في العيادة محدود ، مما يستلزم نموذجا موحدا لدراس...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

تم دعم هذا العمل من قبل برنامج البحث والتطوير ، ومستشفى غرب الصين لطب الأسنان ، وجامعة سيتشوان (RD-02-202107) ، وبرنامج دعم العلوم والتكنولوجيا في مقاطعة سيتشوان (2022NSFSC0743) ، ومؤسسة سيتشوان لعلوم ما بعد الدكتوراه (TB2022005) منحة إلى H. Huang.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

علوم المجهر شركة المماثل
قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
الإلكتروني المبتبات 66118-20معدات التدفئة والتطهير
قفازات اللاتكسAllmedأو أضواء مماثلة
أوليمبوسA1813
MeloxicamMedChemExpressHY-B0261مطحونة ؛ 5 مجم / كجم
أدوات الجراحة المجهرية (مقص وملاقط)شركة جيانغسو تونغوي للأجهزة الطبيةM-Y-0087أداة جراحية
لطب العيون الكيSuqian Wenchong Medical Equipment Co.1.00234E + 13أداة جراحية
قطن معقم ،Yancheng Begu Technology Co.أو
رقائق معدنية معقمةمماثلة Biosharpأو صفائح معقمة
مماثلة 3MXH003801129أو ستائر جراحية مماثلة
Yancheng Begu Technology Co.أو محاقن مماثلة
Yancheng Begu Technology Co.S-015301أو ما شابه
ذلك TapeBkmamlabأو
جهاز صيانة درجة الحرارةHarvard Apparatus   ؛LE-13-2104
زوليتيل 50فيرباك80 مجم / كجم

المراجع

  1. Alonso, V., et al. Three-layered repair with a collagen membrane and a mucosal rotational flap reinforced with fibrine for palatal fistula closure in children. International Journal of Pediatric Otorhinolaryngology. 127, 109679(2019).
  2. Garg, R., Shah, S., Uppal, S., Mittal, R. K. A statistical analysis of incidence, etiology, and management of palatal fistula. National Journal of Maxillofacial Surgery. 10 (1), 43-46 (2019).
  3. Mahajan, R. K., Kaur, A., Singh, S. M., Kumar, P. A retrospective analysis of incidence and management of palatal fistula. Indian Journal of Plastic Surgery. 51 (3), 298-305 (2018).
  4. Huang, H., et al. Validation of the Chinese Velopharyngeal Insufficiency Effects on Life Outcomes Instrument. Laryngoscope. 129 (11), E395-E401 (2019).
  5. Sakran, K. A., et al. Evaluation of Postoperative Outcomes in Two Cleft Palate Repair Techniques without Relaxing Incisions. Plastic and Reconstructive Surgery. , (2023).
  6. Sakran, K. A., et al. Evaluation of late cleft palate repair by a modified technique without relaxing incisions. Journal of Stomatology, Oral and Maxillofacial Surgery. 124 (4), 101403(2023).
  7. Sakran, K. A., et al. The Sommerlad-Furlow modified palatoplasty technique: postoperative complications and implicating factors. Laryngoscope. 133 (4), 822-829 (2023).
  8. Sakran, K. A., et al. Early cleft palate repair by a modified technique without relaxing incisions. The Cleft Palate-Craniofacial Journal. , (2022).
  9. Chen, J., Yang, R., Shi, B., Xu, Y., Huang, H. Obturator manufacturing for oronasal fistula after cleft palate repair: a review from handicraft to the application of digital techniques. Journal of Functional Biomaterials. 13 (4), 251(2022).
  10. Yussif, N., Wagih, R., Selim, K. Propylene mesh versus acrylic resin stent for palatal wound protection following free gingival graft harvesting: a short-term pilot randomized clinical trial. BMC Oral Health. 21 (1), 208(2021).
  11. Miron, R. J., et al. Platelet-rich fibrin and soft tissue wound healing: a systematic review. Tissue Engineering Part B: Reviews. 23 (1), 83-99 (2017).
  12. Ballestas, S. A., et al. Improving hard palate wound healing using immune modulatory autotherapies. Acta Biomaterialia. 91, 209-219 (2019).
  13. Ferreira, C. L., et al. Electrical stimulation enhances early palatal wound healing in mice. Archives of Oral Biology. 122, 105028(2021).
  14. Lindley, L. E., Stojadinovic, O., Pastar, I., Tomic-Canic, M. Biology and Biomarkers for Wound Healing. Plastic and Reconstructive Surgery. 138 (3 Suppl), 18s-28s (2016).
  15. Xu, Y., et al. Rapid Additive Manufacturing of a Superlight Obturator for Large Oronasal Fistula in Pediatric Patient. Laryngoscope. 133 (6), 1507-1512 (2022).
  16. Leenstra, T. S., Kuijpers-Jagtman, A. M., Maltha, J. C. The healing process of palatal tissues after palatal surgery with and without implantation of membranes: an experimental study in dogs. Journal of Materials Science: Materials in Medicine. 9 (5), 249-255 (1998).
  17. In de Braekt, M. M., van Alphen, F. A., Kuijpers-Jagtman, A. M., Maltha, J. C. Wound healing and wound contraction after palatal surgery and implantation of poly-(L-lactic) acid membranes in beagle dogs. Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 50 (4), 359-365 (1992).
  18. Suragimath, G., Krishnaprasad, K. R., Moogla, S., Sridhara, S. U., Raju, S. Effect of carbonated drink on excisional palatal wound healing: A study on Wistar rats. Indian Journal of Dental Research. 21 (3), 330-333 (2010).
  19. Zhu, T., Park, H. C., Son, K. M., Yang, H. -C. Effects of dimethyloxalylglycine on wound healing of palatal mucosa in a rat model. BMC Oral Health. 15 (1), 60(2015).
  20. Kirschner, R. E., et al. Repair of oronasal fistulae with acellular dermal matrices. Plastic and Reconstructive Surgery. 118 (6), 1431-1440 (2006).
  21. Rohleder, N. H., et al. Repair of oronasal fistulae by interposition of multilayered amniotic membrane allograft. Plastic and Reconstructive Surgery. 132 (1), 172-181 (2013).
  22. Kesting, M. R., et al. Repair of oronasal fistulas with human amniotic membrane in minipigs. British Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 48 (2), 131-135 (2010).
  23. Ayvazyan, A., et al. Collagen-gelatin scaffold impregnated with bFGF accelerates palatal wound healing of palatal mucosa in dogs. Journal of Surgical Research. 171 (2), e247-e257 (2011).
  24. Takao, K., Miyakawa, T. Genomic responses in mouse models greatly mimic human inflammatory diseases. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (4), 1167-1172 (2015).
  25. Rongvaux, A., et al. Development and function of human innate immune cells in a humanized mouse model. Nature Biotechnology. 32 (4), 364-372 (2014).
  26. Shan, L., Flavell, R. A., Herndler-Brandstetter, D. Development of humanized mouse models for studying human NK cells in health and disease. Methods in Molecular Biology. 2463, 53-66 (2022).
  27. Keswani, S. G., et al. Role of salivary vascular endothelial growth factor (VEGF) in palatal mucosal wound healing. Wound Repair and Regeneration. 21 (4), 554-562 (2013).
  28. Amanso, A. M., et al. Local delivery of FTY720 induces neutrophil activation through chemokine signaling in an oronasal fistula model. Regenerative Engineering and Translational Medicine. 7 (2), 160-174 (2021).
  29. Antiorio, A. T. F. B., et al. Administration of meloxicam to improve the welfare of mice in research: a systematic review (2000 - 2020). Veterinary Research Communications. 46 (1), 1-8 (2022).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

إصابة الحنك الصلبالكي العينيالتئام جروح الحنكإصابة المخاطيةفئران C57BL/6التحليل النسيجيالاستجابة الالتهابيةالتقنية الجراحية
إنشاء نموذج للفئران الناسور الفموي الأنفي
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.